補腎固黃湯改善胚泡著床障礙小鼠子宮內(nèi)膜組織形態(tài)的實驗研究

王文娟 余 崢 江勝芳 張昌軍 彭海英

1 鄖陽醫(yī)學院附屬人民醫(yī)院（十堰 442000）

2 湖北中醫(yī)學院碩士生（武漢 430061）

胚胎種植關鍵在于具備有著床能力的胚胎和具有接受胚胎能力的子宮內(nèi)膜。隨著輔助生殖技術的發(fā)展，胚胎質(zhì)量得到了明顯的提高，但胚胎種植率和臨床妊娠率并無顯著上升，這說明子宮內(nèi)膜對胚胎的接受能力即子宮內(nèi)膜容受性，為胚胎種植的重要約束因素。如何提高子宮內(nèi)膜容受性是目前研究的熱點。本實驗探尋中藥補腎固黃湯對胚泡著床障礙小鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響及其機制，擬從中醫(yī)角度探索改善子宮內(nèi)膜容受性的新方法?，F(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料 （1）實驗動物：清潔級昆明小鼠，由鄖陽醫(yī)學院實驗動物中心提供，8～10周，體質(zhì)量25～35g，自由飲水飲食，室溫22～25℃，每天光照10h，黑暗14h。（2）藥物與試劑：補腎固黃湯（熟地黃、當歸、丹參等組成），所用中藥購自十堰市人民醫(yī)院中藥房，制成含生藥量1.2g/mL的煎劑，超凈臺內(nèi)分裝入無菌容器內(nèi)，并進行高壓消毒、封存，－20℃保存；米非司酮片由湖北葛店人福藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，研缽研碎，溶于丙二醇（國產(chǎn)分析純）中，配置成0.8g/mL懸濁液，4℃保存。

1.2 方法 （1）分組及給藥：將雌鼠隨機分成3組：正常組、中藥組、模型組，觀察其動情周期，中藥組每1個動情周期后期行補腎固黃湯0.3mL灌胃1次，其余兩組灌服相同體積生理鹽水，持續(xù)2個動情周期，并將動情期差異大的小鼠剔除。第3個動情周期，按雌雄2∶1～3∶1合籠，次晨發(fā)現(xiàn)陰栓者記為妊娠第1天（D1）。從D1開始，每天上午9：00中藥組灌服補腎固黃湯0.3mL，正常組、模型組灌服相同體積生理鹽水。（2）動物造模及標本收集：參考文獻[1]的造模方法，D4上午7：00中藥組、模型組皮下注射米非司酮溶液0.1mL。于D5晚上7∶00處死小鼠，收集標本。處死小鼠前10min尾靜脈注射0.5%臺盼藍溶液0.125mL，頸椎脫臼處死小鼠，取出子宮，放入生理鹽水中去除子宮周圍系膜、脂肪，取一側(cè)子宮投入4%多聚甲醛固定12h后，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠子宮大體形態(tài)觀察 見圖1。正常組小鼠較模型組小鼠子宮增粗增長，系膜充血，肉眼可見多個藍染點，左右對稱；中藥組小鼠較模型組小鼠子宮增粗，藍染點數(shù)目增多，且可見染色處膨隆，但與正常組比較數(shù)量較少；模型組小鼠子宮細長，除染色點處膨隆外，其余部分均未改變，藍染點明顯較前兩組少，且左右不對稱。

圖1 各組小鼠子宮大體觀

2.2 各組小鼠子宮內(nèi)膜組織學形態(tài)學表現(xiàn) 見圖2。光鏡下觀察子宮組織HE染色：正常組子宮腺體數(shù)量多，腺體彎曲，腺腔擴張，腺腔及宮腔中可見較多分泌物，腺體分布均勻，散布于間質(zhì)中，腺上皮呈單層柱狀排列，核圓形，位于細胞基底部，間質(zhì)疏松、水腫，子宮腔上皮較厚；中藥組腺體與間質(zhì)發(fā)育同步，腺體數(shù)量多、腺腔彎曲，間質(zhì)疏松、水腫，與正常組表現(xiàn)相似；模型組子宮腺體數(shù)量少，腺體小而直，分布不均勻，聚集于一處，有的間質(zhì)較致密，細胞體積變小，有的較疏松，表現(xiàn)為腺體、間質(zhì)發(fā)育不同步，子宮腔上皮、腺上皮細胞變矮、排列紊亂。

圖2 各組小鼠子宮內(nèi)膜HE染色圖片

3 討論

子宮內(nèi)膜容受性是指內(nèi)膜處于一種允許胚胎黏附、穿透并植入而導致胚胎著床的狀態(tài)，是子宮內(nèi)膜接受胚胎著床的一種綜合狀態(tài)[2]。正常子宮內(nèi)膜僅在一個極短的關鍵時期內(nèi)允許胚泡著床，這一時期約為正常月經(jīng)第20～24天，在這一時期子宮內(nèi)膜受激素、細胞因子、黏附分子及糖蛋白等多種因素的調(diào)節(jié)，發(fā)生一系列變化，表現(xiàn)出最大的胚泡種植容受性，被稱為“植入窗”期（簡稱窗口期）。

子宮內(nèi)膜容受性下降可以表現(xiàn)為窗口期子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學的改變。在尿LH峰日超聲檢測子宮內(nèi)膜形態(tài)：A型妊娠率明顯高于C型，子宮內(nèi)膜呈現(xiàn)C型改變是胚胎著床障礙的一個重要表現(xiàn)。李權(quán)等[3]比較A、C兩型窗口期子宮內(nèi)膜組織學形態(tài)，發(fā)現(xiàn)C型子宮內(nèi)膜的腺腔輕度增大，見核下空泡，A型子宮內(nèi)膜的腺腔增大明顯，腺腔內(nèi)分泌旺盛，表明C型子宮內(nèi)膜腺體發(fā)育遲緩，而A型則正常。陳秋梅等[4]發(fā)現(xiàn)高達81.5%的排卵障礙不孕者子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學表現(xiàn)異常。

米非司酮是一種孕激素受體拮抗劑，能競爭性地與孕激素受體結(jié)合，阻斷孕激素在靶器官發(fā)揮生理效應。圍著床期使用低劑量米非司酮拮抗孕激素的作用，可阻斷上皮孕激素受體的下調(diào)，及基質(zhì)旁分泌因子的合成，從而抑制上皮的分泌和基質(zhì)的蛻膜化，達到阻止胚胎著床的目的。研究顯示，米非司酮可以引起孕鼠胚泡著床率與著床胚胎數(shù)下降，使孕鼠子宮內(nèi)膜發(fā)育滯后，主要表現(xiàn)為內(nèi)膜腺體與間質(zhì)發(fā)育不同步[5]。本實驗也證實，米非司酮引起的模型組小鼠子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量少，腺體小而直，分布不均勻，聚集于一處，有的間質(zhì)較致密，細胞體積變小，有的較疏松，表現(xiàn)為腺體、間質(zhì)發(fā)育不同步，子宮腔上皮、腺上皮細胞變矮、排列紊亂。

中醫(yī)學認為，“腎主生殖”、“經(jīng)水出諸腎”，腎虛是不孕癥主要病因病機，腎虛則胎元不固，出現(xiàn)胚胎著床障礙。我國著名中醫(yī)婦科專家黃繩武老先生認為不孕癥重點在腎，旁及肝、脾。實驗研究顯示補腎中藥可以改善子宮內(nèi)膜組織學形態(tài)，增加子宮內(nèi)膜血流，提高子宮內(nèi)膜容受性相關標志物水平，從而改善子宮內(nèi)膜容受性。陳秋梅等[4]收集子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學表現(xiàn)異常的排卵障礙不孕者，給予以補腎為主的調(diào)經(jīng)孕育方藥，藥后內(nèi)膜形態(tài)學有明顯改善，增殖期和分泌期內(nèi)膜功能明顯活躍旺盛，接近或完全符合正常生理狀態(tài)下的表現(xiàn)。故本研究以補腎為核心，根據(jù)黃體期陽氣升發(fā)之理，以清代名醫(yī)傅青主之補腎助孕良方養(yǎng)精種玉湯（熟地黃、當歸、白芍、山茱萸肉）為基本方，加巴戟天、仙靈脾、續(xù)斷以溫補腎陽，佐以女貞子、阿膠、丹參等補血活血，以改善子宮血液循環(huán)，增加子宮內(nèi)膜容受性。本實驗證實，經(jīng)過中藥治療后，胚泡著床障礙小鼠較模型組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目增多，腺腔擴張、彎曲，腺腔、宮腔均有較多分泌物，與正常組表現(xiàn)相似，表明補腎固黃湯可以改善胚泡著床障礙小鼠子宮內(nèi)膜組織學形態(tài)。

本實驗發(fā)現(xiàn)米非司酮抗早孕的可能機制是促使子宮內(nèi)膜發(fā)育不良，而中藥補腎固黃湯可以改善米非司酮藥后子宮內(nèi)膜組織學形態(tài)，使其與正常保持一致，從而提高子宮內(nèi)膜容受性。米非司酮作為一種孕激素受體拮抗劑，其引起的胚泡著床障礙可以被補腎固黃湯對抗；孕激素可以促進子宮內(nèi)膜呈分泌期改變，使子宮內(nèi)膜組織學形態(tài)符合窗口期特征，適合胚胎著床。補腎固黃湯是否在孕激素分泌及其受體表達方面有特殊作用是本實驗下階段的研究重點。

[1]劉艷娟,黃光英,龔萍,等.對兩種胚泡著床障礙小鼠模型圍著床期子宮內(nèi)膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的比較研究[J].中國藥理學通報,2006,22(9）：1067 ～ 1070.

[2]高敏芝,李文英,劉桂梅,等.彩色多普勒超聲監(jiān)測子宮內(nèi)膜和內(nèi)膜下血流對IVF患者子宮容受性的預測價值 [J].生殖與避孕,2007,27(6）：399 ～403.

[3]李權(quán),譚曉珊,陳家仙,等.A、C型子宮內(nèi)膜種植窗期形態(tài)學特征[J].中國婦幼保健,2009,24(1）：84～86.

[4]陳秋梅,張樹成,賀彬,等.調(diào)經(jīng)孕育方藥對排卵障礙性不孕者子宮內(nèi)膜感受態(tài)的影響——組織形態(tài)學分析 [J].中醫(yī)藥學刊,2004,32(3）：464 ～467.

[5]劉艷娟,黃光英,楊明煒,等.對胚泡著床障礙小鼠子宮內(nèi)膜容受性的研究[J].生殖與避孕,2008,28(3）：144～149.