乳制品常見致病菌選擇性共增菌技術(shù)研究

張巧艷，何騰飛，范萍，平麗英，周育

（1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，杭州 310021；2.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，杭州 310014；3.中美華東制藥有限公司發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)室，杭州 310011）

乳制品常見致病菌選擇性共增菌技術(shù)研究

張巧艷1，何騰飛2，范萍3，平麗英3，周育1

（1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，杭州 310021；2.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，杭州 310014；3.中美華東制藥有限公司發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)室，杭州 310011）

以乳制品常見致病菌大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌為目標(biāo)菌，研究6種基礎(chǔ)培養(yǎng)基、2種培養(yǎng)模式、20種培養(yǎng)基添加劑對(duì)增菌的影響，并以無顯著抑制效應(yīng)的添加劑對(duì)背景微生物進(jìn)行了抑菌效應(yīng)研究，建立了一種選擇性富集目標(biāo)菌的ESS培養(yǎng)基。使用該培養(yǎng)基37℃靜止培養(yǎng)16 h，可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)菌的共增菌，對(duì)可能影響目標(biāo)菌檢測(cè)的乳制品中其他致病菌有一定抑制效果。

選擇性富集培養(yǎng)基；大腸桿菌；沙門氏菌；金黃色葡萄球菌；抑菌劑

0 引言

大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌常常同時(shí)污染乳制品，是引起食物中毒最常見的病原菌。大腸桿菌主要導(dǎo)致腹瀉和泌尿道感染。沙門氏菌可導(dǎo)致自愈性胃腸炎，重者可引起致死性傷寒。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌。多重PCR可在同一檢測(cè)平臺(tái)上快速檢測(cè)多種致病菌。當(dāng)乳制品受污染程度較低時(shí)，為防止漏檢，需要進(jìn)行增菌培養(yǎng)；當(dāng)背景微生物較多時(shí)，采用選擇性增菌技術(shù)，可提高多重PCR檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

國(guó)內(nèi)外選擇性共增菌培養(yǎng)基主要有：SVV[1]、SSL[2]和SEL[3]等。許一平[4]等報(bào)道的BSB培養(yǎng)基具有共增菌效果，但不具有選擇性。本研究針對(duì)乳制品中常見致病菌，探索一種能夠選擇性富集大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的共增菌技術(shù)，為以后建立多重PCR共檢平臺(tái)提供支撐。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料

菌種：Y-1為大腸桿菌（Escherichia coli）（CMCC 44102），Y-2為腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis）（CMCC 50041），Y-3為金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）（CICC 21600），Y-5為福氏志賀氏菌（Shigella flexneri）（CMCC 51571），Y-6為蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus）（CMCC 63301），Y-17為單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）（CICC 21633），Y-19為普通變形桿菌（Proteus vulgaris）（CMCC 49027）。Y-1，Y-2，Y-5均購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心；Y-3，Y-17均購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；Y-6為本實(shí)驗(yàn)室保藏菌種；Y-19購(gòu)自上海復(fù)祥生物科技有限公司。

化學(xué)試劑均為分析純，牛肉膏、酵母粉、蛋白胨、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、葡萄糖等生物試劑均為國(guó)產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 菌懸液制備

將供試菌分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24 h，轉(zhuǎn)接2次后用無菌生理鹽水梯度稀釋，接種時(shí)控制接種量為10～100 mL-1。

1.2.2 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的選擇

以Y-1，Y-2，Y-3為目標(biāo)菌，將它們分別各自接入LB，NB，BPW，UPB[5]，TSB，BSB中；37℃以150 r/min振蕩培養(yǎng)8，16，24 h；進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。

1.2.3 培養(yǎng)模式的選擇

將目標(biāo)菌分別各自接入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)和150 r/min搖瓶培養(yǎng)同步進(jìn)行，分別培養(yǎng)8，16，24 h，測(cè)定OD600值和進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。

1.2.4 添加劑的選擇

將目標(biāo)菌分別各自接入含有不同添加劑的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，以接入不含添加劑的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為陽性對(duì)照，37℃培養(yǎng)一定時(shí)間，測(cè)定OD600值，按下式計(jì)算抑制率。

以Y-5，Y-6，Y-17，Y-19為背景微生物，選擇對(duì)目標(biāo)菌無顯著抑制效應(yīng)的添加劑，按目標(biāo)菌的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定OD600值，計(jì)算抑制率，最終確定選擇性共增菌培養(yǎng)基的組成。

2 結(jié)果與討論

2.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的選擇

將目標(biāo)菌Y-1、Y-2和Y-3分別接入6種非選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌培養(yǎng)，結(jié)果見圖1～圖3所示。由圖1～圖3可以看出，培養(yǎng)8 h，BSB基本使3種目標(biāo)菌同步生長(zhǎng)，但增菌量極低，未能達(dá)到多重PCR的最低檢測(cè)限。其它5種培養(yǎng)基對(duì)3種目標(biāo)菌的平行增菌效果差異較大，最大增菌量與最小增菌量的比值均大于100。若共增菌培養(yǎng)僅8 h，可能培養(yǎng)過程處于生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)的菌會(huì)對(duì)其它目標(biāo)菌產(chǎn)生抑制，最終造成漏檢。培養(yǎng)16 h，LB和TSB的增菌效果相當(dāng)，總體上略勝于NB和UPB，但這4種廣譜增菌培養(yǎng)基均能使3種目標(biāo)菌菌量達(dá)到108mL-1以上，且從16 h至24 h，菌量幾乎沒有顯著增長(zhǎng)?？梢?，LB，TSB，NB和UPB增菌效果較好，培養(yǎng)16 h就能使3種目標(biāo)菌均基本進(jìn)入穩(wěn)定期。

TSB特別有利于Y-1的生長(zhǎng)，培養(yǎng)8 h，使其處于生長(zhǎng)高峰，以后進(jìn)入穩(wěn)定期和衰退期。過早的增殖不利于3種目標(biāo)菌的同步生長(zhǎng)。UPB曾被用于沙門氏菌、大腸桿菌O157∶H7和單增李斯特氏菌的同步富集培養(yǎng)[5]，顯然它對(duì)Y-1，Y-2和Y-3的各自增菌效果也較好，但沒有顯著優(yōu)勢(shì)，且成分相對(duì)復(fù)雜。BPW目前主要用于沙門氏菌、單增李斯特氏菌和阪崎腸桿菌的前增菌培養(yǎng)。用BPW培養(yǎng)目標(biāo)菌16 h，對(duì)桿菌（Y-1和Y-2）的增菌效果顯著優(yōu)于球菌（Y-3）。BSB在整個(gè)培養(yǎng)過程中增菌效果均不如其它培養(yǎng)基，可能與氯化鈉濃度較高有關(guān)，也反映了不同菌對(duì)鹽的耐受性不同。LB和NB成分均較簡(jiǎn)單，但培養(yǎng)后期LB增菌效果均略優(yōu)于NB。這里選擇LB為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

2.2 培養(yǎng)模式的選擇

選擇性富集培養(yǎng)基SVV[1]，SSL[2]和SEL[3]共增菌過程均采用搖瓶培養(yǎng)模式。搖瓶培養(yǎng)可保證好氧菌獲得充足的溶解氧，從而快速生長(zhǎng)。Y-1，Y-2和Y-3均為兼性厭氧菌，在有氧和無氧環(huán)境中均能生長(zhǎng)。將目標(biāo)菌各自接入LB中，分別進(jìn)行靜止培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)，結(jié)果如表1所示。由表1可以看出，培養(yǎng)8 h，無論在靜止?fàn)顟B(tài)下，還是在搖瓶狀態(tài)下，Y-1生長(zhǎng)速度顯著優(yōu)于Y-2和Y-3。培養(yǎng)16 h，搖瓶狀態(tài)下3種目標(biāo)菌的菌量均為靜止時(shí)的10倍左右，且比靜止時(shí)提早進(jìn)入穩(wěn)定期。培養(yǎng)24 h，搖瓶培養(yǎng)和靜止培養(yǎng)對(duì)Y-3的影響最顯著，可能由于該菌為需氧或兼性厭氧菌，在培養(yǎng)后期有氧代謝更易使其獲得能量，促進(jìn)生長(zhǎng)。

雖然在整個(gè)培養(yǎng)過程中搖瓶培養(yǎng)更有利于3種目標(biāo)菌的生長(zhǎng)，但是培養(yǎng)16 h和24 h，目標(biāo)菌菌量增加較少，而OD600值卻仍顯著增加，可能有氧代謝產(chǎn)物干擾了OD600值反映菌量的關(guān)系。靜止培養(yǎng)16 h，3種目標(biāo)菌均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期，此時(shí)細(xì)胞分裂仍較活躍，對(duì)添加劑的促進(jìn)或抑制較敏感，可通過OD600值的變化來反映添加劑的作用。熒光假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、炭疽桿菌等乳制品中可能的污染菌為專性好氧菌，在靜止條件下基本不能生長(zhǎng)。空腸彎曲菌為微需氧菌，肉毒梭菌為專性厭氧菌，它們雖然會(huì)污染乳制品，但靜止培養(yǎng)仍有一定量的氧氣存在，不利于該類菌生長(zhǎng)而干擾目標(biāo)菌的檢測(cè)。而且搖瓶培養(yǎng)消耗動(dòng)能，增加成本。所以以后采取靜止培養(yǎng)模式，培養(yǎng)時(shí)間為16 h。

將3種目標(biāo)菌同時(shí)接入LB中，靜止培養(yǎng)16 h，用Baird-Parker瓊脂平板和WS瓊脂平板分別計(jì)數(shù)（BP平板上Y-3為黑色菌落，其他兩菌不生長(zhǎng)；WS平板上Y-1為桔黃色菌落，Y-2為藍(lán)綠色菌落，Y-3不生長(zhǎng)。）。Y-1和Y-2菌落數(shù)均接近于108mL-1，Y-3僅能達(dá)到106mL-1，滯后于Y-1和Y-2至少10倍以上。以后可通過添加促進(jìn)劑或抑制劑來控制3種目標(biāo)菌的生長(zhǎng)速度。

2.3 添加劑的選擇

2.3.1 添加劑對(duì)目標(biāo)菌的作用

將各種添加劑以不同濃度分別加入LB中，研究它們對(duì)3種目標(biāo)菌的促進(jìn)或抑制效應(yīng)，結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，糖、醇類物質(zhì)提供微生物生長(zhǎng)所需的碳源。Y-1可利用乳糖進(jìn)行發(fā)酵，乳糖的存在大大促進(jìn)其生長(zhǎng)，但對(duì)Y-2和Y-3的促進(jìn)效果不顯著。阿卡波糖顯著抑制Y-3的生長(zhǎng)，可能與其抑制α-葡萄糖苷酶活力，影響Y-3對(duì)碳源的利用有關(guān)。水楊素對(duì)3種目標(biāo)菌無顯著抑制作用。甘露醇顯著促進(jìn)3種目標(biāo)菌的生長(zhǎng)。

維生素類物質(zhì)常作為某些菌的生長(zhǎng)因子，參與細(xì)胞代謝。煙酰胺是NADH和NADPH的前體，具有抗炎作用。煙酰胺對(duì)目標(biāo)菌作用緩和，只有當(dāng)質(zhì)量濃度較高時(shí)，才表現(xiàn)出對(duì)Y-2和Y-3一定的抑制效應(yīng)。對(duì)氨基苯甲酸是葉酸的前體。當(dāng)它濃度較低時(shí)，對(duì)Y-1有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，對(duì)Y-2和Y-3作用不明顯；隨著濃度的增加，抑制效果顯著增加；當(dāng)質(zhì)量濃度為0.50 g/100 mL時(shí)，3種目標(biāo)菌幾乎完全被抑制?？赡苡捎趯?duì)氨基苯甲酸合成葉酸后引起核蛋白合成受阻，從而達(dá)到抑菌的效果。

據(jù)報(bào)道，許多鹽類物質(zhì)對(duì)細(xì)菌有選擇性抑制作用。由表2可知，亞硫酸鈉、檸檬酸鈉、十二烷基硫酸鈉、硫代硫酸鈉均強(qiáng)烈抑制Y-3的生長(zhǎng)。較低濃度氯化鈉對(duì)Y-3的生長(zhǎng)略有促進(jìn)作用；當(dāng)質(zhì)量濃度較高時(shí)，Y-3略受抑制，但能耐高鹽維持生長(zhǎng)，而Y-1和Y-2受到強(qiáng)烈抑制。金黃色葡萄球菌能通過細(xì)胞內(nèi)積累甜菜堿來適應(yīng)培養(yǎng)基中的高鹽環(huán)境[6]。氯化鋰和亞碲酸鉀常用于抑制非葡萄球菌的微生物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氯化鋰對(duì)Y-3略有促進(jìn)作用，當(dāng)質(zhì)量濃度較高時(shí)，抑制Y-1的生長(zhǎng)。亞碲酸鉀對(duì)3種目標(biāo)菌無顯著抑制作用。檸檬酸鐵銨主要作為乳制品、小麥粉等的營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑，亦用于細(xì)菌培養(yǎng)基。表2所示，檸檬酸鐵銨對(duì)Y-2略有促進(jìn)作用，當(dāng)質(zhì)量濃度較高時(shí)，對(duì)Y-3有一定抑制作用。硫氰酸鉀曾被用作乳制品的非法保鮮劑，它對(duì)3種目標(biāo)菌無顯著抑制效果。磷酸氫二鉀為細(xì)胞代謝提供緩沖，避免細(xì)菌產(chǎn)酸導(dǎo)致pH值大幅下降而影響生長(zhǎng)。當(dāng)磷酸氫二鉀質(zhì)量濃度為0.10 g/100 mL時(shí)，對(duì)3種目標(biāo)菌無顯著影響；當(dāng)質(zhì)量濃度為0.50 g/100 mL時(shí)，強(qiáng)烈抑制Y-3的生長(zhǎng)；當(dāng)質(zhì)量濃度為1.00 g/100 mL時(shí)，對(duì)3種目標(biāo)菌均有較強(qiáng)的抑制作用?？梢?，磷酸鹽質(zhì)量濃度過高，也不利于細(xì)菌生長(zhǎng)，可能與細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和電子傳遞體系有關(guān)。

表1 靜止培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)對(duì)目標(biāo)菌增菌的影響

表2 添加劑對(duì)目標(biāo)菌增菌的影響

膽鹽類物質(zhì)通常用于抑制革蘭氏陽性菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，5號(hào)膽鹽強(qiáng)烈抑制革蘭氏陽性的Y-3，對(duì)革蘭氏陰性的Y-1、Y-2作用不顯著。去氧膽酸鈉質(zhì)量濃度較低時(shí)，對(duì)目標(biāo)菌的作用不顯著；質(zhì)量濃度較高時(shí)（0.20 g/100 mL），抑制Y-3的生長(zhǎng)，且抑制作用強(qiáng)于5號(hào)膽鹽。這兩種膽鹽對(duì)Y-2都略有促進(jìn)作用。此外，一些抗生素具有抑菌和殺菌活性。磷霉素可抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的早期合成。多粘菌素B可增加細(xì)胞的通透性。這兩種抗生素強(qiáng)烈抑制3種目標(biāo)菌的生長(zhǎng)（表2）。

抑菌劑抑制效果有濃度依賴性。為了使3種目標(biāo)菌在共增菌時(shí)能夠盡量達(dá)到較一致的生長(zhǎng)速度，選擇水楊素、甘露醇、煙酰胺、氯化鈉、氯化鋰、亞碲酸鉀、檸檬酸鐵銨、硫氰酸鉀、磷酸氫二鉀、去氧膽酸鈉為目標(biāo)添加劑，進(jìn)一步研究它們對(duì)背景微生物的作用。

2.3.2 目標(biāo)添加劑對(duì)背景微生物的作用

選擇對(duì)3種目標(biāo)菌無顯著抑制效應(yīng)的濃度，將各種目標(biāo)添加劑分別加入LB中，研究它們對(duì)Y-5，Y-6，Y-19的抑制作用，結(jié)果見表3。水楊素濃度較高時(shí)對(duì)Y-6有較顯著抑制作用，但對(duì)Y-19有一定促進(jìn)作用。考慮到水楊素對(duì)Y-3也有一定抑制作用（表2），共增菌時(shí)Y-3本身滯后于Y-1和Y-2，選擇水楊素不利于目標(biāo)菌的同步增菌。甘露醇對(duì)Y-5有較顯著促進(jìn)作用，對(duì)Y-6有一定抑制作用。由于甘露醇對(duì)目標(biāo)菌均有促進(jìn)作用（表2），有利于目標(biāo)菌的復(fù)活和快速生長(zhǎng)，選擇添加質(zhì)量濃度為1.00 g/100 mL。煙酰胺對(duì)Y-5，Y-6和Y-19均無明顯抑制作用。質(zhì)量濃度為2.00 g/100 mL氯化鈉和0.20 g/100 mL氯化鋰對(duì)Y-5和Y-6均有一定抑制作用。由于它們都對(duì)Y-3略有促進(jìn)作用（表2），還可用于調(diào)整Y-1和Y-2對(duì)Y-3的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)抑制。亞碲酸鉀對(duì)Y-5，Y-6和Y-19的抑制效果與目標(biāo)菌（表2）相當(dāng)。檸檬酸鐵銨、硫氰酸鉀對(duì)Y-19略有促進(jìn)作用，對(duì)Y-5和Y-6有一定抑制作用。但由于檸檬酸鐵銨在堿性環(huán)境中容易發(fā)生沉淀；而當(dāng)硫氰酸鉀與其相遇時(shí)，它們也會(huì)發(fā)生反應(yīng)，影響抑菌效果。低濃度硫氰酸鉀更有利于Y-3的增殖（表2）。兩者之中選擇質(zhì)量濃度為0.05 g/100 mL硫氰酸鉀作為添加劑。質(zhì)量濃度為0.10 g/100 mL磷酸氫二鉀對(duì)Y-5和Y-6有一定抑制效果。質(zhì)量濃度為0.05 g/100mL去氧膽酸鈉對(duì)Y-6有較顯著抑制作用，但它同時(shí)對(duì)Y-3有一定抑制作用；較低濃度時(shí)，對(duì)Y-6仍有一定抑制作用，對(duì)Y-3略有促進(jìn)作用。選擇其添加濃度為0.01 g/100 mL。所有目標(biāo)添加劑對(duì)Y-19抑制效果均不顯著。

將Y-17接入LB中，靜止培養(yǎng)16 h，測(cè)得的OD600值接近于0，不適宜計(jì)算抑制率。用平板計(jì)數(shù)獲得此時(shí)菌量為106mL-1，顯著低于3種目標(biāo)菌（表1）。篩選獲得的選擇性添加劑中硫氰酸鉀、去氧膽酸鈉對(duì)Y-17有一定抑制作用，質(zhì)量濃度為0.05 g/100 mL硫氰酸鉀抑制效果較好，可使Y-17菌量降低100倍。而檸檬酸鐵銨對(duì)Y-17幾乎沒有抑制效果。

表3 目標(biāo)添加劑對(duì)背景微生物增菌的影響

3 結(jié)論

以乳制品中常見致病菌大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌為目標(biāo)菌，建立了一種選擇性共增菌技術(shù)。該技術(shù)采取37℃靜止培養(yǎng)模式，培養(yǎng)時(shí)間為16 h，選擇性培養(yǎng)基組成為（g/100mL）：蛋白胨1.0，酵母粉0.5，氯化鈉2.0，甘露醇1.0，氯化鋰0.2，硫氰酸鉀0.05，去氧膽酸鈉0.01，磷酸氫二鉀0.10；pH值為7.0。使用該技術(shù)可同時(shí)富集大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌，對(duì)乳制品中可能存在的其他微生物有一定的抗干擾能力，為以后提高多重PCR快速檢測(cè)這3種菌的靈敏度和準(zhǔn)確性提供了保障。

[1]覃倚瑩,吳暉,肖性龍,等.選擇性富集沙門氏菌、副溶血弧菌和霍亂弧菌的共增菌培養(yǎng)基SVV[J].生物工程學(xué)報(bào),2009,25(10):1497-1507.

[2]劉園園,肖性龍,余以剛,等.一種能同時(shí)富集沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌的培養(yǎng)基[J].微生物學(xué)報(bào),2009,49(10): 1389-1396.

[3]KIM H,BHUNIA A K.SEL,a Selective Enrichment Broth for Simultaneous Growth of Salmonella enterica,Escherichia coli O157:H7, and Listeria monocytogenes[J].Applied and Environmental Microbiology,2008,74(15):4853-4866.

[4]許一平,陳福生.一種能同時(shí)富集沙門菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)基[J].微生物學(xué)通報(bào),2007,34(2):208-211.

[5]NAM H M,MURINDA S E,NGUYEN L T,et al.Evaluation of U-niversal Pre-enrichment Broth for Isolation of Salmonella spp.,Escherichiacoli O157:H7,and Listeria monocytogenes from Dairy Farm Environmental Samples[J].Foodborne Pathogenic Disease,2004,1(1): 37-44.

[6]PEDDIE B A,WONG-SHE J,RANDALL K,et al.Osmoprotective Properties and Accumulation of Betaine Analogues by Staphylococcus aureus[J].FEMS Microbiology Letters,1998,160(1):25-30.

Selective enrichment technology for three main pathogenic bacteria from dairy products

ZHANG Qiao-yan1,HE Teng-fei2,FAN Ping3,PING Li-ying3,ZHOU Yu1
(1.Institute of Quality and Standard for Agricultural Products,Zhejiang Academy of Agricultural Sciences,Hangzhou 310021,China;2.College of Pharmaceutical Science,Zhejiang University of Technology,Hangzhou 310014,China;3. Fermentation engineering laboratory,Sino-us east China pharmaceutical Co.,Hangzhou 310011,China)

The enrichment effect of 6 basic media,2 culture methods and 20 medium additives onEscherichia coli,Salmonella enteritidisandStaphylococcus aureusfrom dairy products were evaluated respectively by conventional detection methods.In order to suppress interference detection from other bacteria,10 additives which had no remarkable inhibitory effect on the three target bacteria were selected to study their actions on other pathogenic bacteria such as Shigella flexneri,Bacillus cereusand so on.A new selective enrichment broth(ESS)was formulated to allow a good recovery of the three target pathogens and a more acceptable inhibition of the interference bacteria within 16 h of still incubation at 37℃.

multi-pathogen selective enrichment broth;Escherichia coli;Salmonella enteritidis;Staphylococcus aureus;bacteriostat

TS252.1

A

1001-2230（2011）05-0026-05

2011-02-21

浙江省公益技術(shù)研究農(nóng)業(yè)項(xiàng)目（2010C32024）。

張巧艷（1978-），女，助理研究員，從事微生物檢測(cè)技術(shù)研究。

周育