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    肌肉注射鹽酸頭孢噻呋混懸注射液對豬安全性試驗

    2010-11-22 04:50:48郭桂芳梁先明楊大偉曾繁活趙永達倪恒佳曾振靈徐士新黃顯會
    中國獸醫(yī)雜志 2010年11期
    關(guān)鍵詞:劑量

    郭桂芳,梁先明,楊大偉,曾繁活,趙永達,倪恒佳,曾振靈,徐士新,黃顯會

    (1.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京海淀100081;2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣東廣州510642)

    頭孢噻呋(ceftiofur)是第一個畜禽專用的第3代頭孢菌素類抗生素,具有抗菌譜廣、抗菌活性強、對胃酸和β-內(nèi)酰胺酶較穩(wěn)定、過敏反應(yīng)少、毒性小、在動物體內(nèi)殘留低的特點[1]。國內(nèi)外已批準的制劑有注射用頭孢噻呋鈉和鹽酸頭孢噻呋注射液,用于肉牛、奶牛、馬、羊、豬呼吸道病和1日齡雞細菌性感染的防治[2]。近年來,美國輝瑞動物保健公司又開發(fā)了一種新劑型的頭孢噻呋,即結(jié)晶性頭孢噻呋游離酸(ceftiofur crystalline freeacid,CCFA),隨后對該藥的臨床療效做了大量研究[3-4]。在我國山東魯抗等公司已被批準生產(chǎn)頭孢噻呋,國內(nèi)也有過關(guān)于頭孢噻呋混懸劑的應(yīng)用研究[5]。本課題組研制成功的長效頭孢噻呋混懸注射液,穩(wěn)定性好,緩釋效果顯著,為頭孢噻呋的獸醫(yī)臨床應(yīng)用提供了一種新的藥物劑型[6]。本試驗對長效頭孢噻呋混懸注射液在靶動物豬體內(nèi)進行了安全性試驗,為其臨床上安全用藥提供試驗依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑 鹽酸頭孢噻呋混懸注射液,含量為10%,規(guī)格 10 mL∶1g,批號:20070701,上海公誼獸藥廠中試生產(chǎn);血清生化指標測定試劑,四川省邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn);其他試劑均為分析純。

    1.2 主要儀器設(shè)備 MEK-6138K全自動血液學(xué)分析儀(日本光電工業(yè)株式會社生產(chǎn));魅力1800自動血液生化分析儀(美國MD儀器公司)。

    1.3 試驗動物 20頭健康二元雜交豬(公母兼有),40日齡左右,體重43.61 kg±1.49 kg,由廣東省種豬場提供,自由飲水,飼喂不含任何藥物的全價飼料,每天定時給料2次。給藥前飼喂1周,適應(yīng)環(huán)境。

    1.4 試驗分組、給藥與樣品采集 試驗動物隨機分為4組,每組5頭。設(shè)1組為空白對照組,其余為低、中、高3個給藥組。給藥組動物按照推薦給藥劑量(5 mg/kg體重)、3倍推薦給藥劑量(15 mg/kg體重)和5倍推薦給藥劑量(25 mg/kg體重),通過頸部深層肌肉注射鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(10%),按照推薦給藥方案,連續(xù)給藥兩次,給藥間隔72 h。給藥后每天觀察動物的臨床變化情況(行為特征、呼吸、采食、精神狀況等)。

    所有動物分別在給藥前、第1次給藥后1 d、第2次給藥前及第2次給藥后1、5、10、15 d分別稱重、測體溫(肛溫)并采集血液10 mL,分兩管,分別制備全血(加抗凝劑EDTA-K2)和分離血清(不加抗凝劑,2 500 r/min離心5 min)。

    1.5 樣品分析 采新鮮抗凝全血,進行白細胞(WBC)計數(shù)、紅細胞(RBC)計數(shù)、血小板(PLT)計數(shù)、平均紅細胞容積(MCV)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞壓積(HCT)等項目分析。

    制備血清,進行肌酐(CREA)、血糖(GLU)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、白蛋白(ALB)、血清尿素氮(BUN)、堿性磷酸酶(ALP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、總膽固醇(T-CHO)等項目進行分析。

    1.6 病理組織學(xué)檢查 在第15天時宰殺空白組與高劑量組試驗豬,先進行肉眼觀察,采集多種組織器官(肝、腎、心臟、脾臟、腦組織等),10%中性福爾馬林中固定,制作病理切片,進行組織病理學(xué)觀察。

    1.7 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)用EXCEL軟件進行處理后,采用SPSS 16.0統(tǒng)計分析軟件進行One-Way ANOVA分析,比較試驗組與對照組間各指標差異顯著性,試驗數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標準差表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 臨床表現(xiàn) 與未給藥前相比,所有動物給藥后每天觀察2次,鹽酸頭孢噻呋各劑量組和空白對照組進食正常,行動正常,呼吸和排泄未見異常,注射部位也未見紅腫。試驗豬體溫和體重組間比較差異均不顯著(P>0.05)。臨床表現(xiàn)均正常。

    2.2 血液常規(guī)指標分析 血液常規(guī)結(jié)果見表1。在整個試驗期間內(nèi),各組別豬在不同時間點采集的血液所測定的各項指標均在正常參考范圍之內(nèi)。且鹽酸頭孢噻呋混懸注射液高、中、低劑量組與空白對照組相比,并無顯著性差異(P>0.05)。因此鹽酸頭孢噻呋混懸注射液在5~25 mL/kg劑量范圍對血液常規(guī)指標無明顯的影響。

    表1 豬肌肉注射鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(10%)后血常規(guī)指標 (平均值,n=5)

    2.3 血清生化指標分析 血清生化檢測結(jié)果見表2。除 GLU外,其余各項指標GOT、CREA、GLU、GPT、ALB、BUN等空白對照組相比差異不顯著(P>0.05)。給藥后1~5 d,中、高劑量組與對照組相比差異顯著(P<0.05),低劑量組與對照組相比無顯著性差異(P>0.05)。到第2次給藥后10 d,中、高劑量組的GLU值恢復(fù)到正常水平,與對照組相比無差異(P>0.05)。

    表2 豬肌肉注射鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(10%)后血清生化指標 (平均值,n=5)

    GPT、ALP、GGT、TP、ALB、TBIL 為常用的肝功能檢測指標;GOT、LDH和CK為心臟功能指標;BUN、CREA、UA是腎功能的重要指標。本試驗中,各劑量組的 GPT、GOT、ALP、ALB、BUN、CREA的平均值與對照組的平均值均無顯著差異,故可以認為鹽酸頭孢噻呋混懸注射液對豬的肝、腎、心臟功能無損害。TC、TG反映動物機體內(nèi)脂代謝的情況,可作為判斷高脂血癥和營養(yǎng)不良指標。GLU的濃度受多種因素的影響。胰島素,胰高血糖素,腎上腺素,生長激素等都影響血糖濃度的改變。試驗中,各劑量組的TC、TG值與對照組無差異,表明注射液對豬的脂代謝無影響。而中、高劑量組的GLU值在第2次給藥后的1~5 d顯著降低,到10 d后逐漸恢復(fù)到正常水平,估計是注射液對胰島素的分泌產(chǎn)生影響而引致的,且這種影響是可逆的,具體的影響機理還有待進一步試驗證明。因而總體說明鹽酸頭孢噻呋混懸注射液在5~25 mL/kg劑量范圍對血液常規(guī)指標沒有明顯的影響。

    2.4 病理組織學(xué)檢查分析 宰殺后經(jīng)肉眼觀察,高劑量組豬的心肌、肝臟、脾臟、肺、腎、胃、胰腺、淋巴結(jié)、脊髓、大腦、小腦等器官組織表面沒出現(xiàn)明顯的病理變化。H.E.染色后觀察,兩次給藥后,高劑量組的心肌、肝臟、脾 臟、肺、腎、胃、胰腺、淋巴結(jié)、脊髓、大腦、小腦、肌肉等均未見明顯病理變化。

    肝是體內(nèi)最大的腺體,有分泌膽汁、合成體內(nèi)血漿蛋白、脂蛋白、膽固醇、糖原等重要物質(zhì),儲存糖原、維生素,解毒及參與體內(nèi)防衛(wèi)體系的功能。在肝切片中可以看到清晰的肝小葉界限和位于小葉中央的中央靜脈,肝細胞以靜脈為軸心,呈放射狀排列。肺是吸入空氣與血液中的二氧化碳進行交換的場所。在肺組織切片中可見呈半球形的肺泡,一端開口于肺泡囊、肺泡管或呼吸性細支氣管,另一面借肺泡隔與相鄰肺泡連接;多個肺泡圍成的肺泡囊,是多個肺泡共同開口的通道,相鄰的肺泡由扁平細胞形成的肺泡壁分隔開。在高劑量組的病理切片中,肝臟、肺均沒有發(fā)生病理變化。肝臟和肺臟病理切片見圖1~4。

    圖1 空白組豬的肝組織切片(H.E.40×)

    3 結(jié)語

    長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液由鹽酸頭孢噻呋和注射用茶油等輔料制作成的混懸制劑。通過對豬連續(xù)2次肌肉注射給藥,并進行臨床癥狀、血液生理生化指標對比分析,與給藥前相比,所有動物給藥后采食和行動正常,呼吸和排泄也未見異常,注射部位未見腫塊等現(xiàn)象,臨床表現(xiàn)均正常。在5~25 mg/kg體重劑量范圍內(nèi),肌肉注射鹽酸頭孢噻呋混懸注射液,對豬血液常規(guī)指標和生理生化指標無明顯影響。表明按此處方生產(chǎn)的鹽酸頭孢噻呋混懸注射液在臨床使用中按“肌肉注射,每千克體重,豬5 mg,每3天給藥1次,連續(xù)給藥2次”的用法和用量使用,安全,無明顯不良反應(yīng)。

    [1] 陳杖榴.獸醫(yī)藥理學(xué)[M].3版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2009.

    [2] 王慧,陳小軍,劉偉,等.動物專用頭孢噻呋[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2009,30(1):104-108.

    [3] Van Donkersgoed J,Dussault M ,Knight P,et al.Clinical efficacy of a single injection of ceftiofur cry stalline f ree acid sterile injectable suspension versus three daily injections of ceftiofur sodium sterile powder for t he treatment of foot rot in feedlot cattle[J].Vet Ther,2008,9(2):157-162.

    [4] Encinias A M,Walker D A,Murdock C W,et al.Effects of prophylactic administration of ceftiofur crystalline free acid on health and performance of newly received beef calves[J].J Anim Sci,2006,57:160-163.

    [5] 司紅彬,莫娟,潘玉善,等.頭孢噻呋混懸注射液的研制及療效試驗[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2008,42(1):71-76.

    [6] 曾繁活.長效鹽酸頭孢噻呋注射液在豬的藥動學(xué)及組織殘留研究[D].廣州:華南農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

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