黃芩湯加減滴鼻劑對變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型血清組胺的影響

　　摘要：目的：研究黃芩湯加減滴鼻劑對變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型血清組胺的影響。方法：用卵白蛋白(OVA)造成變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型，隨機分為空白組，模型組，西藥組，中藥滴鼻劑高、中、低頻率組6組，連續(xù)給藥4周后處死，抽取腹主動脈血，離心后用ELASA法測量血清中組胺含量。結(jié)果：與模型組比較，西藥組、黃芩湯滴鼻劑高、中、低頻率組血清中組胺水平顯著降低(P<0.01)；黃芩湯高、中頻率組與西藥組無顯著性差異(P>0.05)，低頻率組與西藥組有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論：黃芩湯滴鼻劑能降低變應(yīng)性鼻炎血清中組胺水平，從而對變應(yīng)性鼻炎起到治療作用。
　　關(guān)鍵詞：黃芩湯；變應(yīng)性鼻炎；豚鼠模型；傷寒論；實驗研究
　　中圖分類號：R285.5
　　文獻標識碼：A
　　文章編號：1007－2349(2010)06－0051－03
　　
　　變應(yīng)性鼻炎(AllergicRhinitis，AR)，又稱過敏性鼻炎，是特異性個體接觸致敏原后由IgE介導(dǎo)的介質(zhì)釋放為開端的、有多種免疫活性細胞和細胞因子等參與的鼻黏膜慢性炎癥反應(yīng)性疾病，臨床主要表現(xiàn)為打噴嚏、流清涕、鼻塞和鼻癢。變應(yīng)性鼻炎是目前全球普遍存在的疾患，流行病學(xué)研究報道在世界范圍內(nèi)其患病率約為10％～25％，我國每年約有2000萬人患病，發(fā)病率約為37.74％。近30年來，變應(yīng)性鼻炎患病率明顯增加趨勢，其增加的趨勢尤其以西方經(jīng)濟發(fā)達國家更為顯著，并且它已成為目前到初級醫(yī)療診所(Prima－rycareclinics)就診的十大重要原因之一。目前，治療變應(yīng)性鼻炎的西藥主要有抗組胺藥、糖皮質(zhì)類固醇激素、減充血劑、抗膽堿藥和肥大細胞穩(wěn)定劑5類，但是其毒副作用明顯，抗藥性強，因此，深入研究變應(yīng)性鼻炎的預(yù)防和治療，具有重要的現(xiàn)實意義和社會意義。所以筆者采用瀉腸以清肺的法則，以黃芩湯加味制成滴鼻劑，以豚鼠變應(yīng)性鼻炎模型為實驗對象，觀察此方對變應(yīng)性鼻炎的療效，并初步探求其機制。
　　
　　1　材料和方法
　　
　　
　　1，1　實驗動物　健康豚鼠，雌雄各半，體重250～300g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號：sexk(京)2006－0001動物實驗環(huán)境為清潔級。實驗期間豚鼠飼養(yǎng)在標準條件下(單籠飼養(yǎng)、每12h明／暗循環(huán)，22±2℃)，自由攝取水和食物。動物在上述條件下適應(yīng)飼養(yǎng)1周后開始實驗，實驗前禁食水24h。
　　1，2　實驗藥物
　　1，2，1　黃芩湯加減　黃芩提取物，黃連提取物，白芍提取物，甘草提取物，薄荷提取物，按照比例2：1：1：1：0.5配成滴鼻劑。
　　1，2，2　陽性藥物　富馬酸酮替芬滴鼻液，規(guī)格：10mL；生產(chǎn)廠商：廣西博科藥業(yè)有限公司。
　　1，3　分組　選取健康活潑，外觀形態(tài)，行為體征無異常表現(xiàn)的豚鼠60只，按體重隨機分成空白對照組(A組)，AR模型組(B組)，中藥滴鼻劑小頻率組(c組)，中藥滴鼻劑中頻率組(D組)，中藥滴鼻劑高頻率組(E組)，富馬酸酮替芬滴鼻液陽性對照組(F組)，每組10只。
　　1，4　動物造模
　　對實驗組豚鼠進行腹腔注射，注射液為卵白蛋白(OVA)30nag，氫氧化鋁AI(OH)30mg，共同溶解于1mL生理鹽水中的混合懸液；同時用生理鹽水1mL為注射液對空白組進行同樣操作，隔日注射1次，共注射7次。配制0.5％的OVA生理鹽水溶液，將其加入多功能超聲霧化器的霧化杯中，將5只豚鼠(考慮密度)放入透明的豚鼠集體盒中，上面用潔凈的玻璃蓋好，將霧化器的氣霧導(dǎo)管通過玻璃蓋上的小孔導(dǎo)入豚鼠集體盒中，開啟霧化器，調(diào)節(jié)氣霧流量，每批10min左右，每批霧化量10mL，空白組用生理鹽水同樣操作每日吸人1次，連續(xù)5次。3d后，用2％OVA生理鹽水液進行滴鼻，每日1次，每側(cè)鼻孔0.1mL，連續(xù)4d?？瞻讓φ战M組用生理鹽水同樣操作。造模成功后，隔日給予卵白蛋白1g／L滴鼻以維持對鼻粘膜的刺激。
　　1，5　給藥　A與B組分別給予生理鹽水10μL滴鼻，2h1次，給藥4周；c組給予中藥滴鼻劑10μL滴鼻，6h1次；D組給予中藥滴鼻劑10μL滴鼻，4h1次；E組給予中藥滴鼻劑10μL滴鼻，2h1次，均給藥4周；F組給與富馬酸酮替芬滴鼻液10μL滴鼻，2h1次，給藥4周。
　　1，6　血清中組胺的測定　將豚鼠用3％戊巴比妥鈉(40mg／kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，剪開腹部皮膚，鈍性分離，暴露腹主動脈，用1次性注射器(預(yù)先用1：25肝素濕潤)抽取腹主動脈動脈血3mL，立即注入抗凝管中，靜置2h后3000r／min離心15min，分取血清，－20℃保存并檢驗。用ELISA法檢測血清中組胺濃度。
　　1，7　統(tǒng)計學(xué)分析　計量資料以均值士標準差(x±s)表示，應(yīng)用統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。組內(nèi)采用t檢驗，組間比較采用方差分析(ANOVA)。
　　
　　2　結(jié)果
　　
　　2，1　一般狀態(tài)　實驗中死亡大鼠共6只，均出現(xiàn)在霧化吸入后3d內(nèi)。其中模型組高頻率組豚鼠各死亡2只，西藥組、中頻率組豚鼠各死亡1只。主要死亡原因為霧化吸入時窒息死亡，死亡動物不進行統(tǒng)計。
　　2，2　藥物對血清中組胺的影響　各組血清中組胺比較見表1。
　　
　　3　討論
　　
　　變應(yīng)性鼻炎為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病名，是以鼻癢、噴嚏、流清涕、鼻塞為主要癥狀的一種常見病、多發(fā)病。根據(jù)其臨床表現(xiàn)與中醫(yī)學(xué)中的“鼽嚏”“鼻鼽”“鼽水”相類似?！秱摗分须m然沒有變應(yīng)性鼻炎的明確的說法，但也有相關(guān)的論述。《辨脈法》記載“若陰氣前通者，陽氣厥微，陰無所使，客氣內(nèi)人，嚏而出之，聲啼咽塞”，闡述了噴嚏形成的機制?！督饏T要略·腹?jié)M寒疝宿食病》亦有“夫中寒家，喜欠，其人清涕出，發(fā)熱色和者，善嚏”?！秱摗分械狞S芩湯本為在太陽病篇治療太陽少陽合病自下利的治利祖方，其在論中的本以治療太陽少陽兩經(jīng)合病，少陽郁火不伸。內(nèi)迫陽明，而致自利。172條有云：“太陽與少陽合病，自下利者，與黃芩湯；若嘔者，黃芩加半夏生姜湯主之?！狈接牲S芩、芍藥、甘草、大棗組成，其中黃芩苦寒，清解少陽及內(nèi)犯胃腸之邪熱；芍藥酸寒，泄熱斂陰和營，并于土中伐木緩急止痛；甘草、大棗益氣滋液，復(fù)其正氣。
　　中醫(yī)認為，鼻為肺之竅，氣體出入之門戶，協(xié)助肺行呼吸，主嗅覺。肺主氣，若其功能正常，肺鼻互相協(xié)調(diào)，完成其生理功能則鼻竅通利，氣體出入無阻，且香臭可辨，若肺臟氣機失調(diào)，不能宣發(fā)肅降而上逆，則鼻竅壅塞，通氣不暢而為病。而肺與大腸相表里這個理論，已經(jīng)成為中醫(yī)臟腑表里學(xué)說的重要組成部分之一，它不僅通過經(jīng)脈的絡(luò)屬得以體現(xiàn)，同時在生理、病理上形成了一種密不可分的依賴關(guān)系。且從胚胎發(fā)育的角度來看：肺、氣管是由腸的前腸發(fā)展而來，呼吸道上皮和腺體由原腸內(nèi)胚層分化而成，肺、氣管與腸的結(jié)構(gòu)來源是相同的。而臨床上肺部疾病與腸道疾病經(jīng)常相互影響。肺病及腸、腸病及肺時有發(fā)生，治法上也常用肺病治腸、腸病治肺。黃芩湯本以下利為主癥，其病位主在大腸，而鑒于肺與大腸在生理上相互聯(lián)系，在病理上相互影響，故黃芩湯可以通過瀉腸以清肺的治法治療肺系疾病。并且大量文獻表明，組成黃芩湯的四味藥均合有抗過敏成分：在抗變態(tài)反應(yīng)病方面，黃芩的主要功效成分是黃苓苷，白芍的主要功效成分是白芍總苷，甘草的主要功效成分則是甘草酸，而大棗的主要功效成分則是cAMP。因此，筆者認為，黃芩湯對于變應(yīng)性鼻炎甚至是變應(yīng)性疾病都有著一定的治療作用。
　　所以該實驗中，筆者模擬了變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型，觀察黃芩湯加減滴鼻劑對變應(yīng)性鼻炎的療效，并初步探求其機制。是否通過抑制組胺這個靶點來對變應(yīng)性鼻炎起到治療作用。組胺在AR反應(yīng)的多個環(huán)節(jié)中起主導(dǎo)作用，特別是在炎癥開始階段中有重要作用，肥大細胞脫顆粒釋放組胺和其他介質(zhì)的同時，也激活了一些細胞，導(dǎo)致細胞因子嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(EosinophilCationProtein，ECP)等釋放，后者具有很強的促炎作用，并能進一步活化淋巴細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞等，再次釋放介質(zhì)和細胞因子，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加劇，如此形成惡性循環(huán)，從而使AR病情遷延。
　　實驗結(jié)果表明，與空白組相比。模型組血清中組胺水平有極顯著提高(P<0.01)。與模型組比較，西藥組、黃芩湯滴鼻劑高、中、低頻率組血清中組胺水平有極顯著的降低(P<0.01)，提示這4組對于變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型血清中組胺水平的降低有著極大的促進作用。其中，黃芩湯高、中頻率組與西藥組無顯著性差異(P>0.05)，低頻率組與西藥組有顯著性差異(P<0.05)，提示高、中頻率組在降低血清中組胺水平方面與西藥組無顯著差異。
　　總之，該實驗中，黃芩湯滴鼻劑能極顯著降低變應(yīng)性鼻炎血清中組胺水平，從而對變應(yīng)性鼻炎起到治療作用。但是中藥方劑的作用機理為多部位、多環(huán)節(jié)、多靶點，因此，需要繼續(xù)研究其在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機制中的作用靶點，進一步開發(fā)中藥植物性滴鼻