高效液相色譜法測定腺苷鈷胺片的含量及含量均勻度

劉紅莉，宋更申，郭 毅，孫 婷，劉俊紅

(1.河北省藥品檢驗所，河北 石家莊 050011; 2.河北維爾康制藥有限公司，河北 石家莊 050031)

高效液相色譜法測定腺苷鈷胺片的含量及含量均勻度

劉紅莉1，宋更申1，郭 毅1，孫 婷1，劉俊紅2

(1.河北省藥品檢驗所，河北 石家莊 050011; 2.河北維爾康制藥有限公司，河北 石家莊 050031)

目的建立測定腺苷鈷胺片腺苷鈷胺含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法采用Inertsil ODS－3色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈－0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(15∶85，用磷酸調(diào)pH至3.2)為流動相，檢測波長260 nm，流速1.0 mL/min。結(jié)果腺苷鈷胺質(zhì)量濃度在20～500 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好，回歸方程A=8.797 36C+4.202 2(r=0.999 9)。結(jié)論HPLC法操作簡單，測定結(jié)果準確，可用于腺苷鈷胺片的含量和含量均勻度的測定。

高效液相色譜法;腺苷鈷胺片;含量測定

腺苷鈷胺片是維生素類藥物，可被人體直接吸收利用，活性強，與組織細胞親和力強，排泄較慢，主要用于巨幼紅細胞性貧血、營養(yǎng)不良性貧血、妊娠期貧血，亦用于神經(jīng)性疾患如多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)根炎、三叉神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹等的治療。腺苷鈷胺片系2005年版《中國藥典(二部)》收載品種[1]，其中含量測定方法是紫外分光光度法比色法，操作煩瑣，還使用劇毒氰化鉀，對人體危害很大，誤差也大。為此，筆者用高效液相色譜法測定該品種含量，報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。腺苷鈷胺對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為140658－200501);腺苷鈷胺片(市售品);乙腈(色譜純)，磷酸、磷酸二氫鉀(分析純)，水(高純水)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Inertsil ODS－3 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(15∶85，用磷酸調(diào)pH至3.2);檢測波長:260 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;進樣量:20 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 方法學考察

專屬性試驗:在上述色譜條件下，空白溶劑在腺苷鈷胺位置無吸收峰，表明溶劑對測定無干擾。按照模擬處方，配制不含主藥的溶液，同法測定。結(jié)果顯示，輔料在此色譜條件下有吸收峰，但不干擾腺苷鈷胺主峰的測定。腺苷鈷胺對照品經(jīng)酸、堿、氧化、光照、高溫破壞所產(chǎn)生的降解產(chǎn)物能與主成分的色譜峰完全分離(典型光譜見圖2。

線性關系考察:取腺苷鈷胺對照品，用水溶解并稀釋成20，50，100，200，300，400，500 μg/mL 的溶液，并依法測定含量。以腺苷鈷胺質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(C)、腺苷鈷胺的峰面積為縱坐標(A)繪制標準曲線。標準曲線A=8.797 36C+4.202 2，r=0.999 9(n=7)。結(jié)果表明，腺苷鈷胺質(zhì)量濃度在20～500 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

圖2 破壞試驗高效液相色譜圖

精密度試驗:取對照品溶液，照含量測定項下方法重復進樣6次，測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.17%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0，2，4，8，12 h時取樣測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.29%，表明12 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

回收率試驗:根據(jù)各藥廠提供的處方，稱取與主藥相應的最大量的各種輔料量，精密加入腺苷鈷胺對照品適量，再加水超聲處理20 min使溶解，加水定容至刻度，搖勻，取溶液，以4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心處理15 min，取上清液，用水配制成質(zhì)量濃度為測定質(zhì)量濃度80%，100%，120%的溶液，照含量測定項下的方法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。結(jié)果表明，該方法回收率良好，輔料不影響含量測定。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=9)

耐用性試驗:用3根不同的C18色譜柱，對同一批樣品進行試驗，結(jié)果3根柱子的分離度均良好。

2.3 樣品測定

含量:避光操作。分別取樣品30片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量(約相當于腺苷鈷胺2.5 mg)，置25 mL量瓶中，加水適量，超聲20 min使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，取溶液，以4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心處理15 min，取上清液作為供試品溶液。進樣 20 μL，測定含量(表 2)。

表2 樣品含量均勻度測定結(jié)果

含量均勻度:避光操作。取本品1片，除去包衣，置5 mL量瓶中，加水適量，超聲處理20 min使溶解，并用水稀釋至刻度，搖勻，取溶液，以4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，取上清液作為供試品溶液。精密量取20 μL，注入液相色譜儀，測定含量均勻度，結(jié)果見表2。

3 討論

原含量均勻度檢查是根據(jù)紫外吸收響應值間接求出每片的含量，高效液相色譜法能夠直接測定每片的含量，結(jié)果更準確。本品的規(guī)格很小，輔料及包衣對含量測定的影響很大，要盡量去除包衣，微露里面粉紅色片心，否則測定的含量結(jié)果會偏低。由于輔料的影響，該品種不適合用濾紙過濾，應采用離心的方法取上清液試驗。本品見光容易分解，所測項目均須嚴格避光操作。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005:816－817.

R927.7;R977.2

A

1006－4931(2011)02－0040－02

2009－10－25)