涼山彝族地區(qū)雞新城疫免疫程序試驗(yàn)探討

李翠蓉

（西昌學(xué)院，四川西昌 615013）

雞新城疫（ND）是一種由NDV（副黏液病毒）引起的雞的一種高度接觸性和高度毀滅性的急性敗血性傳染病，在我國飼養(yǎng)大環(huán)境中NDV普遍存在，典型、非典型新城疫時(shí)有發(fā)生，而由于新城疫疫苗的廣泛應(yīng)用，典型新城疫已較少見，但非典型新城疫卻呈現(xiàn)上升趨勢。其中一個(gè)重要原因，是免疫程序不合理，不能給雞群提供強(qiáng)有力的保護(hù)。目前，機(jī)械化大型養(yǎng)雞場免疫程序[1]的試驗(yàn)研究國內(nèi)外已有較多的報(bào)告，但就涼山彝族地區(qū)因雞種復(fù)雜，雞齡差異大，飼養(yǎng)分散，敞放養(yǎng)方式，疫苗保藏條件差，所以在本地區(qū)免疫接種困難較大。針對(duì)上述現(xiàn)狀，探討、制定一個(gè)合理的免疫程序，給新城疫流行地區(qū)的雞群提供強(qiáng)有力的保護(hù)是大家關(guān)注的焦點(diǎn)。作者于2008—2009年在西昌市周邊的7個(gè)彝族聚居鄉(xiāng)進(jìn)行了本次試驗(yàn)。

1 材料

1.1 試驗(yàn)雞群

本試驗(yàn)免疫雞群來自西昌市小廟、四合、西鄉(xiāng)、瑯環(huán)、特爾果5鄉(xiāng)6村共2 550只雞，隨機(jī)取532只用于試驗(yàn)檢測。

1.2 生物制品

ND 疫苗：I系（批號(hào)：090411），Ⅱ系（批號(hào)：090208）均由成都天邦生物制品有限公司提供，按說明使用。

HI試驗(yàn)用抗原：系西昌學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院微生物室制備的濃縮抗原，含Lasota系病毒的尿囊液經(jīng)福爾馬林滅活，聚乙二醇濃縮制成，其血凝價(jià)在1:7 200以上，用聚乙烯塑料管小劑量分裝，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

ND強(qiáng)毒：系中國獸藥監(jiān)察所提供的F48E8強(qiáng)毒，對(duì)敏感雞的最小致死量（M.L.D.）為 10-7，1 mL。由本實(shí)驗(yàn)室繼代保存。攻毒時(shí)每只雞肌肉注射10-3，1 mL。

ND凝集原：ND全血平板凝集原（Ag），由成都天邦生物制品有限公司提供。

1.3 稀釋液

試驗(yàn)所用的稀釋溶液均為滅菌的磷酸鹽緩沖液（簡稱PBS）。pH7.4的 PBS 配方[2]：KH2PO40.3 g，Na2HPO42.2g，NaCl8.5g，H2O 1000mL。

1.4 RBC懸液

采健康成年雞新鮮血液，抗凝離心（3 000 r/min）5 min后，用 20倍量pH7.4的PBS液洗滌4次，最后1次離心15 min。吸取壓積紅細(xì)胞（RBC），加PBS液配成1%RBC懸液備用。

1.5 器材

選用96孔V型反應(yīng)板，吸頭，八道移液器（0.025 mL），微型振蕩器，離心機(jī)（3 000 r／min），冰箱，1 次性聚乙稀塑料采血管，注射器（2 mL）。

2 方法

2.1 免疫程序

試驗(yàn)按三個(gè)免疫程序組進(jìn)行。每組免疫雞800~900只。甲組為2~3年的老雞，850只，2008年11月用I系疫苗1次肌注（1 mL/只）對(duì)本組雞肉進(jìn)行1次免疫接種。乙組為2008年8至9月孵出的雛雞，800只（8月和9月孵化的雛雞各分為一小組，每組400只），1~4日齡Ⅱ系疫苗滴鼻首免，15~20日齡Ⅱ系疫苗2免，再于3月齡、5月齡I系疫苗二次免疫接種，先后共免疫四次。丙組為2008年8月孵出的雛雞900只，5~9日齡Ⅱ系疫苗滴鼻首免，再于3月齡I系疫苗肌注（1mL/只）免疫，共免疫接種2次。

2.2 HI抗體檢測

應(yīng)用血凝抑制（HI）試驗(yàn)β-微量法。各試驗(yàn)組雞群隨機(jī)采集血樣。用三棱針刺破翅下靜脈，再用1次性聚乙稀塑料采血管（內(nèi)徑2 mm）引流血液至8~9 cm長度后，分離血清，作為待檢免疫血清（Ig），測定其雞體ND免疫抗體水平（HI抗體）?？贵w滴度效價(jià)用其倒數(shù)的對(duì)數(shù)表示，雞群抗體水平以其抽檢樣品幾何均值表示。

在HI試驗(yàn)的同時(shí)，用ND全血平板HI試驗(yàn)現(xiàn)場隨機(jī)取樣進(jìn)行測定，快速定性。

2.3 免疫效力檢驗(yàn)

HI抗體β-微量法抽檢受試雞只數(shù)240~360只，不少于試驗(yàn)雞群總數(shù)的0.6%~0.9%。在各次免疫后于2009年8月上旬，各組雞群隨機(jī)抽樣測HI抗體水平[3]，并用全血平板HI試驗(yàn)作快速定性。同時(shí)對(duì)每組試驗(yàn)雞隨機(jī)抽取10只進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，檢驗(yàn)其保護(hù)率。攻毒試驗(yàn)設(shè)對(duì)照雞6只，攻毒后連續(xù)觀察15 d，并測定其HI抗體滴度，在觀察期間內(nèi)ND死亡或嚴(yán)重發(fā)病者均判為不保護(hù)。

3 結(jié)果

3.1 β-微量法HI抗體檢測結(jié)果

甲組免疫雞群：為西昌市四合鄉(xiāng)共免疫雞850只，其中在木阿莫村和阿為克子村隨機(jī)抽測18戶（共養(yǎng)雞156只）88只，均為2~3年的老雞。乙組免疫雞群；西昌市瑯環(huán)鄉(xiāng)共免疫雞800只，其中在吞斤阿莫村和堅(jiān)覺八甘村隨機(jī)抽測12戶（共養(yǎng)雞126只）58只，年齡均為2月齡新雞。丙組免疫雞群：為西昌市特爾果鄉(xiāng)共免疫雞900只，其中在尾子可拉達(dá)村和古基堡村隨機(jī)抽測8戶（共養(yǎng)雞186只）59只，年齡均為8~12月齡的新雞。甲乙丙三個(gè)組隨機(jī)抽測雞只血樣，用β~微量法HI抗體檢測結(jié)果見表1。

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3.2 全血平板HI抗體檢測結(jié)果

甲組免疫雞群為小廟鄉(xiāng)2~3年老雞隨機(jī)抽檢79只，乙組免疫雞群為四合鄉(xiāng)木阿莫村5~12月齡雞隨機(jī)抽檢48只，丙組免疫雞群為西鄉(xiāng)鄉(xiāng)12月齡雞隨機(jī)抽檢170只。甲乙丙三個(gè)組隨機(jī)抽測雞只血樣，用ND全血平板HI抗體檢測[4]，結(jié)果見表 2。

3.3 攻毒試驗(yàn)結(jié)果

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于2009年8月上旬在對(duì)各組雞群抽測HI抗體滴度和ND全血平板HI抗體快速檢測的同時(shí)，對(duì)甲乙丙三組雞群隨機(jī)各取10只（其中乙組11、12月齡雞各取5只）免疫雞進(jìn)行攻毒試驗(yàn)[5]，并設(shè)對(duì)照組（未免疫雞10只），結(jié)果見表3。

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4 討論

4.1 試驗(yàn)結(jié)果證明，2年以上的老雞（甲組）在1年1次NDI系頸皮下注射免疫接種后9個(gè)月，其HI抗體滴度平均值為6.29log2，有的雞只高達(dá)（8~9）log2。攻毒試驗(yàn)結(jié)果保護(hù)率為100%。說明2年以上的老雞每年1次I系免疫具有良好的保護(hù)力，能夠抵抗ND野毒的侵襲而免于感染。1年以內(nèi)的新雞（丙組），經(jīng)9日齡Ⅱ系滴鼻和3月齡I系頸皮下注射后的9個(gè)月，其HI抗體滴度平均值為4.53log2，已接近免疫臨界線（4log2）水平，攻毒試驗(yàn)結(jié)果保護(hù)率僅80%。這時(shí)，如果雞群遇ND野毒侵襲，那些少數(shù)免疫水平較低的雞就可能發(fā)病，或呈現(xiàn)一過型ND經(jīng)過。建議，在常規(guī)Ⅱ系和I系免疫后，雞齡11~12月再行NDI系頸皮下注射免疫接種1次，尤其對(duì)有ND流行的鄉(xiāng)村雞群可獲得堅(jiān)強(qiáng)的保護(hù)力。

4.2 經(jīng)Ⅱ系2次滴鼻后再于3、5月齡分別I系頸皮下注射等4次免疫（乙組），并在末次接種后6~7個(gè)月，其HI抗體滴度平均值為4.86log2與丙組HI抗體滴度平均值4.53log2近似，其均數(shù)差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果p>0.05，表明其差異不顯著。雖用I系2次免疫接種但與丙組的I系1次免疫的HI抗體滴度差異不顯著，可能是由于2次I系注射間隔時(shí)間太短（僅2~3個(gè)月），因Ag與Ig中和而影響Ig產(chǎn)生，保護(hù)力也相應(yīng)下降（攻毒保護(hù)率僅90%），故盲目增加免疫次數(shù)不一定能獲得良好的免疫效果。

4.3 不同免疫程序雞群ND微量法Ig檢測結(jié)果表明，甲組HI抗體滴度平均值為6.29log2，而丙組則為4.53log2。甲組HI抗體平均水平比丙組高，其均數(shù)差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果p<0.01，表明其差異極顯著。說明用同一種疫苗免疫不同年齡的雞，其Ig滴度和保護(hù)率不盡相同（甲組攻毒保護(hù)率100%而丙組僅90%）。

建議廣大農(nóng)村特別是涼山彝族少數(shù)民族地區(qū)，在新雞老雞混合放養(yǎng)，且不具備免疫檢測條件的情況下，在對(duì)雞群進(jìn)行常規(guī)免疫后，于冬季（1~2月份），對(duì)當(dāng)年新雞（9~10月齡）和老雞（2年以上）普遍I系苗接種1次，改夏季普防為冬季普防，可使春季孵出的小雞獲得較一致的母源Ig。同時(shí)，冬季普防也有利于疫苗的保存、運(yùn)輸和使用。以上試驗(yàn)研究結(jié)果，詣指對(duì)上述地區(qū)雞群制定一個(gè)合理的免疫程序，給新城疫流行地區(qū)的雞群提供強(qiáng)有力的保護(hù)。

[1]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2002:304-308.

[2]陳寶秋，曹靜.商品蛋雞免疫程序的制定要點(diǎn) [J].家禽科學(xué)，2005（1）:65-68.

[3]坤慶功.免疫增強(qiáng)劑在雞疫病防治中的應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2005，26（10）:28-32.

[4]吳竹梅，江海濤.雞新城疫免疫應(yīng)注意的幾個(gè)問題 [J].衛(wèi)生防疫，2008（11）:111.

[5]索朗斯珠，查果，強(qiáng)巴央宗，等.藏雞新城疫免疫程序的研究及預(yù)防對(duì)策[J].西藏科技，2005，152（12）:37-38.