針刺對局灶性腦缺血大鼠缺血腦組織及血清IL-6的影響*

郭永明，梁憲如

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)針灸學(xué)院，天津 300193；2.武警醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162）

白介素-6（IL-6）是由多種細胞產(chǎn)生的具有重要生物學(xué)活性的細胞因子，它既可誘導(dǎo)急性時相蛋白的產(chǎn)生，也是B細胞終末分化并分泌抗體的必須因子，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用[1-2]。近年來研究報道，腦缺血后極早期腦內(nèi)、血漿和腦脊液中IL-6的水平即發(fā)生變化[3]，表明IL-6可能參與了急性腦缺血時的炎癥反應(yīng)等病理生理過程。本實驗采用熱凝法造成大腦中動脈阻塞模型，動態(tài)觀察了局灶性腦缺血大鼠腦組織和血清中IL-6的變化及“醒腦開竅”針法的>干預(yù)效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 選用Wistar大鼠130只（由天津市衛(wèi)生局實驗動物中心提供），體質(zhì)量（220±20）克，雌雄各半，隨機分缺血組、針刺組各50只、假手術(shù)組25只、正常組5只。前3組又分為3、6、12、24、48 h各時段組，其中缺血組、針刺組每組各10只、假手組每組各5只。

1.2 模型的制作 缺血組及針刺組動物經(jīng)3%的戊巴比妥鈉（45 mg/kg）腹腔注射麻醉，側(cè)臥位固定，于眼眶至耳的中點縱行切開皮膚約1 cm左右，分離并切去部分顳肌，暴露顳骨，做1個約3 mm的骨窗，輕抬腦，可見橫過嗅束向上走行的大腦中動脈（MCA），用加熱的不銹鋼絲輕輕接觸靠近嗅束上緣的大腦中動脈，使之快速凝閉，遇有血管破裂可用小棉球局部輕壓止血，術(shù)后創(chuàng)面敷少許抗生素（先鋒Ⅳ），縫合傷口并單籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組除不凝閉MCA外，余手術(shù)步驟同缺血組。

1.3 腧穴的選取及處理 根據(jù)“大鼠穴位圖譜”，針刺組選取“醒腦開竅”針法主穴人中、內(nèi)關(guān)，先針刺人中，用雀啄手法10次，繼刺雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴，直刺捻轉(zhuǎn)提插瀉法1 min。3 h針刺組，手術(shù)后1 h針刺；6、12 h針刺組，手術(shù)后1 h針刺，處死前蓄積1次；24、48 h針刺組針刺2次/d，處死前蓄積1次。正常組、假手術(shù)組及缺血各組動物同樣抓取，不做其他處理。

1.4 指標檢測及方法

1.4.1 標本收集 各組動物在規(guī)定的時間點摘眼球取血，分離血清，-20℃冰箱保存，待測。然后迅速斷頭取腦，在冰盤上分開兩大腦半球，剝離大腦中動脈（MCAO）側(cè)皮質(zhì)，稱質(zhì)量，按 400 mg∶1 mL 的比例加生理鹽水作組織勻漿，2000 r/min離心15 min，取上清，-20℃冰箱保存，待測。

1.4.2 IL-6 的測定 采用 FT-6SDF γ-晶體閃爍計數(shù)儀（天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院放免室提供），用放射免疫分析法測定各組動物腦組織及血清中IL-6含量，IL-6檢測試劑盒由北京東亞免疫技術(shù)研究所提供，操作程序嚴格按照藥盒說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)用表示，用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件處理，進行方差分析，并進行組間兩兩比較。

2 結(jié)果

2.1 局灶性腦缺血大鼠腦組織IL-6含量的變化及針刺的影響 見表1。結(jié)果表明局灶性腦缺血后早期腦組織中IL-6含量即明顯升高，48 h基本恢復(fù)正常，“醒腦開竅”針法可在缺血早期有效降低腦組織IL-6含量，并使其恢復(fù)正常。

表1 各組動物腦組織白介素-6含量（±s）Tab.1 The expression of IL-6 in brain tissue in different groups（±s）μg/g

表1 各組動物腦組織白介素-6含量（±s）Tab.1 The expression of IL-6 in brain tissue in different groups（±s）μg/g

注：與同時段缺血組比較：※P<0.05，※※P<0.01；與同時段假手術(shù)組比較：★P<0.05；★P<0.01；與正常組比較：▼P<0.05，▼▼P<0.01。

組別缺血組針刺組假手術(shù)組正常組3 h 740.85±149.85▼▼★★222.16±135.23※※▼▼★★480.49±222.88467.51±159.466 h 725.16±134.64▼▼★★185.38±85.27※※▼▼★★460.49±149.04467.51±159.46組別缺血組針刺組假手術(shù)組正常組12 h 955.29±215.73▼▼★★261.18±117.93※※▼★★503.97±127.70467.51±159.4624 h 685.72 ±113.28▼▼397.65 ±187.07※※★615.836±116.99467.51±159.4648 h 400.10±98.78★537.97±181.26※577.04±172.15467.51±159.46

2.2 局灶性腦缺血大鼠血清IL-6含量的變化及針刺的影響 見表2。結(jié)果表明局灶性腦缺血后血清IL-6含量早期即出現(xiàn)異常升高，然后逐漸降低，至24 h基本降到正常水平，“醒腦開竅”針法可使血清IL-6含量在腦缺血后3到12 h降低，24 h之后增加。

表2 各組動物血清白介素-6含量（±s）Tab.2 The expression of IL-6 in serum in different groups（±s）μg/L

表2 各組動物血清白介素-6含量（±s）Tab.2 The expression of IL-6 in serum in different groups（±s）μg/L

注：與同時段缺血組比較：※※P<0.01;與同時段假手術(shù)組比較：★★P<0.01;與正常組比較：▼▼P<0.01。

組別缺血組針刺組假手術(shù)組正常組3 h 107.94±65.10▼▼★★63.67±33.90※※31.03±15.7031.89±13.506 h 103.34±47.78▼▼★★50.08±28.84※※25.95±13.3731.89±13.5012 h 85.73±30.78▼▼★★45.75±24.11※※22.94±10.6431.89±13.50組別缺血組針刺組假手術(shù)組正常組24 h 25.66±12.7683.34±42.58※※▼▼★★28.85±14.5231.89±13.5048 h 36.77±17.32110.76±32.11※※▼▼★★41.31±6.5231.89±13.50

3 討論

IL-6在腦缺血急性反應(yīng)期發(fā)揮了重要的抗炎作用，在中樞神經(jīng)內(nèi)具有神經(jīng)保護作用[4]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺血損傷過程中體內(nèi)IL-6水平增高，IL-6通過與其受體（IL-6R）結(jié)合，識別信號轉(zhuǎn)導(dǎo)成分gpl30，形成具有生物活性的三元復(fù)合體，立即激活細胞內(nèi)的多種激酶，導(dǎo)致蛋白磷酸化和基因表達，進而發(fā)揮其多元化神經(jīng)營養(yǎng)功能而起到抗缺血損傷、促神經(jīng)修復(fù)等神經(jīng)保護作用。IL-6促進膠質(zhì)細胞分泌神經(jīng)生長因子（NGF）并增強NGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，可能是IL-6多元化神經(jīng)營養(yǎng)作用的基礎(chǔ)[5]。

本次實驗發(fā)現(xiàn)局灶性腦缺血3 h腦組織中IL-6含量即明顯升高，12 h達高峰，24 h開始降低，48 h降至正常范圍，而血清中IL-6含量3 h即急劇升高，6、12 h逐漸降低，24到48 h降至正常范圍，該結(jié)果與文獻報道[6-9]基本一致。在其他實驗中還觀察到腦缺血后白介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-8含量也發(fā)生明顯改變，可以推測腦缺血后機體處于應(yīng)激狀態(tài)，通過神經(jīng)—內(nèi)分泌—免疫網(wǎng)絡(luò)充分調(diào)動機體的抗損傷修復(fù)能力，使缺血局部及外周血中IL-6含量急劇增加，以拮抗其他炎性細胞因子的合成分泌，同時發(fā)揮IL-6其自身的神經(jīng)保護作用以減輕缺血性神經(jīng)損害；當發(fā)生腦缺血損害后機體可能通過多器官、多途徑迅速分泌大量IL-6進入血液，到達缺血局部發(fā)揮抗損傷及修復(fù)作用，在這種應(yīng)激性保護過程中局部腦組織的反應(yīng)可能滯后于全身整體，所以外周血中IL-6缺血后3 h即急劇升高而腦組織中12 h才達高峰，同時這種應(yīng)激反應(yīng)可能是發(fā)生缺血性損害后的機體產(chǎn)生的一種即早反應(yīng)，因此至48 h腦組織及血中的IL-6基本恢復(fù)正常水平。針刺治療后缺血性損害減輕，同時抑制了其他炎性細胞因子的表達或合成，機體的應(yīng)激反應(yīng)減輕，因此針刺組早期（到12 h）腦組織及血清中IL-6含量均較缺血組明顯降低，至于血清IL-6含量24 h以后出現(xiàn)異常升高，推測其原因可能是通過針刺多途徑、多靶向的調(diào)節(jié)作用，促進機體合成分泌大量IL-6進入血液，通過血運到達缺血區(qū)腦組織發(fā)揮其抗炎、神經(jīng)保護及促進受損神經(jīng)元修復(fù)的作用。因此，筆者認為“醒腦開竅”針法對IL-6的這種調(diào)節(jié)作用可能是其治療缺血性腦卒中的作用機制之一。

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