水飛薊素包合物和固體分散體的研究*

王建筑 李 菲 郝吉福 郭豐廣 張麗君

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

水飛薊素(silymarin)是天然的黃酮類化合物，為菊科植物水飛薊(silybummarianum gaertn.) 的果實(shí)經(jīng)提取精制而得的混合物，其主要成分為水飛薊賓、水飛薊寧以及水飛薊亭等。該藥毒性小，作用強(qiáng)，具有抗肝損傷，抗脂質(zhì)過氧化、清除自由基，抗輻射和抗胃潰瘍等作用。在保肝，降血脂，保護(hù)心肌，保護(hù)腦缺血，抗血小板聚集，防治動脈粥樣硬化等方面顯示出良好的治療效果[1]。

水飛薊素難溶于水，口服吸收差，生物利用度低，從而影響了其臨床療效。為此，國內(nèi)外正積極開發(fā)研制其新劑型，增加其溶解速度或改變其溶出和吸收特性，以提高水飛薊素的生物利用度[2]。本實(shí)驗(yàn)采用飽和水溶液法制備了水飛薊-β-環(huán)糊精(β-CD)包合物，溶劑-熔融法制備了其固體分散體，并對兩 種劑型的體外溶出度進(jìn)行測定，考察其對水飛薊素溶出度的促進(jìn)作用。

1 儀器與試劑

RCZ-8A型智能藥物溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠)；S-54紫外-可見分光光度計(jì)(上海棱光技術(shù)有限公司)；紫外透射反射分析儀(上?？等A生化儀器制造廠)；尼康SMZ-800變焦體視顯微鏡(上海千欣儀器有限公司)。

水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)品(上海融禾醫(yī)藥科技有限公司，批號081012)；水飛薊素原料藥(實(shí)驗(yàn)室自制)；β-環(huán)糊精(β-CD，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心)；聚乙二醇(PEG-6000，天津市巴斯夫化工有限公司)；十二烷基硫酸鈉(SDS，天津市巴斯夫化工有限公司)；吐溫80(Tween-80，天津市巴斯夫化工有限公司)；氫氧化鈉(淄博化學(xué)試劑廠)；磷酸二氫鉀(天津市巴斯夫化工有限公司)；所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1固體分散體的制備

采用溶劑-熔融法，按表1中F2～F5中的處方組成，分別取適量水飛薊素、PEG6000、十二烷基硫酸鈉和吐溫80，水飛薊素用少量無水乙醇溶解，與熔融的PEG6000載體混合均勻，攪拌蒸去溶劑并立即將熔融物傾倒在玻璃板上成薄膜，置于冰上使之迅速冷卻成固體，再將此固體放置于干燥器內(nèi)24 h，待形成硬脆狀固體后取出，置乳缽中研成細(xì)粉，過80目篩備用[4]。按表1中F6處方量分別稱取適量水飛薊素與PEG，置乳缽鐘混合研磨均勻，過80目篩，制得物理混合物。

表1 水飛薊素固體分散體處方組成

2.2包合物的制備

將4g β-環(huán)糊精置于盛有100ml蒸餾水的錐形瓶中，加熱使之溶解，后降溫40℃，置于水浴中保溫，將0.75g水飛薊素用5ml無水乙醇溶解成溶液，在一定轉(zhuǎn)速攪拌下，緩慢滴加到β-環(huán)糊精的溶液中，出現(xiàn)混濁后繼續(xù)攪拌1h。冰箱放置24h后抽濾，用無水乙醇洗滌包合物表面的水飛薊素，于40℃減壓干燥，得到黃褐色粉末，即為包合物[6]。

按0.75：4(W/W)的配比取水飛薊素與β-環(huán)糊精置于乳缽中混合均勻，過80目篩，得物理混合物。

2.3固體分散體和包合物的驗(yàn)證

2.3.1固體分散體顯微照片

圖1 水飛薊素固體分散體的顯微驗(yàn)證

(A水飛薊素原料藥 B聚乙二醇 C 固體分散體 D 物理混合物)

圖1比較可確定制備獲得了黃色結(jié)晶狀的水飛薊素的固體分散體。

2.3.2包合物顯微照片

圖2 水飛薊素包合物的顯微驗(yàn)證

(A水飛薊素原料藥 B β-環(huán)糊精 C 水飛薊素-β-環(huán)糊精包合物 D 物理混合物)

圖2比較可確定形成了黃色顆粒狀的水飛薊素-β-環(huán)糊精包合物。

2.3.3薄層色譜法對包合物進(jìn)行驗(yàn)證

圖3 包合物與對照品薄層色譜結(jié)果

由圖3可知，包合物與對照品在對應(yīng)處都出現(xiàn)了藥物斑點(diǎn)，證明藥物包合成功。

2.3.4紫外法對固體分散體和包合物進(jìn)行驗(yàn)證

圖4 紫外掃描法驗(yàn)證固體分散體和包合物

(A．水飛薊素原料藥 B.水飛薊素固體分散體 C.PEG6000-水飛薊素物理混合物D．水飛薊素-β-環(huán)糊精包合物 E.水飛薊素-β-環(huán)糊精物理混合物)

對比水飛薊素原料藥紫外吸收圖可知，固體分散體和包合物都能影響藥物的紫外吸收，使其最大吸收波長發(fā)生了紅移，這可能是因?yàn)楣腆w分散體和包合物形成后，其生色團(tuán)電子受到了微擾。

2.4固體分散體和包合物體外溶出度的測定

2.4.1水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取5mg水飛薊賓，用適量的無水乙醇溶解，置100 mL容量瓶中，再用無水乙醇稀釋至刻度，即得水飛薊賓無水乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(50 mg/L)。分別精密吸取水飛薊賓無水乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液1、3、5、7、9 mL于25 mL容量瓶中，加磷酸鹽緩沖液稀釋至所需刻度，分別標(biāo)記為1～5號。

將1～5號標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液于288 nm處測定吸收度(E1%1 cm=456)，pH6.8的磷酸鹽緩沖液為空白，以吸收度A對濃度作圖，得水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖5)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=0.0299C-0.0072，r =0.9992?；貧w方程表明水飛薊賓在2.12 mg/L-19.08 mg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

圖5 水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.2溶出度測定

2.4.2.1固體分散體

分別取表1中各處方樣品適量，按照2005年版《中國藥典》附錄規(guī)定的溶出度測定項(xiàng)下第二法(附錄XC)裝置，以pH6.8的磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)，水浴溫度為(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速為50 r?min-1，分別于0、5、10、20、30、45、60、90、120 min取樣5mL，同時補(bǔ)加介質(zhì)5 mL，用0.45μm的微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液2ml，置10ml容量瓶中按3.1項(xiàng)下方法測定紫外吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算累積溶出量，并對時間作圖得溶出速度曲線，每個處方的溶出速度測定重復(fù)3次[5]。

2.4.2.2包合物

分別取物理混合物與包合物適量(含有等量藥物)，按上述2.4.2.1中的測定方法進(jìn)行溶出度測定，在規(guī)定時間取樣，并測定紫外吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算累積溶出率，并以累積溶出度對時間作圖得溶出速度曲線。每個處方的溶出速度測定重復(fù)3次。

2.5結(jié) 果

2.5.1固體分散體對溶出速率的促進(jìn)作用

圖6 PEG6000加入量對固體分散體溶出的影響

由圖6 可以看出，水飛薊素與聚乙二醇形成的固體分散體累計(jì)溶出率明顯比二者的物理混合物大，且聚乙二醇基質(zhì)所占質(zhì)量比越大，溶出率越高。溶出速率大小依次為：1：7固體分散體〉1：5固體分散體〉1：7物理混合物。但兩種配比的固體分散體之間溶出率差異不明顯。

圖7 水飛薊素與聚乙二醇的物理混合物及1：5固體分散體對溶出度的影響

由圖7可以看出，水飛薊素固體分散體及其物理混合物都能在一定程度上增大水飛薊素在水溶性介質(zhì)中的溶解度，且固體分散體對藥物的溶出促進(jìn)程度可達(dá)70%以上，明顯比物理混合物的促進(jìn)程度大。

圖8 加入不同表面活性劑對1:5固體分散體中藥物溶出速度的影響

由圖8可知，十二烷基硫酸鈉及吐溫80兩種表面活性劑均能進(jìn)一步提高固體分散體的溶出度，使溶出度最大達(dá)80%以上，且等質(zhì)量的十二烷基硫酸鈉比吐溫80促進(jìn)藥物溶出度的程度更大一些。

2.5.2包合物對溶出速率的促進(jìn)作用

圖9 包合物及其物理混合物對溶出速率的影響

由圖9 可看出，水飛薊素與β-環(huán)糊精進(jìn)行物理包合形成包合物后，溶出度有了明顯增大，兩者的物理混合物也在一定程度上促進(jìn)了藥物溶出。

2.5.3固體分散體與包合物促進(jìn)藥物溶出程度的比較

圖6、7、8與圖9進(jìn)行比較可以看出，固體分散技術(shù)與包合技術(shù)都能明顯增大水飛薊素的溶出度，兩者相比，固體分散體的促進(jìn)作用更顯著，可達(dá)80%以上，β-環(huán)糊精包合物稍差一些，可達(dá)50%以上。

3 討論與結(jié)論

3.1固體分散體的制備

PEG6000固體分散體中載體量的增加有促進(jìn)其溶出速度的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能是由于水飛薊素形成分子及其聚集體、過飽和超微粒或亞穩(wěn)定晶型等分散狀態(tài)，而增加水飛薊素主要成分溶解度和溶解速度[6]。

在固體分散體中由于存在可溶性固體分散載體，抑制了已被高度分散的粒子聚集趨勢，同時由于載體對藥物溶出的促進(jìn)作用和對藥物的抑晶性，促進(jìn)了藥物的溶出[7]。

3.2包合物的制備

采用飽和水溶液法制備β-環(huán)糊精包合物時，要注意包合時的溫度在40℃左右，保證β-環(huán)糊精水溶液處于飽和狀態(tài)。

3.3溶出度的測定

由實(shí)驗(yàn)可知，水飛薊素固體分散體在pH6.8磷酸鹽緩沖液中累積溶出率高于水飛薊素β-環(huán)糊精包合物，確定其為增大水飛薊素溶出度的較優(yōu)選擇。但有實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，從溶解度比較，固體分散體在水、人工腸液中較包合物大，但在人工胃液中包合物大于分散體[8]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，固體分散技術(shù)與包合技術(shù)均能改善水飛薊素的溶解性能，水飛薊素固體分散體和β-環(huán)糊精包合物的體外溶出度分別為80%和50%，可能有助于提高水飛薊素的生物利用度。

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