GC-MS法檢測白油在雞體肌胃、腺胃和小腸中的殘留

劉亮，李陽友，李麗芳

(川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，四川 南充 637100)

GC-MS法檢測白油在雞體肌胃、腺胃和小腸中的殘留

劉亮，李陽友，李麗芳

(川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，四川 南充 637100)

目的:礦物油在人體內(nèi)可能導(dǎo)致健康問題，但在許多動(dòng)物養(yǎng)殖場和疫苗制造廠家仍然使用白油作為疫苗佐劑，了解白油在雞體肌胃、腺胃、小腸中的殘留情況。方法:通過一個(gè)模擬疫苗接種的模式，即采用礦物油注射15日齡雛雞，運(yùn)用GC-MS測定注射后不同時(shí)期雞體這些器官礦物油殘留的情況。結(jié)果:在注射56天后仍能從一些器官中檢測到礦物油殘留。結(jié)論:礦物油隨機(jī)體代謝緩慢，使用礦物油作為佐劑存在一定的食品食用安全隱患。

礦物油;GC-MS;代謝;安全隱患

礦物油是指石油烴類產(chǎn)品［1］，常在疫苗生產(chǎn)過程中使用，最經(jīng)典的油乳劑為弗氏完全佐劑(FCA)和弗氏不完全佐劑(FIA)［2］。由于FIA配方中含有礦物油成分，并且其致癌性在雄性Swiss小鼠中已經(jīng)得到證實(shí)［3］，因此，至今FIA沒有被FDA批準(zhǔn)為合法的佐劑。白油是礦物油的一種，為液體類烴類的混合物，主要成分為C15－C31的正異構(gòu)烷烴的混合物，依據(jù)黏度等性質(zhì)的不同，可分為7#、11#、15#、18#及24#等多種型號產(chǎn)品，目前國內(nèi)很多養(yǎng)殖場和疫苗生產(chǎn)廠家以白油作為佐劑使用［4］。我們推測:注射礦物油疫苗佐劑可能為食用性動(dòng)物提供的產(chǎn)品帶來潛在的安全問題。氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)方法作為一種新型檢測手段，廣泛用于復(fù)雜組分的分離與鑒定。本研究通過應(yīng)用GC-MS在雞肉中檢測礦物油的方法［5］，對15日齡雛雞注射7#白油，檢測注射后3天、7天、14天、28天、56天雞體肌胃、腺胃、小腸、血液中礦物油的殘留，對礦物油在雞體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究和闡述。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白油:7#取自成都某獸用疫苗生產(chǎn)廠;正己烷(色譜純)，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司;無水硫酸鈉(分析純)重慶化學(xué)試劑廠，200℃烘2小時(shí)備用;15日齡雛雞(溫氏麻矮1號)溫氏集團(tuán)。

1.2 儀器與設(shè)備

TRACE DSQTM氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Thermo Finnigan公司;5804R分式冷凍離心機(jī)，德國Eppendorf公司;PT2100組織勻漿器，瑞士Kinematica公司;KQ5200DB數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)條件

1.3.1 色譜條件:色譜柱:TR1-MS石英毛細(xì)柱(30m×0.25mm，0.25μm);升溫程序:100℃保持3分鐘，以10℃/min升至300℃，保持3分鐘;載氣(He)流速1.0 ml/min，壓力2.4 kPa，進(jìn)樣量1.0μl;分流比10∶1。

1.3.2 質(zhì)譜條件:電子轟擊(EI)離子源;電子能量70 ev;傳輸線溫度250℃;離子源溫度200℃;母離子m/z 285;激活電壓1.5 V;質(zhì)量掃描范圍m/z 50－650。

1.4 試驗(yàn)步驟和樣品制備

15日齡健康雛雞隨機(jī)分實(shí)驗(yàn)組與對照組，分五組每組5個(gè)平行，共50只。實(shí)驗(yàn)組右側(cè)腿部肌肉注射白油0.5 ml，30日齡前保育室飼養(yǎng)，室溫控制在(20－25)℃，密度控制在(10－11)只/平方米，飼喂全價(jià)粉料，自由采食，30日齡后轉(zhuǎn)常溫舍，改全價(jià)育成料，加料數(shù)量165g，密度控制在(4.8－6.1)只/平方米。不同周期宰殺，取需要檢測組織各1g，組織勻漿，血液樣品與取樣前已配制好的3%檸檬酸三鈉按1∶9的添加量制血液取樣量在4ml，加20 ml正己烷20℃超聲萃取1小時(shí)，浸提過夜。浸提液離心，取上層清液，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2ml用正己烷定容至10ml過無水硫酸鈉脫水，以待檢測。

2 結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)陽性圖譜如圖1所示，選取其中最主要的11種組分為參照，各組分相對白分含量總結(jié)，見表1。以28天為例，空白對照(以肌胃為例)及各組織器官總離子流圖如圖2－圖6所示，對測定的結(jié)果采用儀器與計(jì)算機(jī)聯(lián)機(jī)分析，計(jì)算機(jī)檢索NIST質(zhì)譜庫，按照總離子圖，類似碳?xì)浠衔?直鏈烷烴、支鏈烷烴、環(huán)狀烷烴)形式存在為陽性，通過與標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行對照，確認(rèn)不同屠宰期白油各烷烴組分在各組織器官內(nèi)部殘留情況，按照面積歸一化法確定其相對百分含量，并求平均數(shù)，其平均相對百分含量和標(biāo)準(zhǔn)偏差(Std)如表2－表5所示。

表1 白油陽性對照中主要烷烴成分鑒定結(jié)果

表2 不同屠宰期肌胃白油殘留成分平均相對百分含量及標(biāo)準(zhǔn)差

表3 不同屠宰期腺胃白油殘留成分平均相對百分含量及標(biāo)準(zhǔn)偏差

表4 不同屠宰期小腸白油殘留成分平均相對百分含量及標(biāo)準(zhǔn)偏差

表5 不同屠宰期血液白油殘留成分平均相對百分含量及標(biāo)準(zhǔn)偏差

試驗(yàn)選取7#白油中11種主要組分為陽性對照，在注射后3天、7天、14天、28天、56天分別檢測肌胃、腺胃、小腸、血液等組織器官礦物油殘留。結(jié)果發(fā)現(xiàn):肌胃白油殘留在7天左右達(dá)到峰值，56天時(shí)仍能檢出，說明殘留蓄積情況比較嚴(yán)重;腺胃在14天左右白油殘留達(dá)到峰值，56天時(shí)已檢測不到任何組分;小腸中白油殘留成分在14天左右時(shí)達(dá)到峰值，28天開始有所下降，56天時(shí)已經(jīng)檢查不到任何烷烴成分;血液在7天時(shí)白油組分含量最高，以后開始下降，56天時(shí)基本減少到最低水平，由于參與機(jī)體新陳代謝和血液循環(huán)，白油擴(kuò)散到此的速度較快，這一現(xiàn)象說明血液中礦物油的殘留值受注射部位礦物油殘留量影響較大;從結(jié)果中可以看出這11種烷烴，容易隨血液代謝擴(kuò)散到其他組織器官的是短鏈的、分子量較小的烷烴，如正十五烷、正十六烷、正十七烷、正十八烷等，而像9－辛基十七烷、正二十一烷這樣的長鏈的、結(jié)構(gòu)較復(fù)雜的、分子量大的烷烴隨代謝擴(kuò)散的速度較慢，或不易擴(kuò)散，因此在注射前期平均相對百分含量較高的往往是這些短鏈烷烴。正二十烷在白油組成中所占比重也較大，但由于分子量大，擴(kuò)散較慢，一般7天左右才會在組織器官中達(dá)到一定含量水平。在研究中還發(fā)現(xiàn)機(jī)體對礦物油的代謝的快慢存在一定的個(gè)體差異，尤其是對于那些相對百分含量較小的烷烴成分，在不同周期的個(gè)體內(nèi)有些組織器官檢測得出情況大不相同，這也是造成一些數(shù)據(jù)平均相對百分含量標(biāo)準(zhǔn)偏差較大的原因。

3 討論

白油是化妝品工業(yè)重要的原料，如果吸入其蒸化氣體，會出現(xiàn)嘔吐、頭痛、頭暈等癥狀［6］，工業(yè)上使用的“餅干噴涂油”就是白油或固體石蠟油，如果長期攝入可引起消化系統(tǒng)障礙及脂溶性維生素吸收障礙［7］，此外，往往還會造成該佐劑在注射部位局部形成小結(jié)、肉芽腫，有些動(dòng)物甚至?xí)袩o菌性化膿性炎癥反應(yīng)。有人應(yīng)用熒光共焦顯微鏡法發(fā)現(xiàn)礦物油會在植物細(xì)胞間隙隨機(jī)體代謝進(jìn)行擴(kuò)散［8］，本文的試驗(yàn)也能看出:白油成分在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)也可能會隨血液循環(huán)進(jìn)行機(jī)體代謝，對過去認(rèn)為礦物油很難被機(jī)體降解［9］，只局限于注射部位、不會隨機(jī)體擴(kuò)。

56一些烷烴殘留，說明礦物油代謝較慢。因此這種由疫苗帶入動(dòng)物體內(nèi)的蓄積作用不容忽視，醫(yī)學(xué)資料研究發(fā)現(xiàn)白油被人體誤食后，對人體造成的危害主要有急性中毒和慢性中毒。急性中毒嚴(yán)重時(shí)會引發(fā)油脂性肺炎甚至死亡;慢性中毒可引發(fā)皮炎、痤瘡等以及神經(jīng)衰弱綜合癥等［10］。本試驗(yàn)中只選取7#白油中11個(gè)主要烷烴組分為檢測對象，而礦物油中往往還含有重金屬、苯并芘、長碳鏈烷烴、芳香烴等多種有毒物質(zhì)，這些物質(zhì)食用后會刺激人體消化系統(tǒng)，達(dá)到一定含量時(shí)會導(dǎo)致急性中毒、嚴(yán)重腹瀉、昏迷等癥狀，并可能危及人體神經(jīng)系統(tǒng)，嚴(yán)重影響兒童發(fā)育，增加老年人患老年癡呆癥的可能性［11］，因此危害更大。更為嚴(yán)峻的是苯并芘是目前世界公認(rèn)三大致癌物質(zhì)之首，其長期潛伏危害性不容忽視。單純地將注射部位的肉塊去掉，不能保證食用該動(dòng)物的安全性。有的化學(xué)物質(zhì)雖然不引起急性中毒，但長時(shí)間食用后，會在體內(nèi)積蓄起來，引起各種疾?。?2］。農(nóng)藥殘留一直是我國農(nóng)產(chǎn)品出口的重大隱患［13］，而在畜產(chǎn)品生產(chǎn)中也存在使用獸藥不夠規(guī)范［14］等現(xiàn)象，此次研究中涉及到的疫苗佐劑規(guī)范使用問題也屬于上述范疇之內(nèi)。我國現(xiàn)在提倡綠色食品工程［15］，其中面臨較多的是食品在生產(chǎn)、加工、包裝、儲藏、烹飪等環(huán)節(jié)中受到有毒有害的化學(xué)污染的問題［16］。21世紀(jì)的主導(dǎo)食品是綠色食品［17］，美國政府現(xiàn)已重視綠色食品生產(chǎn)方式的研究、推廣［18］，澳大利亞聯(lián)邦政府已于20世紀(jì)90年代中期推出了“潔凈食品”計(jì)劃［19］。日本制定綠色食品生產(chǎn)法［19］。歐盟的苛刻衛(wèi)生檢疫制度［20］，無一不說明當(dāng)今發(fā)達(dá)國家對食品衛(wèi)生安全方面的重視，而我國目前的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測體系與社會需求還存在較大差距［21］，食品質(zhì)量的好壞與食品原料的質(zhì)量有很大關(guān)系［22］，加入WTO，更對我國食品衛(wèi)生安全提出了更高的要求。從本研究也可以看出:要加大食品衛(wèi)生檢測力度，必須從源頭做起，杜絕一切可能存在的食品安全隱患。

本研究獲得如下結(jié)論:①雞體的肌胃、腺胃、小腸參與了白油的代謝;②白油不僅存在于注射局部，在體內(nèi)會隨血液循環(huán)和機(jī)體代謝到達(dá)其他組織器官。③白油在動(dòng)物體內(nèi)存在一定的代謝周期，各器官和組織代謝速率有所不同，代謝速率會受個(gè)體差，異和注射部位的影響，總體來說白油代謝速率較慢、周期長，殘留情況較為嚴(yán)重，使用白油作為佐劑對動(dòng)物性食品存在極大的食用安全隱患。

(致謝:感謝西南民族大學(xué)食品科學(xué)教研室提供儀器設(shè)備的使用，唐善虎教授的循循善誘，我校李健教授在文章寫作過程中給予的悉心指導(dǎo)，謹(jǐn)此致謝!)

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Determination of Mineral Oil Residues in Chicken's Myogastrica，Adenogastrica and Small Intestines by GC-MS

LIU Liang，LI Yang-you，LI Li-fang
(Experimental Animal Center，North Sichuan Medical College，Nanchong，Sichuan 637100，China)

Objective:Mineral oils may cause health problems in human body，but mineral oil was still used as vaccine adjuvant in many animal farms and vaccine manufacture companies.The objective of this study was to establish a GC-MS method to determine the residue of mineral oil components in chicken's myogastrica，adenogastrica and small intestines.Methods:15-day-old chickens were injected with mineral oil，then the mineral oil components were detected with GC-MS method after different days in a simulated vaccination model.Results:The use of GC-MS could determine the major components of mineral oil in chicken's peptic after 56 days.ConclusionsThis research showed that metabolism was very slowly，it's very dangerous to use the chicken which contained the mineral oil.

Mineral oil;Gas chromatography-mass spectrometry;Metabolism;Danger

1005-3697(2011)04-0299-06

R-332

A

四川省科技支撐計(jì)劃課題(2008fz0138)

劉亮(1982－)，男，助教，主要從事食品衛(wèi)生與安全工作。E-mail:blue0182@126.com

2011－05－10

(學(xué)術(shù)編輯:李健)

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