犬自身免疫性溶血性貧血的診斷

劉愛國,李發(fā)志,張祖梅,李代兵,錢 勇,田紹寧

(成都華西動物醫(yī)院,四川成都610041)

自身免疫性溶血性貧血(autoimmune hemolytic anemia,AIHA)是由于犬體內(nèi)產(chǎn)生自身抗體,與自身紅細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng),使紅細(xì)胞大量破壞,引起的一種貧血性疾病[1]。AIHA的病因和發(fā)病機制迄今仍未完全闡明。目前對未能找到誘發(fā)因素的稱為特發(fā)性或原發(fā)性AIHA,對有明確病因者稱為繼發(fā)性AIHA[2]。AIHA發(fā)病呈上升趨勢,近一年筆者遇到5個AIHA病例。資料介紹確診該病要做庫姆斯試驗,但兔抗犬球蛋白血清不容易獲得,此試驗開展很有難度。筆者用自身血清與自身紅細(xì)胞反應(yīng)診斷該病,簡單易行,未見他人報道。現(xiàn)以最近接診一病例為例,報告如下。

1 病史及臨床癥狀

松獅犬,雄性,7歲,體重24 kg,2月5日來我院就診。主訴：2月2日發(fā)病,精神沉郁,全身無力,2月3日小便呈濃茶色,4日呈醬油色,絕食2天,近1個月來飲食、環(huán)境等均未改變,家里還有1只7歲雜交母犬一切正常。臨床檢查：體溫：38.6℃、脈搏：150次/min,呼吸：65 次/min,可視黏膜、皮膚蒼白發(fā)黃,張口呼吸快速淺表,四肢無力。

2 實驗室檢驗

2.1 血液眼觀檢查 取抗凝血3滴,平鋪在潔凈載玻片上,于明亮處可見很多紅色顆粒。

2.2 血常規(guī)檢查 如表1。

2.3 血清生化檢查 谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)：55 U/L,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)：35 U/L,堿性磷酸酶(ALP)：62 U/L,白蛋白(ALB)：25.3 g/L,總蛋白(TP)：76.4 g/L,直接膽紅素(D-BIL)：12.4 μmol/L,總膽紅素(T-BIL)：31.1 μmol/L,γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)：3.6 U/L,淀粉酶(AMY)：526 U/L,尿素氮 (BUN)：7.5 mmol/L,肌酐(CREA)：83 μmol/L,Ca：2.3 mmol/L,P：1.97 mmol/L,肌酸激酶(CK)：65 U/L,乳酸脫氫酯(LDH)：132 U/L,血糖(GLU)：6.1 mmol/L,膽固醇(CHOL)：6.3 mmol/L,甘油三酯(TG)：0.65 mmol/L。

2.4 紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查 鮮血懸滴鏡檢可見大量紅細(xì)胞聚集成團。瑞氏染色鏡檢可見紅細(xì)胞大小不均,大量球形紅細(xì)胞,大量破裂紅細(xì)胞,大量紅細(xì)胞集聚成團,少量有核紅細(xì)胞?；徒褂退{(lán)染色鏡檢可見大量網(wǎng)織紅細(xì)胞,約占成熟紅細(xì)胞的45%。

表1 血常規(guī)檢查結(jié)果

2.5 自身紅細(xì)胞與自身血清反應(yīng)試驗

2.5.1 抽患犬靜脈血液5 mL 將2 mL血液注入一次性試管中靜置并分離出血清。將3 mL血液注入加有抗凝劑的一次性試管中,混勻,離心(條件設(shè)置：3 500 r/min 離心 10 min,溫度 4℃[3]),將紅細(xì)胞與血漿交界處的白膜層與血漿一起去除,得到少白細(xì)胞紅細(xì)胞。

2.5.2 過濾并洗滌紅細(xì)胞 將少白細(xì)胞紅細(xì)胞放入另一次性試管中,加生理鹽水5 mL,混勻,用一次性袋式輸液器的網(wǎng)式藥液過濾器過濾,離心,去上清液,再加生理鹽水5 mL稀釋混勻,再過濾,如此往復(fù)5次。最后一次去上清液后加1 mL生理鹽水混勻,獲得單個洗滌紅細(xì)胞液。獲得的洗滌紅細(xì)胞液手工計數(shù)為2.55×1012/L。

2.5.3 對照組 取我院健康獻(xiàn)血犬血液5 mL,按上述方法分別獲得血清和洗滌紅細(xì)胞液。將洗滌紅細(xì)胞液用生理鹽水再稀釋,稀釋后的洗滌紅細(xì)胞液紅細(xì)胞手工計數(shù)為2.80×1012/L。

2.5.4 自身紅細(xì)胞與自身血清反應(yīng)試驗 取潔凈載玻片4片,分別標(biāo)注患犬 1、患犬 2、健犬 1、健犬2?；既?、健犬1分別滴患犬、健康犬的血清、洗滌紅細(xì)胞液各100μL并混勻,患犬 2、健犬2分別滴患犬、健康犬的血清50μL、洗滌紅細(xì)胞液100μL并混勻。并將4個載玻片放于38.5℃無菌培養(yǎng)箱中靜置并計時。每5 min鏡檢1次。

2.5.5 試驗結(jié)果 見表2。

表2 自身紅細(xì)胞與自身血清反應(yīng)試驗結(jié)果

患犬7年來身體健康,除免疫外從未到醫(yī)院就診,3年前出現(xiàn)過呼吸道癥狀,自喂抗病毒沖劑5 d后恢復(fù)正常,無其他病史、用藥史;血常規(guī)顯示嚴(yán)重貧血;鏡檢網(wǎng)織紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞比例增高,紅細(xì)胞再生良好;鏡檢有破裂紅細(xì)胞、紅細(xì)胞聚集成團,生化總膽紅素、間接膽紅素升高,尿呈茶色、醬油色,紅細(xì)胞出現(xiàn)溶血;自身血清、紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集現(xiàn)象;其他臟器生化指標(biāo)正常,臨床癥狀正常。綜合以上確診為犬原發(fā)性自身免疫性溶血性貧血。該犬經(jīng)治療無效,于15日晚死亡。

3 討論

3.1 該病診斷要明確以下問題：有無貧血,什么性質(zhì)的貧血,是否存在自身抗體與自身紅細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)。

3.2 筆者遇到的幾個病例,血液中均有集結(jié)成團的紅細(xì)胞,試驗時,一定要過濾血液并獲得單個紅細(xì)胞溶液。一次性袋式輸液器的網(wǎng)式藥液過濾器,孔徑為15μm±2μm(紅細(xì)胞直徑為6.6～7.7μm[4]),用它過濾較為理想。

3.3 用過濾、洗滌后的紅細(xì)胞與自身血清反應(yīng)診斷自身免疫性溶血性貧血,沒見相關(guān)報道。該試驗簡單易行,隨時可以做,治療過程中,還可及時了解血清與紅細(xì)胞凝集加重還是減輕,更能準(zhǔn)確的對疾病的預(yù)后做出判斷。

3.4 對有自身抗體與自身紅細(xì)胞明顯凝集時,用上述試驗簡單方便,對有自身抗體但不產(chǎn)生凝集或凝集不強時,上述試驗敏感性低甚至檢驗結(jié)果陰性,需要做庫姆斯試驗。

3.5 庫姆斯試驗要用兔抗犬球蛋白血清,但兔抗犬球蛋白血清不容易獲得,該試驗很受限制。即使可以做該試驗,對有紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集的血液也要過濾,如果不過濾,就無法判斷凝集顆粒是血液中原有的還是試驗中形成的。

[1] 胥洪燦,鄭小波,聶奎,等.犬貓疾病診療學(xué)[M].重慶：西南師范大學(xué)出版社,2006：239.

[2] 李文益.自身免疫性溶血性貧血研究進(jìn)展[J].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志,2008,4(3)：1-4.

[3] 趙冬梅,張艷華,李廣慶,等.用去白細(xì)胞血液制備洗滌紅細(xì)胞方法改進(jìn)的探討[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗,2008,21(3)：318.

[4] 魏泓.醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)[M].成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社,1998：190.