兩面針總堿對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究

徐 露 黃 彥 董 志 易 東

1 重慶醫(yī)科大學(xué)(重慶 400016）

2 重慶市中醫(yī)院(重慶 400021）

3 第三軍醫(yī)大學(xué)（重慶 400038）

潰瘍性結(jié)腸炎 (UC）是以直腸、結(jié)腸黏膜及黏膜下層的炎癥和潰瘍形成為病理特點(diǎn)的慢性非特異性腸道疾病，其發(fā)機(jī)理尚不完全清楚。兩面針系蕓香科花椒屬植物，具有驅(qū)風(fēng)濕、消腫止痛之功效，主要用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、跌打扭傷腫痛、神經(jīng)痛、牙痛等。兩面針生物堿為其主要有效成分。本研究旨在觀(guān)察兩面針對(duì)UC大鼠活動(dòng)指數(shù)(DAI）、血清腫瘤壞死因子α(TNF－α）、白細(xì)胞介素8(IL－8）、超氧化物歧化酶 (SOD）及丙二醛(MDA）的影響，以確定其對(duì)UC的治療作用，為開(kāi)發(fā)經(jīng)濟(jì)有效的治療UC藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級(jí)SD大鼠50只，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雄性，體質(zhì)量150～200g。隨機(jī)分為5組，每組10只。兩面針購(gòu)自安徽致和堂藥業(yè)有限公司（批號(hào)：20080508，純度＞85%）；2，4－二硝基氯苯（DNCB）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；柳氮磺胺吡啶(SASP）購(gòu)自上海三維制藥有限公司（批號(hào)：20080703）；血清TNF－α、IL－8檢測(cè)試劑盒購(gòu)自河南華美公司；SOD、MDA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成公司。

1.2 方法 （1）模型制備：模型對(duì)照組、SASP組和TAZ高、低劑量組大鼠采用DNCB和乙酸聯(lián)合建模法復(fù)制UC模型。大鼠頸背部用100mg/L Na2S脫毛后,以20g/L的DNCB丙酮液0.25mL(5滴）滴背，每日1次，連續(xù)14d，在第15日以直徑3mm導(dǎo)尿管經(jīng)肛門(mén)插入結(jié)腸腔8cm處，注入0.1%DNCB乙醇液0.25mL，第16日在同一部位注入8%乙酸溶液2mL，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)10s后，再用5mL生理鹽水沖洗。繼續(xù)飼養(yǎng)2周，造模動(dòng)物出現(xiàn)糞便稀溏和黏液膿血便等UC常見(jiàn)癥狀。（2）給藥方法：正常對(duì)照組與模型對(duì)照組大鼠給予生理鹽水1mL/200g，SASP組灌胃SASP 100mg/200g,兩面針高劑量組灌胃兩面針200mg/200g，兩面針低劑量組灌胃兩面針100mg/200g，每日灌胃1次，連續(xù)14d。每日觀(guān)察各組大鼠腹瀉、便血、體重改變等情況，評(píng)價(jià)疾病活動(dòng)指數(shù)。14d后，各組大鼠斷頭取血，分離血清，檢測(cè)血清TNF－ α、IL －8、SOD 及 MDA 水平。（3）疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI）評(píng)價(jià)及血清各指標(biāo)檢測(cè)：采用DAI評(píng)價(jià)UC。血清TNF－α、IL－8水平測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定；SOD活性、MDA含量用比色法測(cè)定；均嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)定方法測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（）表示，采用 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組DAI評(píng)分、血清TNF－α及IL－8水平比較 見(jiàn)表1。模型對(duì)照組DAI分值、血清TNF－α及IL－8水平較正常對(duì)照組明顯增高（P ＜0.01）；兩面針兩治療組DAI、血清TNF－α、IL－8較模型組對(duì)照明顯降低（P＜0.05）；兩面針低劑量組與SASP組各數(shù)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩面針高劑量組各指標(biāo)較SASP組明顯降低（P ＜0.05）。

表1 各組大鼠DAI、血清TNF－α及IL－8水平比較 (）

表1 各組大鼠DAI、血清TNF－α及IL－8水平比較 (）

與正常對(duì)照組比較，*P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，▲P＜0.01；與兩面針低劑量組比較，△P＜0.05。下同

組 別正常對(duì)照組模型對(duì)照組SASP組兩面針高劑量組兩面針低劑量組DAI評(píng)分(分）0.62±0.43 8.11±1.74*3.87±1.38 2.76±0.91▲△3.65±1.22▲TNF－α（ng/L）6.86±1.51 38.79±8.10*24.55±6.36 16.76±4.25▲△22.48±5.72**IL－8（ng/L）2.48±0.79 26.43±6.57*14.26±3.85 10.27±3.06▲△14.53±3.98▲

2.2 各組大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比較 見(jiàn)表2。模型對(duì)照組SOD活力較正常對(duì)照組明顯降低，MDA含量較正常對(duì)照組明顯增高，差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；兩面針兩治療組SOD活力較模型對(duì)照組增高，MDA含量較模型對(duì)照組降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；兩面針低劑量組與SASP組的SOD活力、MDA含量水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩面針高劑量組SOD值顯著高于SASP組；MDA水平低于SASP組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。

3 討論

UC的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，目前大多學(xué)者認(rèn)為UC的發(fā)生是免疫、遺傳、環(huán)境及腸道細(xì)菌等多種因素共同作用的結(jié)果，其中免疫因素是最重要的因素之一。細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)腸道免疫中扮演重要角色。TNF－α和IL－8是具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，也是重要的炎癥因子，可參與許多變態(tài)反應(yīng)性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生。研究表明，IL－8是一種較強(qiáng)的白細(xì)胞趨化因子。多種炎癥介質(zhì)如TNF－α、IL－l等均能誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL－8。UC患者的外周血中TNF－α和IL－8水平均顯著增高。因此，IL－8可進(jìn)一步通過(guò)對(duì)中性粒細(xì)胞的趨化作用，導(dǎo)致腸組織內(nèi)各種炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；而TNF－α可加重并促進(jìn)腸黏膜組織炎性損傷。本研究表明，兩面針能夠明顯降低UC大鼠血清TNF－α和IL－8水平，從而減輕炎癥反應(yīng)，可能是其治療UC的主要機(jī)制之一。

表2 各組大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比較 (）

表2 各組大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比較 (）

與SASP組比較，▲P＜0.05

組 別正常對(duì)照組模型對(duì)照組SASP組兩面針高劑量組兩面針低劑量組SOD（NU/mL）12.84±2.26 5.55±1.13*10.16±1.69 11.52±1.80**▲9.89±1.54**MDA(μm/mL）26.92±5.18 60.34±11.86*36.21±6.47 28.65±5.65**▲35.93±6.42**

目前已有大量文獻(xiàn)報(bào)道氧自由基損傷是UC發(fā)病過(guò)程的一個(gè)重要因素，可提高機(jī)體抗自由基損傷的能力,同時(shí)降低MDA含量,對(duì)UC有明顯的治療作用。本實(shí)驗(yàn)表明，兩面針能顯著提高UC大鼠SOD活力，降低MDA含量，說(shuō)明兩面針有良好的抗氧自由基損傷作用，這也可能是其治療UC的主要機(jī)制之一。綜上所述，兩面針有良好的抗UC作用，這可能與其降低TNF－α、IL－8及MDA水平，提高SOD活力有關(guān)。

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