口服鹽酸特比萘芬對貓肝腎損傷的病理組織學觀察

王慶華,喬志軍,金藝鵬,裴增楊,林德貴

(1.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京 海淀 100193;2.拜耳(四川)動物保健有限公司,北京 朝陽 100020)

鹽酸特比萘芬是一種廣譜抗真菌藥物[1-4],臨床上廣泛用于治療淺部真菌病,結(jié)果顯示鹽酸特比萘芬治療淺部真菌病療程短、療效高、不良反應少[5-6]。對由皮膚癬菌引起的甲真菌病特比萘芬比灰黃霉素、伊曲康唑和氟康唑療效要好[7-8]。近年來,鹽酸特比萘芬也逐漸應用于獸醫(yī)臨床,以治療小動物真菌病[9-10]。

鹽酸特比萘芬口服后吸收良好,約70%～80%被吸收;血漿蛋白結(jié)合率高達99%,并具有親脂性和親角質(zhì)性,能迅速經(jīng)真皮層彌散并集中在角質(zhì)層。該藥主要在肝臟代謝,代謝產(chǎn)物無抗菌活性,主要經(jīng)過腎臟排泄,口服吸收量的80%以代謝物形式由尿液排出,少部分經(jīng)過膽汁、糞便排泄。該藥消除半衰期為17 h,在體內(nèi)無蓄積作用,其穩(wěn)態(tài)血藥濃度不受年齡影響。但肝、腎功能不全者對特比萘芬的清除率可能降低,從而導致血藥濃度升高,出現(xiàn)肝、腎損傷。在獸醫(yī)臨床上研究特比萘芬對犬貓肝、腎損傷的資料較少。并且特比萘芬致肝、腎功能正常者肝臟及腎臟損傷的機制目前尚不完全清楚,可能由于藥物的直接毒性,也可能通過獨特的免疫學和代謝機制導致機體特發(fā)性反應。本試驗采用組織病理學方法檢測口服不同劑量的鹽酸特比萘芬后貓肝臟和腎臟器官的組織學變化,以探討鹽酸特比萘芬對貓肝腎的損傷影響,為獸醫(yī)臨床合理應用鹽酸特比萘芬治療犬貓真菌病提供臨床用藥的試驗數(shù)據(jù)及相關病理資料。

1 材料

1.1 實驗動物 28只短毛貓 ,公貓15只和母貓13只,2.5～4歲,平均體重2.8 kg,來自中國農(nóng)業(yè)大學實驗動物中心。實驗動物適應飼養(yǎng)環(huán)境3周后,對實驗貓進行全面體況檢查及實驗室檢驗。健康貓入選本研究。在試驗前6周內(nèi)局部使用或系統(tǒng)性使用過藥物的貓不入選。

1.2 試驗藥物及配置 鹽酸特比萘芬片劑：北京諾華制藥公司;規(guī)格：每片250 mg。配置方法：將片劑藥物研磨,根據(jù)實驗動物體重準確稱取相應重量藥物。

1.3 主要儀器 山東醫(yī)療器械廠 LX-75型切片機,英國Shandon半自動石蠟包埋機,英國Shandon自動烤片機,重慶光學儀器廠COIC XSZ-G型光學顯微鏡。

1.4 其他主要材料 優(yōu)級純甲醛、二甲苯、中性樹膠、蘇木精-伊紅染色液、明膠、石蠟等均由中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院臨床系外科實驗室提供。

2 方法

2.1 實驗動物的飼養(yǎng) 飼喂偉嘉成年貓糧,自由飲水。

2.2 實驗動物分組及給藥步驟 3周適應期后,28只貓被隨機分為4組(7只/組)。鹽酸特比萘芬以獸醫(yī)臨床推薦使用劑量10 mg/kg?d為基礎,適當?shù)募恿孔鳛樵囼瀯┝?即分為低劑量組(10 mg/kg?d)、中劑量組(20 mg/kg?d)、高劑量組(40 mg/kg?d)和對照組(0 mg/kg?d)。不同組的實驗貓連續(xù)3周口服給藥相應劑量的鹽酸特比萘芬。

2.3 組織采集及保存方法 分別在給藥后第3周(即第21天)和第5周(即第35天)取不同劑量組的實驗貓各3只,安樂死后分別取肝臟及腎臟部分組織,分成大小約1 cm3的小組織塊,使用10%中性福爾馬林固定備用。

2.4 肝、腎病理組織學切片的制作 按常規(guī)組織學切片制作方法制作肝、腎組織學切片。

2.5 切片觀察 用顯微鏡對肝腎病理組織切片進行觀察和拍照。

3 結(jié)果與分析

3.1 口服不同劑量鹽酸特比萘芬的貓肝臟組織病理切片觀察 本試驗中通過H.E染色進行病理學觀察可見,口服不同劑量的鹽酸特比萘芬均能造成不同程度的貓肝實質(zhì)病變。染色并鏡檢表現(xiàn)為：肝索紊亂、肝竇不明顯、界限不清晰,以及不同程度的間質(zhì)水腫;肝細胞空泡變性,肝細胞顯著腫脹,核固縮;肝細胞胞漿內(nèi)有少量棕紅色含鐵血紅素顆粒沉著,疑為肝性膽紅素阻塞;匯管區(qū)與小葉間界限不清晰,小葉間結(jié)締組織增生,形成膠原纖維;肝中央靜脈擴張,小葉間靜脈極度擴張;血管內(nèi)有大量含鐵血紅素沉著;不同程度的膽管增生、纖維化;不同程度的嗜中性粒細胞、淋巴細胞浸潤,炎性細胞多分布于肝小葉及匯管區(qū)。高劑量特比萘芬能導致門管區(qū)更嚴重的炎性反應,大量的淋巴細胞形成淋巴濾泡;小葉間結(jié)締組織增生更為明顯;肝細胞嚴重腫脹、核固縮明顯。見中插彩版圖 1、圖2。

3.2 口服不同劑量鹽酸特比萘芬的貓腎臟組織病理切片觀察 H.E.染色進行病理學觀察可見,口服不同劑量的鹽酸特比萘芬均能造成不同程度的貓腎實質(zhì)病變。主要表現(xiàn)為腎間質(zhì)充血擴張,髓質(zhì)血管輕度擴張、充血;廣泛性的腎小管上皮空泡變性,胞碎裂、壞死;腎小管上皮細胞明顯核固縮;散在腎小管上皮細胞溶解;管腔內(nèi)存在少量散在性管型;近曲小管管腔內(nèi)有蛋白顆粒,細胞腫脹,管腔變窄;遠曲小管管腔擴張,集合管擴張,并有少量纖維組織增生;被膜下腎小管變性壞死,間質(zhì)中有局灶性淋巴細胞浸潤;腎小球內(nèi)皮與基底膜細胞分離。

對不同劑量的給藥組實驗貓腎臟損傷進行比較發(fā)現(xiàn),高劑量特比萘芬能導致腎小管上皮嚴重的空泡變性,部分核溶解甚至消失;皮質(zhì)腎小管上皮嚴重腫脹,明顯核固縮;腎小管封閉,腎小球基底膜增厚;甚至造成腎小球萎縮,腎小囊出血。見中插彩版圖3、圖4。

3.3 口服鹽酸特比萘芬在不同時期對貓肝臟組織病理切片觀察 飼喂各劑量組特比萘芬的試驗貓在持續(xù)給藥3周后停止給藥,繼續(xù)觀察實驗貓的各種指標。在停藥兩周后(即試驗的第35天),分別取肝臟與腎臟組織行組織病理學切片。H.E.染色后進行病理學觀察發(fā)現(xiàn),口服鹽酸特比萘芬3周后停藥兩周明顯比口服鹽酸特比萘芬21 d對貓肝臟造成的組織病理學損傷嚴重。結(jié)果顯示：試驗第5周肝細胞變性情況比試驗第3周更嚴重,肝細胞腫脹顯著、空泡變性;小葉間結(jié)締組織增生嚴重;門管區(qū)炎性細胞尤其是嗜中性粒細胞及淋巴細胞浸潤增多。見中插彩版圖5。

3.4 口服鹽酸特比萘芬在不同時期對貓腎臟組織病理切片觀察 H.E.染色后進行病理學觀察發(fā)現(xiàn),口服鹽酸特比萘芬3周后停藥2周明顯比口服鹽酸特比萘芬21 d對貓腎臟造成的組織病理學損傷嚴重。具體的顯微對比結(jié)果為腎小管上皮空泡變性更為嚴重,核固縮更明顯;腎小管管腔內(nèi)有更多量的蛋白顆粒;間質(zhì)中更多量的纖維組織增生;間質(zhì)中有更多的炎性細胞,尤其是淋巴細胞呈片狀浸潤。見中插彩版圖6。

組織學切片觀察結(jié)果表明,對照組貓的肝臟和腎臟未見病理學變化。

4 結(jié)語

本試驗采用組織病理學方法觀察了口服鹽酸特比萘芬的正常貓肝腎組織學變化,以探討鹽酸特比萘芬對貓肝腎的損傷。從組織病理學檢查可以得出：(1)口服不同劑量的鹽酸特比萘芬均能造成不同程度的貓肝腎實質(zhì)病變;鹽酸特比萘芬對貓肝腎的損傷具有明顯的量效關系：高劑量組與低、中劑量組相比具有更顯著的肝腎損傷效應。(2)口服鹽酸特比萘芬3周后停藥2周(即給藥后第35天)明顯比口服鹽酸特比萘芬給藥后第21天對貓肝腎造成的組織病理學損傷嚴重,提示了鹽酸特比萘芬對貓肝腎的損傷可能是一個藥物蓄積的損傷過程。

本試驗證實了口服鹽酸特比萘芬對貓肝腎的損傷作用,提示獸醫(yī)臨床上應用鹽酸特比萘芬治療貓皮膚真菌病時,應綜合考慮該藥的肝腎毒性,制定合理的用藥劑量和用藥周期。

[1] 王愛平,李若瑜.鹽酸布特萘芬軟膏治療手足癬和體股癬[J].中華皮膚科雜志,2000,33(4)：293.

[2] 李大寧,張定國.用特比萘芬短程療法治療甲癬[J].新藥與臨床,1996,15(3)：178-179.

[3] 趙敬軍,張正華,劉維達.特比萘芬-蘭美抒在中國應用4年情況回顧[J].臨床皮膚科雜志,2001,4(30)：272-275.

[4] 吳紹熙.真菌病的研究現(xiàn)狀與對策[J].第二軍醫(yī)大學學報,2001,22(11)：1001-1002.

[5] 王克玉,張樹孝.特比萘芬散與咪康唑散隨機對照治療手足癬體股癬臨床研究[J].中國臨床藥學雜志,2000,16(4)：265-268.

[6] 鄭鳳蘭,朱敬先.伊曲康唑治療花斑癬療效及實驗室研究[J].中華皮膚科雜志,1997,30(1)：68-70.

[7] 李姝,鄧列華.抗真菌藥物在皮膚科臨床應用新進展[J].中國處方藥,2005,3：66-69.

[8] 張永信.深部真菌感染及抗真菌藥的應用[J].上海醫(yī)藥,2004,25(8)：341-345.

[9] 郭寧如,吳紹熙.抗淺部真菌病藥特比萘芬的研究進展[J].中國新藥雜志,1995,4(3)：1-5.

[10]金藝鵬,張瑩,劉向鑫,等.犬念珠菌病[J].中國獸醫(yī)雜志,2006,42(6)：44-45.