前列通竅膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

　　摘要：目的：建立前列通竅膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)處方中的黃芪、水蛭、肉桂進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法(HPLC－ELSD)對(duì)樣品中的黃芪甲苷進(jìn)行含量測定。結(jié)果：薄層色譜法能對(duì)黃芪、水蛭、肉桂進(jìn)行專屬性鑒別；HPLC－ELSD法測定黃芪甲苷含量時(shí)，進(jìn)樣量在1.49～7.44μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，r=0.9991(n=5)，平均回收率為100.55％，RSD為1.59％(n=6)。結(jié)論：定性、定量方法簡單可行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。
　　關(guān)鍵詞：前列通竅膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法
　　中圖分類號(hào)：R284.1
　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007－2349(2010)06－0054－02
　　
　　前列通竅膠囊是本院男科治療前列腺增生所致膀胱逼尿肌功能受損的中藥復(fù)方制劑。由黃芪、水蛭、肉桂、蛇床子、烏藥等中藥組成。具有益氣補(bǔ)腎、祛瘀通竅的功效。臨床用于尿頻、尿急、排尿無力、小便不通或點(diǎn)滴不爽、尿細(xì)如線、尿線分叉，尿不盡，舌淡胖或舌淡紫，苔白潤或紫暗，脈沉遲或細(xì)弱或細(xì)澀等屬于腎陽虛弱及瘀阻水道證的前列腺增生癥。為了有效控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全有效，筆者根據(jù)處方中藥材的理化性質(zhì)，采用薄層色譜法對(duì)該制劑中黃芪、水蛭、肉桂進(jìn)行了定性鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法對(duì)方中黃芪主要成分黃芪甲苷進(jìn)行含量測定，報(bào)道如下。
　　
　　
　　1　儀器與試藥
　　
　　ZF－II四用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)；Agilent1100series高效液相色譜儀；Alheeh2000型蒸發(fā)光散射檢測器；cQ250超聲波清洗器(中船七院七二六所)；黃芪甲苷對(duì)照品，批號(hào)：110781－200710，水蛭對(duì)照藥材，批號(hào)：121061－200503，桂皮醛對(duì)照品，批號(hào)：110710－200812，均購自中國藥品生物制品鑒定所；硅膠G板(青島海洋化工廠)；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水；前列通竅膠囊(云南省中醫(yī)醫(yī)院制劑室)；陰性對(duì)照樣品按處方藥材比例制。
　　
　　2　方法與結(jié)果
　　
　　2，1　定性分析
　　2，1，1　黃芪的薄層色譜鑒別　取本品10粒，內(nèi)容物加水飽和的正丁醇20mL，超聲處理20min，濾過，殘?jiān)偌铀柡偷恼〈?0mL振搖提取，濾過，合并正丁醇液，以1％氫氧化鈉溶液洗滌2次。每次15mL，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；取缺黃芪的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液；取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各5μL，對(duì)照品溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷一甲醇一水(13：7：2)10℃以下放置的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)(圖1)。
　　
　　2，1，2　水蛭的薄層色譜鑒別　取本品10粒，內(nèi)容物加無水乙醇10mL，超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液；取缺水蛭的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液；取水蛭對(duì)照藥材1g，加無水乙醇5mL，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各5μL，對(duì)照藥材溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯(4：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)(圖2)。
　　2，1，3　肉桂的薄層色譜鑒別　取本品5粒，內(nèi)容物加乙酸乙酯20mL，超聲處理15min，濾過，濾液蒸至約2mL，作為供試品溶液；取缺肉桂的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液；取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成1mL含1μL的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各5μL，對(duì)照品溶液1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～900C)～乙酸乙酯(17：3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基肼乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)(圖3)。
　　2，2　黃芪甲苷含量測定
　　2，2，1　色譜條件　Agilent-ODS-3色譜柱(5μm，4.6mm×250mm)；流動(dòng)相：乙腈－水(33：67)；ELSD參數(shù)：漂移管溫度為100℃，氮?dú)饬魉贋?.0mL·min，進(jìn)樣量為20μL；柱溫：25C，流速為1.0mL·min。
　　2，2，2　對(duì)照品溶液的制備　精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品18.6mg，置入50mL容量瓶中，以甲醇溶解定容，制成每1mL含黃芪甲苷0.372mg的溶液，即得。
　　
　　2，2，3　供試品溶液的制備　取本品20粒，精密稱定4g，置索氏提取器中，加入甲醇適量，加熱回流提取4h，提取液回收甲醇至干。殘?jiān)铀?5mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液充分洗滌2次，每次40mL，正丁醇液回收溶劑至干，殘?jiān)铀?mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，以水50mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
　　2，2，4　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備與線性關(guān)系的考察　精密吸取對(duì)照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置入5mL量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。分別精密吸取20μL注入液相色譜儀中，按上述色譜條件分別測定其峰面積，以黃芪甲苷的進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)X(gg)為橫坐標(biāo)，峰面積的自然對(duì)數(shù)Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，其回歸方程為：Y=1.067X+7.910，r=0.9991，結(jié)果表明，黃芪甲苷在1.49μg～7.44μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
　　2，2，5　精密度試驗(yàn)　精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20μL，測定黃芪甲苷的峰面積，其峰面積的RSD=1.68％(n=5)，精密度良好。
　　2，2，6　穩(wěn)定性試驗(yàn)　精密吸取供試品溶液20μL，分別在0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣，按上述色潛條件測定，峰面積的RSD=1.97％(n=7)，結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。
　　2，2，7　重現(xiàn)性試驗(yàn)　精密稱取同一批樣品5份，依法測定。結(jié)果黃芪甲苷的平均含量為0.28mg·g，RSD=1.35％(n=5)，表明該方法重現(xiàn)性良好。
　　2，2，8　加樣回收率試驗(yàn)　采用加樣回收法，分別精密稱定已知含量(0.28mg·g)的樣品2.5mg，共6份，分成3組(2份／組)，每組分別精密加入3、4、5mL的黃芪甲蘳對(duì)照品溶液(濃度為0.346μg·mL)，依法測定含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。
　　
　　2，2，9　樣品含量測定　取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定。結(jié)果批號(hào)為20080631，20080632，20080633的3批樣品中，黃芪甲苷含量分別為0.28mg·g0.26mg·g，0.30mg·g。
　　
　　3　討論
　　
　　在黃芪的鑒別中，分別用1％氫氧化鈉溶液、氨試液洗滌正丁醇提取液，比較結(jié)果：用1％氫氧化鈉溶液可更有效的去除雜質(zhì)。
　　中國藥典中使用流動(dòng)相為乙腈－水(32：68)，由于該膠囊為中藥復(fù)方制劑，使用藥典中流動(dòng)相時(shí)，黃芪甲苷峰受到其他成分干擾。因此采用流動(dòng)相為乙腈－水(33：67)，此條件下黃芪甲苷與雜質(zhì)能更好的分離。
　　本試驗(yàn)表明，采用薄層色譜法和高效液相色譜法對(duì)前列通竅膠囊中成分進(jìn)行鑒別及含量測定，方法簡單、圖譜清晰、分離度好、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，因此可作為該制劑的質(zhì)量控制方