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    VA、VD及其交互作用對(duì)肉雞免疫機(jī)能的影響

    2010-12-03 12:21:14馮永淼閆素梅楊鵬飛張海琴
    飼料工業(yè) 2010年7期
    關(guān)鍵詞:法氏囊滴度新城疫

    馮永淼 閆素梅 楊鵬飛 張海琴

    脂溶性維生素對(duì)家禽有重要的營養(yǎng)作用,在其細(xì)胞和體液免疫過程中也起著重要作用。維生素A是機(jī)體必需的維生素之一,還具有增加機(jī)體免疫力的作用。有研究報(bào)道不同劑量維生素A對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)影響(王利華,2009),維生素A、E交互對(duì)肉雞免疫機(jī)能影響(陳艷君等,2008);有研究表明,維生素A與D在動(dòng)物體內(nèi)存在相互作用,肉雞對(duì)它們的需要量不僅要考慮各自添加水平,還需考慮二者之間的相互比例。有報(bào)道稱維生素A過量添加可能會(huì)影響維生素D及其他營養(yǎng)素的吸收代謝,導(dǎo)致肉雞體內(nèi)代謝異常,但對(duì)于機(jī)體免疫機(jī)能的影響不清楚。本研究以免疫機(jī)能為指標(biāo),系統(tǒng)研究日糧維生素A、D水平對(duì)肉雞免疫機(jī)能影響及其相互作用,為合理確定維生素A、D的最適添加量及其比例提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    VA(500 000 IU/g)、VD3(500 000 IU/g)由上海羅氏提供。肉雞苗由北京華都雞場(chǎng)提供。

    1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

    試驗(yàn)選擇8日齡健康A(chǔ)A雄性肉雞384只,隨機(jī)分成16個(gè)處理組,每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)8只雞。各組雞的初始體重經(jīng)方差檢驗(yàn)差異不顯著(P>0.05)。

    1.3 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

    試驗(yàn)以玉米和大豆粕為主要原料,按照肉雞生長發(fā)育階段配制基礎(chǔ)日糧,分2~3周齡和4周齡兩階段飼養(yǎng),基礎(chǔ)日糧除日糧VA、VD按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加外,其它營養(yǎng)物質(zhì)均滿足需求,其配方和營養(yǎng)水平詳見表1。

    表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

    1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    試驗(yàn)采用4×4完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì),在基礎(chǔ)日糧中分別添加不同劑量的VA、VD構(gòu)成試驗(yàn)日糧。VA、VD分別設(shè)4個(gè)添加水平,VA為1 500、3 000、15 000和 45 000 IU/kg日糧;VD 為 500、1 250、2 500和5 000 IU/kg日糧。

    1.5 飼養(yǎng)管理

    試驗(yàn)雞采用涂塑肉雞籠單層籠養(yǎng),雞籠均采用紅外線加熱裝置自動(dòng)控溫,試驗(yàn)期內(nèi)保持24 h/d恒定光照和機(jī)械通風(fēng)。

    1.6 測(cè)試項(xiàng)目

    1.6.1 免疫器官指數(shù)

    28日齡時(shí),每重復(fù)組隨機(jī)抽取2只雞(每處理組共6只)稱重后屠宰,取胸腺、法氏囊、脾臟稱重,測(cè)定免疫器官指數(shù)。

    免疫器官指數(shù)(g/kg)=免疫器官重/體重

    1.6.2 新城疫抗體滴度(HI)

    試驗(yàn)肉雞8日齡用新城疫Ⅳ系苗滴鼻點(diǎn)眼接種,同時(shí)皮下注射新城疫油苗加強(qiáng)接種。28日齡時(shí),每重復(fù)組隨機(jī)抽取2只進(jìn)行采血,制備血清,采用微量血球血凝抑制試驗(yàn)法測(cè)定血清新城疫(ND)抗體滴度。

    1.6.3 CD4+(輔助性T細(xì)胞TH)、CD8+(抑制性 T細(xì)胞TS)及 CD4+/CD8+比值

    28日齡時(shí),每重復(fù)組隨機(jī)抽取2只,進(jìn)行CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+比值測(cè)定。

    1.6.4 單核-巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)

    28日齡采用碳廓清試驗(yàn)方法(林清華,1999)進(jìn)行測(cè)定。按如下公式計(jì)算碳廓清指數(shù)K值和吞噬指數(shù)a值。

    碳廓清指數(shù) k=(lgOD10-lgOD2)/8

    OD2:2 min 測(cè)得光密度值;OD10:10 min 測(cè)得光密度值。

    吞噬指數(shù)a=體重/(肝重+脾重)×k1/3

    1.7 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)利用SAS統(tǒng)計(jì)程序分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 VA、VD及其交互作用對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

    表2列出不同處理組肉雞的免疫器官指數(shù)結(jié)果。結(jié)果表明:日糧VA、VD的添加劑量及其交互作用對(duì)肉雞的脾臟指數(shù)均無明顯影響(P=0.51,P=0.51,P=0.45);對(duì)胸腺指數(shù)也無顯著影響(P=0.25,P=0.61,P=0.89)。

    日糧VA的添加劑量對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)有明顯的影響趨勢(shì)(P=0.08),其中,1500、3000與15000IU/kgVA組法氏囊指數(shù)間無明顯差異,但以15 000 IU/kgVA組最大,顯著高于45 000 IU/kgVA組。日糧VD的添加劑量對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)無明顯的影響(P=0.48),但VD水平增加至2 500 IU/kg時(shí)法氏囊指數(shù)較高,增加至5 000 IU/kgVD時(shí)略有降低。說明日糧VA水平增加至15 000 IU/kg時(shí),可進(jìn)一步刺激肉雞的免疫器官發(fā)育,但45 000 IU/kg的高劑量VA組不利于免疫器官的發(fā)育;日糧VD水平增加至1 250、2 500 IU/kg時(shí),可刺激肉雞的免疫器官發(fā)育,而5 000 IU/kg的高劑量VD組有抑制免疫器官發(fā)育的可能。

    日糧VA與VD的交互作用對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)有明顯的影響趨勢(shì)(P=0.11)。當(dāng)日糧VA水平較低,在1 500 IU/kg 時(shí),添加低、中劑量 VD(500~2 500 IU/kg)法氏囊指數(shù)較高,尤其VD為1 250 IU/kg時(shí)最高,而日糧VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí),法氏囊指數(shù)反而下降,提示高劑量的VD對(duì)VA有一定拮抗作用。當(dāng)日糧添加高劑量的VD(5 000 IU/kg)時(shí),添加不同劑量VA,其法氏囊指數(shù)與VA水平有關(guān),低劑量VA(1 500 IU/kg)組法氏囊指數(shù)低于添加中劑量VA處理組,提示高劑量VD引起的法氏囊指數(shù)下降通過適當(dāng)增加VA水平得以緩減;但VA水平過高時(shí)(45 000 IU/kg),法氏囊指數(shù)顯著降低,說明VA水平增加過高時(shí),緩減效果下降。當(dāng)日糧添加高劑量的VA時(shí),添加不同劑量VD,其法氏囊指數(shù)與VD水平有關(guān),低劑量VD(500 IU/kg)組法氏囊指數(shù)低于添加中劑量VD組,但高劑量VD(5 000 IU/kg)時(shí),法氏囊指數(shù)顯著降低。提示高劑量VA對(duì)法氏囊指數(shù)的降低作用通過適當(dāng)增加VD水平得以緩減,但VD水平過高時(shí),緩減效果下降。這些結(jié)果提示,VA對(duì)VD間存在的互作效應(yīng)主要體現(xiàn)在VA、VD水平添加過高的情況下,即高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用,和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用。

    2.2 VA、VD及其交互作用對(duì)肉雞新城疫抗體滴度的影響

    日糧VA水平對(duì)肉雞新城疫抗體滴度的影響不顯著(P=0.22),隨日糧VA水平增加,新城疫抗體滴度先呈現(xiàn)增加的趨勢(shì),之后又減小。日糧VD水平變化及其與VA的相互作用對(duì)新城疫抗體滴度的影響不顯著(P=0.91,P=0.93)。

    2.3 VA、VD 及其交互作用對(duì)肉雞吞噬指數(shù)的影響

    不同VA組的吞噬指數(shù)差異趨于顯著(P=0.12)。日糧VA水平為1 500、3 000、15 000 IU/kg時(shí),肉雞的吞噬指數(shù)均較高,尤以15 000 IU/kg時(shí)最高;日糧VA水平增加至45 000 IU/kg時(shí),吞噬指數(shù)有明顯的降低趨勢(shì)。日糧VD水平對(duì)肉雞吞噬功能無顯著影響(P=0.31),但其變化規(guī)律與VA影響相似,日糧VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí),吞噬指數(shù)呈下降的趨勢(shì)。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉仔雞吞噬指數(shù)無顯著影響(P=0.69)。

    2.4 VA、VD及其交互作用對(duì)肉雞外周血T細(xì)胞亞群CD4+、CD8+比例影響

    不同劑量VA對(duì)CD4+亞群比例影響差異趨于顯著(P=0.13),日糧 VA 水平為 1 500、1 5000、45 000 IU/kg時(shí),CD4+比例均較高,其中45 000 IU/kg時(shí)最高,有明顯高于3 000 IU/kgVA組的趨勢(shì)。不同劑量VD對(duì)CD4+亞群比例影響組間差異也趨于顯著(P=0.09),日糧VD水平為2 500 IU/kg時(shí),CD4+亞群比例明顯高于500 IU/kgVD組,而與1 250、5 000 IU/kg處理組間無明顯差異。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉仔雞CD4+亞群比例無顯著影響(P=0.42)。

    不同劑量VA、VD對(duì)肉雞外周血CD8+亞群比例沒有顯著影響(P=0.90,P=0.43),但VD水平為5 000 IU/kg時(shí),CD8+亞群比例有增加的趨勢(shì)。日糧VA、VD交互作用對(duì)肉仔雞CD8+亞群比例有明顯的影響趨勢(shì)(P=0.12)。當(dāng)VA水平較低(1 500 IU/kg)時(shí),低劑量VD(500~1 250 IU/kg)CD8+亞群比例較低;而VD水平增加至 2 500、5 000 IU/kg 時(shí),CD8+亞群比例增加,且VD水平為5 000 IU/kg時(shí)最高。提示在對(duì)CD8+亞群比例的影響方面,高劑量的VD對(duì)VA有一定拮抗作用。高劑量 VD(5 000 IU/kg)時(shí),添加低劑量 VA,其 CD8+亞群比例較高,而高劑量 VA(45 000 IU/kg)使 CD8+亞群比例降低。提示在對(duì)CD8+的影響方面,高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用通過增加VA水平得以緩減。VA與VD間存在的互作效應(yīng)對(duì)CD8+亞群比例的影響主要體現(xiàn)在VA、VD添加量過高的情況下,即高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用。

    不同劑量VA及VD,對(duì)肉雞外周血淋巴細(xì)胞亞群 CD4+/CD8+比值沒有顯著的影響(P=0.77,P=0.48)。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉仔雞CD4+/CD8+比值有顯著的影響(P=0.02)。由試驗(yàn)結(jié)果看出,日糧VA水平為1 500 IU/kg,VD水平為1 250 IU/kg時(shí),二者比值最高,但VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí)降到最低,說明在對(duì)CD4+/CD8+比值的影響方面高劑量VD對(duì)VA存在一定拮抗。

    3 討論

    VA作為機(jī)體重要的營養(yǎng)素之一,在機(jī)體免疫反應(yīng)中起到免疫調(diào)節(jié)作用,能提高雞的免疫力。VD在動(dòng)物體內(nèi)主要是通過1,25-(OH)2D3發(fā)揮其生理功能,對(duì)機(jī)體的免疫機(jī)能起重要作用。關(guān)于日糧VA、VD水平與肉雞免疫器官發(fā)育的影響研究報(bào)道較少,尤其關(guān)于高劑量的添加效應(yīng)及二者的互作效應(yīng)研究則更少。本試驗(yàn)結(jié)果得出,日糧VA水平在1 500~15 000 IU/kg范圍內(nèi)增加時(shí),肉雞法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)呈增加的趨勢(shì),以15 000 IU/kg時(shí)較高,但日糧VA水平進(jìn)一步增加至45 000 IU/kg時(shí),二者又呈明顯的降低趨勢(shì)。日糧VD的添加劑量在500~2 500 IU/kg范圍內(nèi)時(shí),肉雞的脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)較高,但VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí),二者呈降低的趨勢(shì)。日糧VA與VD水平對(duì)肉雞免疫器官法氏囊和胸腺發(fā)育的影響存在一定互作效應(yīng),主要表現(xiàn)在高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用。

    高士爭(zhēng)(1999)得出,日糧添加VA,肉雞血清抗體滴度和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化兩項(xiàng)指標(biāo)明顯高于不添加VA組,而且抗體滴度和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化在22 000 IU/kgVA水平時(shí)達(dá)到最大,在添加量為44 000 IU/kg時(shí),抗體滴度和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化開始下降。說明高水平VA,可顯著提高肉雞的體液免疫和細(xì)胞免疫功能,獲得最大的免疫反應(yīng),但過高劑量的增加反而降低了免疫機(jī)能。本試驗(yàn)結(jié)果得出,15 000 IU/kgVA組的新城疫抗體滴度及吞噬指數(shù)最高,45 000 IU/kgVA組吞噬指數(shù)最低,新城疫抗體滴度也較低,低劑量VA(1500 IU/kg)組的新城疫抗體滴度水平最低。日糧VD水平變化及其與VA的相互作用對(duì)新城疫抗體滴度和吞噬指數(shù)無明顯影響。說明提高日糧VA水平至15 000 IU/kg可促進(jìn)肉雞的體液免疫與非特異性免疫機(jī)能,而低劑量的VA(1 500 IU/kg),使體液免疫功能趨于下降,高劑量的VA(45 000 IU/kg)使體液免疫與非特異性免疫功能下降。

    CD4+/CD8+變化常用作衡量免疫系統(tǒng)激活強(qiáng)弱的參數(shù),其比例高表明機(jī)體免疫系統(tǒng)處于較強(qiáng)的激活狀態(tài),反之則表明免疫系統(tǒng)處于正?;蜉^弱狀態(tài),比例過高或過低都暗示免疫系統(tǒng)功能紊亂。本試驗(yàn)結(jié)果表明,日糧VA水平在1 500~45 000 IU/kg、VD在 500~5 000 IU/kg范圍內(nèi)增加,CD4+亞群比例存在不同程度的差異,CD8+亞群比例無明顯變化。 CD4+/CD8+比值雖然也無顯著變化,但高劑量VA(45 000 IU/kg)組最高,高劑量VD(5 000 IU/kg)組最低。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉雞CD8+亞群比例有明顯的影響趨勢(shì)(P=0.12),對(duì) CD4+/CD8+比值有顯著的影響(P=0.02)。說明日糧VA、VD對(duì)肉雞細(xì)胞免疫的影響存在一定互作效應(yīng),而且主要體現(xiàn)在高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用,但詳細(xì)的結(jié)果及影響機(jī)理還有待于進(jìn)一步探討。

    (參考文獻(xiàn)若干篇,刊略,需者可函索)

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