氣相色譜法測定麝香跌打風(fēng)濕膏中水楊酸甲酯的含量

劉莉蘭

麝香跌打風(fēng)濕膏是由馬錢子、顛茄草、水楊酸甲酯等十八味藥制成的復(fù)方制劑，屬臨床常用藥。原標(biāo)準(zhǔn)無含量測定項，本法采用GC法測定水楊酸甲酯的含量，方法簡便、專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

Agilent 6890N氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器，G2613A自動進(jìn)樣器，Agilent 6890化學(xué)工作站。水楊酸甲酯對照品(110707-200107):中國藥品生物制品檢定所。供試品(E03012、E06005、G02001、G02002、G02003、G03004、G03005、G03006、G03008、G04011):廣州敬修堂(藥業(yè))股份有限公司。其他試劑:分析純。

2 GC測定水楊酸甲酯的含量［1～5］

2.1 色譜條件 聚乙二醇(PEG)-20 M毛細(xì)管柱(Agilent 19091N-233 HP-INNOWAX，柱長30 m，內(nèi)徑0.25 mm，膜厚度0.5 μm);程序升溫:初始溫度100℃，以每分鐘4℃的速率升溫至200℃，保持6 min;進(jìn)樣口和檢測器溫度250℃;分流比10:1;流速1.0 ml/min。

2.2 內(nèi)標(biāo)物的選擇 在相同色譜條件下測定水楊酸甲酯對照品、萘和供試品，結(jié)果未加萘的供試品在萘的出峰時間沒有峰，加入萘后萘與水楊酸甲酯分離良好;在相同色譜條件下測定分析純萘和溶劑乙酸乙酯，將萘的色譜圖減去溶劑色譜圖的峰，剩余的色譜峰僅有一個，表明萘的純度較高。表明可以萘作為內(nèi)標(biāo)物。

2.3 提取溶劑的選擇 分別用乙酸乙酯、無水乙醇和甲醇作為溶劑，用相同的方法提取同一批供試品，結(jié)果各色譜峰無明顯差別，其含量分別為6.60、6.20及6.42 mg/g(n=2)，表明乙酸乙酯提取率最高，宜作為提取溶劑。

2.4 提取方法的選擇

2.4.1 分別用超聲30、60、90 min和冷浸8 h提取同一批供試品，結(jié)果各色譜峰無明顯差別，其含量分別為6.22、6.60、6.56及6.37 mg/g(n=2)，表明以超聲60 min的提取率最高。

2.4.2 分別用超聲60 min，加熱回流30、60、90 min、在燒瓶中加乙酸乙酯提取揮發(fā)油及在燒瓶中不加乙酸乙酯提取揮發(fā)油六種方法提取同一批供試品，結(jié)果各色譜峰無明顯差別，其含量分別為 6.58、7.46、7.44、7.42、7.34 及 6.52 mg/g(n=2)，表明以加熱回流30 min的提取率最高。宜以加熱回流30 min作為提取方法。

2.5 溶液的制備

2.5.1 供試品溶液的制備:取本品10片，揭去蓋襯，精密稱定，計算平均片重，剪碎，混勻，取相當(dāng)于1片的重量，精密稱定，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5 ml，再精密加入乙酸乙酯25 ml，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取萘適量，加乙酸乙酯制成每1 ml含1 mg的溶液，即得。

2.5.3 陰性對照溶液的制備 取按本品處方及制法自制的缺水楊酸甲酯陰性對照樣品0.24 g(相當(dāng)于供試品1片的量)，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.6 校正因子測定 取水楊酸甲酯對照品25 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10 ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，吸取2.0 μl，注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子。

2.7 供試品測定 取供試品溶液，吸取2.0 μl，注入氣相色譜儀，測定，即得。

2.8 線性范圍考察 精密吸取水楊酸甲酯對照品溶液(2.1796 mg/ml)0.1、0.2、0.5、1、2、3、4、5 ml于 10 ml量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密吸取上述八種溶液各2.0 μl注入氣相色譜儀，依法測定，以對照品的濃度與內(nèi)標(biāo)物的濃度之比作為橫坐標(biāo)，以對照品的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:y=0.54x+0.0041，r=0.99993。結(jié)果表明，水楊酸甲酯在濃度0.021796～1.0898 mg/ml范圍內(nèi)，其與內(nèi)標(biāo)物的濃度之比和其與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比呈良好的線性關(guān)系。

2.9 精密度試驗

2.9.1 重復(fù)性試驗 取同一批供試品6份，依法測定，結(jié)果平均含量為7.29 mg/g(RSD=0.4%，n=6)。表明本法重復(fù)性良好。

2.9.2 中間精密度試驗 取同一批供試品6份，分別由三人用同一臺儀器依法測定，結(jié)果平均含量為7.79 mg/g(RSD=0.8%，n=6)。表明本法中間精密度良好。

2.10 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，自制備后分別在0、2、4、6、8、25、50 h 依法進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積基本不變，RSD=1.2%(n=7)，表明供試品溶液在50 h內(nèi)測定基本穩(wěn)定。

2.11 不同色譜柱考察 取同一批供試品2份，分別用兩條不同商品規(guī)格的毛細(xì)管柱依法測定含量，結(jié)果無明顯差別，平均值為7.31 mg/g(RSD=0.3%，n=4)。

2.12 專屬性試驗 精密吸取供試品溶液、水楊酸甲酯對照品溶液、陰性對照溶液各2.0 μl，分別用4.11項下的兩條色譜柱依法測定。結(jié)果陰性對照無干擾。(見圖1～3)

圖1 麝香跌打風(fēng)濕膏GC圖(供試品)

圖2 麝香跌打風(fēng)濕膏GC圖(水楊酸甲酯對照品)

圖3 麝香跌打風(fēng)濕膏GC圖(缺水楊酸甲酯陰性對照)

2.13 回收率試驗 取已知含量的同一批供試品，低濃度每份取0.2 g、中間濃度每份取1 g、高濃度每份取2 g，分別各取三份，按供試品所含水楊酸甲酯的量約1:1的比例分別精密加入水楊酸甲酯對照品，依法測定，計算水楊酸甲酯的回收率。結(jié)果平均回收率為101.42%，RSD=2.9%(n=9)。表明本法回收率良好。

2.14 供試品含量測定:取供試品十批，依法測定。結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 曾對五種程序升溫、兩種分流比進(jìn)行了比較，結(jié)果以本法的色譜條件最適合，既能保證水楊酸甲酯峰的柱效、分離度，又能同時檢測本品中的薄荷腦、桂皮醛及丁香酚。

表1 麝香跌打風(fēng)濕膏中水楊酸甲酯的測定結(jié)果(n=2)

3.2 十批供試品的含量差異較大，在生產(chǎn)過程中應(yīng)嚴(yán)格控制工藝條件，控制煉膠的攪拌時間及烘干溫度，以免揮發(fā)性成分的損失;另外，增加半成品的含量測定，可以更好地控制成品的質(zhì)量。

［1］劉杰，董文玲.4種中藥橡膠膏劑中樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯含量的氣相色譜法測定.中成藥，2004，26(10):798.

［2］肖樹雄，馬麗莎，鄭劍紅.氣相色譜法同時測定薄荷通吸入劑中幾種成分的含量.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2005，18(1):51.

［3］國家藥典委員會.中國藥典(一部).化學(xué)工業(yè)出版社，2005:392.

［4］李瑋玲，邱娟.HPLC法測定復(fù)方水楊酸甲酯搽劑的含量.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2007，23(5):533-535.

［5］郭環(huán)娟，鐘穎，張玉嬋.氣相色譜法測定雙靈油中水楊酸甲酯的含量.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2008，24(2):146-147.