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    正交試驗法優(yōu)選消痹顆粒的提取工藝

    2011-01-18 05:26:08高錦成石敏娟蒙麥俠陜西省中醫(yī)藥研究院西安710003
    陜西中醫(yī) 2011年1期
    關(guān)鍵詞:淫羊藿苷浸膏

    高錦成 石敏娟 蒙麥俠 張 紅 苗 彥 陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

    正交試驗法優(yōu)選消痹顆粒的提取工藝

    高錦成 石敏娟 蒙麥俠 張 紅 苗 彥△陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

    目的:優(yōu)選消痹顆粒的水提取工藝。方法:以淫羊藿苷為指標(biāo),再配合干膏率,以煎煮時間、加水量、煎煮次數(shù)為考察因素,應(yīng)用正交實驗法篩選最佳的水提工藝條件。結(jié)果:最佳提取工藝為藥材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。所得浸膏得率和淫羊藿苷含量均較高。

    消痹顆粒由淫羊藿、威靈仙等十余味中藥材組成,主要用于治療肝腎兩虛型痹證。生地、熟地、淫羊藿等八味藥材作為水提工藝的主要藥物,淫羊藿苷作為淫羊藿的主要代表成分。為了有效的控制該工藝,我們通過正交工藝設(shè)計,對消痹顆粒水提工藝采用高效液相色譜法測定淫羊藿苷的含量,結(jié)合干膏量兩個指標(biāo),確定最佳工藝。

    1儀器與試藥1.1 試藥 淫羊藿等八味藥材購于陜西省藥材公司;淫羊藿苷購于中國藥品生物制品鑒定所(批號0774-9904);甲醇為色譜純;其余試劑為分析純;水為蒸餾水。

    1.2 儀器 島津LC-2010高效液相色譜儀;BP211D型電子分析天平(德國塞多利斯天平有限公司)d=0.01mg;LXJ-Ⅱ型臺式離心機(南京第一醫(yī)療器械廠);DK-98-ⅡA型水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)。

    2方法與結(jié)果2.1 水提工藝正交設(shè)計 通過多因素的正交試驗,優(yōu)選水提取工藝的各項參數(shù)。以水提干浸膏得率及淫羊藿苷提取量作為指標(biāo),以選擇最佳的工藝參數(shù)。影響水提取的主要因素有加水量、提取時間和提取次數(shù),故我們選擇正交方式進行設(shè)計。為了系統(tǒng)考察水提取的工藝參數(shù),我們設(shè)計的因素與水平。見表1。

    表1 煎煮工藝條件正交試驗因素水平表

    三因素三水平,不考慮交互作用,故選擇L9(34)正交表進行正交試驗。按比例稱取1/5處方量,稱取生地、熟地、制附片、川斷、桑寄生、淫羊藿、補骨脂各20g,威靈仙30g。共計170g,平行9份,隨機取樣編為1~9個試驗號。按正交表L9(34)中每個試驗號要求進行,合并提取液,濾過,濾液供以下試驗備用。

    2.2 出膏量的測定 干浸膏得率測定:精密量取離心濾過后的濾液100mL,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,于105℃干燥3h,置干燥器中冷卻0.5h,迅速稱重,按下式計算干浸膏得率,結(jié)果見表2。

    2.3 淫羊藿苷的測定[1]色譜條件LC-2010高效液相色譜儀,色譜柱:C18柱(250mm×4.6mm,5μm);檢測波長:λ=270nm,以乙腈-水(30:70)為流動相。柱溫40℃。流速:1.0mL。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500。

    2.3.1 對照品的制備:精密稱取對照品3.60mg,置25mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得(制成每1mL含淫羊藿苷0.144mg的溶液)。

    2.3.2 樣品供試液的制備:按淫羊藿藥材0.2g量計,精密量取離心(3000轉(zhuǎn)/min)濾過后的濾液適量,置蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,殘渣用稀乙醇20mL轉(zhuǎn)移至三角瓶中,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率20kHz)1h,放冷,稱定重量,用稀乙醇補足減失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.3.3 測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以峰面積計算含量,結(jié)果見表2。

    2.4 結(jié)果

    表2 生地、附片、淫羊藿等水提正交試驗

    將正交試驗結(jié)果方差分析,結(jié)果見表3、表4。

    表3 浸膏得率方差分析

    表4 淫羊藿苷含量方差分析

    F0.1(2.2)=9.00;F0.05(2.2)=19.00;F0.01(2.2)=99

    以干浸膏得率為指標(biāo),表2中極差R值大小顯示,各因素作用主次為C>A>B,方差分析因素C有顯著影響,因素A、B影響不顯著,最佳工藝是A3B3C3;以淫羊藿苷含量為指標(biāo),各因素作用主次為C>B>A,方差分析結(jié)果表明,因素C有較大影響,且三因素中K2、K3均很接近,表明A2B2C2工藝組淫羊藿苷已經(jīng)可以提取完全,為節(jié)省工時,降低能耗,確定最佳工藝組合為A2B2C2。即藥材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。

    2.5 驗證試驗 由于優(yōu)選的工藝不在試驗的9次試驗中,故對其進行了驗證試驗,用同批藥材,按處方量1/20量取藥材,平行3份按照A2B2C2進行試驗,測定干膏率和淫羊藿苷含量,見表5。

    表5 驗證試驗結(jié)果

    由上表可見,以干浸膏得率和淫羊藿苷得量為評價指標(biāo),數(shù)據(jù)較穩(wěn)定,且干膏得率和含量均較高。故確定A2B2C2為最佳工藝,即藥材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。

    3討 論本實驗研究淫羊藿等八味藥材的水提工藝,因其主要有效成分為淫羊藿苷,故本實驗以干膏率及淫羊藿苷為考察指標(biāo),通過正交試驗結(jié)合方差分析進行優(yōu)選,結(jié)果表明,水提影響干膏得率和淫羊藿苷得率的主要因素均是煎煮次數(shù)。為節(jié)省工時,降低能耗,確定最佳工藝組合為A2B2C3。即藥材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。

    [1] 國家藥典委員會.中國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:229.

    @消痹顆粒/提取工藝

    R541.61

    A

    1000-7369 (2011)01-0090-03

    △西安碑林藥業(yè)(西安710048)

    (收稿2010-08-09;修回2010-09-15)

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