刺五加質(zhì)量分析研究進(jìn)展

閆麗麗 邱友紅 宮宏斌 劉廣鳳

（1、黑龍江完達(dá)山藥業(yè)股份有限公司，黑龍江 密山 158306 2、黑龍江省八五八農(nóng)場(chǎng)職工醫(yī)院，黑龍江 虎林 158419）

刺五加為五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr.et Maxim)Harms的干燥根、根莖及莖。其性溫，味微苦、辛，具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的功能，原用于脾腎陽虛、體虛乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多夢(mèng)[1]。隨著對(duì)刺五加化學(xué)成分和現(xiàn)代藥理作用研究的不斷深入，刺五加中總黃酮、紫丁香苷、刺五加總苷、異嗪皮啶等化合物被證實(shí)為其有效成分，具有多種藥理作用。現(xiàn)對(duì)其近年來報(bào)道的刺五加各類化學(xué)成分分析方法研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為刺五加深度研究利用提供文獻(xiàn)線索。

1 紫丁香苷的測(cè)定方法

1.1 薄層層析--紫外分光光度計(jì)法

將樣品粗粉置索氏提取器中，加無水乙醇回流提取，吸取50μl 提取液點(diǎn)于硅膠GCMC 板上，用氯仿-甲醇（8∶2）展開，紫外燈下定位，切下紫丁香苷暗藍(lán)色熒光部分，置試管中，另至薄層板上切取空白硅膠為對(duì)照，分別準(zhǔn)確加甲醇5.0ml，充分?jǐn)嚢枞芙?，離心，取上清液在266 ±1nm 處測(cè)吸收度，丁香苷線性范圍是 5～25μg/ml[2]。

1.2 光密度計(jì)法

用乙醇和氯仿-乙醇（5∶1）從粉碎試樣中萃取苷，用Silufol層TLC 分析萃取液，氯仿-甲醇-水（61∶33∶7）作展開劑，與 254nm 輻射檢測(cè)刺五加苷B[2]。

1.3 高效液相色譜法

1.3.1 樣品中的甲醇提取液進(jìn)樣測(cè)定，以氯仿-異辛烷-甲醇-冰醋酸（30∶15∶2∶3）為流動(dòng)相（1.0ml/分鐘），YWG-80 硅膠為固定相，270nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)，外標(biāo)法定量[2]。

1.3.2 樣品加甲醇，超聲處理（功率250W，頻率 33kHz）30 分鐘，放冷，提取液進(jìn)樣測(cè)定；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（20∶80）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm。理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000[1]。

1.3.3 樣品用60%甲醇作提取溶劑，超聲波提取1.5h,提取溫度為 55℃；檢測(cè)波長(zhǎng) 266 nm；流動(dòng)相為甲醇-水（28∶72）；流速（1.0ml/min）；柱溫 25℃,進(jìn)樣量為 10μl[3]。

1.3.4 樣品使用乙醇為提取劑，采用超聲萃取技術(shù)提取，用高效液相色譜法測(cè)定丁香苷的含量。色譜柱為C18（4.16mm×150mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水（1∶4），檢測(cè)波長(zhǎng)266nm，流速 1.0ml/min；柱溫 25℃[4]。

2 異秦皮啶的含量測(cè)定

2.1 比色法

異秦皮啶在堿性溶液中下色反應(yīng)1小時(shí)，在400nm 處測(cè)吸收度，計(jì)算含量。

2.2 薄層層析-比色法

精密稱定生藥粗粉，置索氏提取器中加乙醇回流提取，抽取100μl 濾液，點(diǎn)于硅膠G-CMC 板上，用己烷-乙酸乙酯-甲醇（24∶12∶3）展開，紫外燈下定位，切下，置試管中，另自薄層板上切取空白硅膠對(duì)照，分別加0.5%氫氧化鉀70%乙醇溶液5.0ml，充分?jǐn)嚢枞芙猓x心，取上清液在400nm 測(cè)定吸收度，異秦皮啶的線性范圍為 0.84～6.72μg/ml。

2.3 薄層掃描法

樣品的氯仿提取液點(diǎn)于硅膠G 板上，以環(huán)己烷-氯仿-95%乙醇（4∶2∶1）展開，將異秦皮啶與其它成分分離后，再用島津CS-910 型雙波長(zhǎng)薄層掃描儀進(jìn)行熒光掃描測(cè)定，激發(fā)波長(zhǎng)為365nm，發(fā)射寶成為500nm[2]。

2.4 高效液相色譜法

2.4.1 利用色譜柱為PhenomenexeC18 柱（4.6mm ×150mm，5μm）， 流 動(dòng) 相 ： 乙 腈 -0.05mol/l 一磷酸二氫鉀（5∶85），流速：0.9ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：344nm，進(jìn)樣量：20u1 測(cè)定了刺五加藥材中總異秦皮啶含量[5]。

2.4.2 利用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)343nm，理論板數(shù)按異秦皮啶峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，測(cè)定了刺五加原藥材中異秦皮啶含量[6]。

3 刺五加苷B、E(丁香苷和紫丁香樹脂苷)的測(cè)定

3.1 樣品用50%甲醇作提取溶劑回流提取，色譜柱：YMC C18；流動(dòng)相：A 為 0.1%磷酸水溶液，B 為乙腈，梯度洗脫：0 min：B(10%)，15 min：B(10%)，30 min：B(16%)，40 min：B(16%)，40.1 min：B(10%)；檢測(cè)波長(zhǎng):220nm；柱溫：35℃[7]。

3.2 樣品使用50%甲醇處理，色譜柱：diamonsil(250mm×4.6mm，5μm)；大連物化所保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脫：乙腈由13%等度2 min，再10min 內(nèi)線性變化到21%，然后在21min 中內(nèi)線性變化到22%。柱溫：40℃；流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)刺五加苷B 為265nm，刺五加苷E 為271nm。進(jìn)樣量2Oμl[8]。

4 總黃酮的含量測(cè)定

4.1 以蕓香甙為對(duì)照品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取生藥粗粉，用石油醚除色素，干燥。精密稱量樣品，乙醇熱回流提取，稀釋一定倍數(shù)，使用721 型分光光度計(jì)在420nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算總黃酮百分含量[9]。

4.2 以蘆丁為對(duì)照品,采用分光光度法測(cè)定刺五加莖中黃酮含量，以甲醇為溶劑連續(xù)回流提取。使用UV-7530 紫外分光光度計(jì)于510nm 處測(cè)定吸收度，按濃度與吸收度相關(guān)關(guān)系求得回歸方程為A=9.4000C-0.0320，R=0.9998（n=5），樣品平均回收率為98.77%，RSD 為1.34%[10]。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)：中華人民共和國(guó)藥典.化學(xué)工業(yè)出版社，2005.143-144

[2]鄭虎占等：中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用.學(xué)苑出版社，1999

[3]張艷華等：HPLC 法測(cè)定黑龍江省不同地區(qū)刺五加紫丁香苷的含量.植物研究，2005，25（4）：123-125

[4]曹建國(guó)等：刺五加丁香苷和總黃酮含量及其季節(jié)動(dòng)態(tài).植物學(xué)通報(bào)，2006，23（3）：269-274

[5]周國(guó)平等.刺五加中游離型和結(jié)合型異皮定的高效液相色譜法研究.藥物分析雜志，2001，21(3)：180

[6]鄭偉然.HPLC 法測(cè)定中藥材刺五加中異嗪皮啶的含量.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2003，17(1)：29

[7]楊敬芝等：HPLC 法測(cè)定不同產(chǎn)地的刺五加中刺五加苷B 和E 含量.中藥材，2005，28（8）：669-670

[8]孟祥才等；刺五加不同藥用部位及不同組織有效成分含量比較研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，2O（8）：1899-1900

[9]王雨亭等：刺五加與臨床.吉林科技出版社，1990，14-15

[10]王麗英等：分光光度法測(cè)定刺五加莖中黃酮含量. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，1999，10（12），884