• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蓮藕腐敗病病原菌致病性及遺傳差異性的研究

    2010-11-12 13:04:26梁志懷魏林安哲宇
    長江蔬菜 2010年14期
    關(guān)鍵詞:牙簽蓮藕鐮刀

    梁志懷,魏林,安哲宇

    (1.湖南省植物保護(hù)研究所,湖南長沙,410125;2.中南大學(xué)研究生院隆平分院)

    蓮藕是近幾年農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)優(yōu)化調(diào)整、生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展的主要水生蔬菜之一,大田種植、池藕開發(fā)已成為農(nóng)民增收的主要經(jīng)濟(jì)來源。蓮藕腐敗病為蓮藕生產(chǎn)上的主要病害,給蓮藕生產(chǎn)造成較大的損失,嚴(yán)重的可使蓮藕商品價(jià)值減少60%以上[1]。由于藕農(nóng)常習(xí)慣于周年和連年的重茬種植,該病的發(fā)生有逐年加重的趨勢。蓮藕腐敗病的初侵染源是帶菌的種藕和帶病的土壤,最初發(fā)病受害部位為地下莖,不易觀察,常失去最佳防治時(shí)期,化學(xué)防治收效不大。因此,利用抗病品種是防治蓮藕腐敗病最為有效的措施,這就有必要確定腐敗病菌的致病力與優(yōu)勢種群。本文研究確定了測定蓮藕腐敗病菌致病性的快速、準(zhǔn)確、簡便鑒定的方法,并對(duì)供試菌株間的致病性分化與遺傳背景間差異性的關(guān)系作了初步分析,結(jié)果如下。

    1 材料與方法

    1.1 供試病原菌

    選取蓮藕腐敗病主要致病菌鐮刀菌作為供試菌株,7個(gè)鐮刀菌菌株中有5個(gè)菌株為不同區(qū)域發(fā)病藕上分離、純化培養(yǎng)獲得,另2個(gè)菌株為從百合、黃瓜枯萎病病株上分離、純化培養(yǎng)獲得。7個(gè)供試菌株來源分別為 F1:長沙縣藕田病株;F2:湘鄉(xiāng)藕田病株;F3:超市病藕;F4、F5:長沙市菜市場病藕;F6:百合枯萎病株;F7:黃瓜枯萎病株。

    1.2 供試藕塊

    從藕田里取長勢較為一致的健康嫩藕節(jié),取中間段6 cm,從中間縱切后供試。

    1.3 不同接種方法測定供試病原菌致病性[2,3]

    ①病原菌菌絲牙簽接種 接種物培養(yǎng):將供試鐮刀菌移植于PDA培養(yǎng)基平板上,于25℃下恒溫培養(yǎng)4~5 d,備用;選用軟木質(zhì)牙簽,水煮2~3次(防止牙簽上的化學(xué)酚類物質(zhì)等抑制鐮刀菌的生長),每次煮1 h,煮后用清水沖洗2~3次,晾至半干后將牙簽尖部輕放于裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中,牙簽的尾部用滅菌的直徑0.5 cm的濾紙托起,每皿放3根,將7個(gè)供試鐮刀菌菌塊(0.5 cm×0.5 cm)分別接種于培養(yǎng)皿的中央,置于25℃下培養(yǎng),使病原菌從培養(yǎng)基向牙簽上蔓延生長,當(dāng)牙簽從尖部被病原菌覆蓋至牙簽的1/4后,用于供試藕塊的接種。

    病原物接種:先用滅菌的大號(hào)注射針頭在藕塊要接種的部位刺1 cm深(防止直接用牙簽插入時(shí)附著在牙簽上的病原菌脫落),再將帶菌牙簽插入藕塊接孔中,每孔接牙簽2根,每藕塊接3個(gè)孔。接種后的藕塊置于(26±1)℃溫度條件下的培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)。

    ②病原菌菌絲塊接種 藕塊接種:將在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的各供試鐮刀菌用7 mm無菌打孔器在無菌的條件下,自菌落邊緣切取菌餅,用接種器將菌餅接種于藕塊的中央,菌絲面朝下,每藕塊接種1個(gè)菌餅,接種后將藕塊置(26±1)℃溫度條件下的培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)。

    藕葉接種:配置植物營養(yǎng)液,將初展的嫩葉插入裝有基本植物營養(yǎng)液的燒杯中,將藕塊接種中制備的菌絲塊接種在葉片距邊緣8 cm處,相距10 cm放置1塊,菌絲塊上放置滅菌的棉花團(tuán)保濕,再將藕葉連同燒杯置(26±1)℃溫度條件下的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以接種不含菌絲體的等體積瓊脂塊為對(duì)照。

    ③病原菌孢子懸浮液接種 病原菌孢子懸浮液的制備:將在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的各供試菌株的菌絲體,加適量的無菌水清洗,用4層滅菌紗布過濾后,用無菌水將孢子量調(diào)整為1×108個(gè)/mL,制備成供試孢子懸浮液。

    藕塊接種:將縱切的藕塊置于保濕的培養(yǎng)皿內(nèi),每藕塊均勻噴霧15 mL孢子懸浮液,置于(26±1)℃溫度條件下的培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)。以噴霧蒸餾水為對(duì)照。

    藕葉接種:采用與藕塊接種的相同方法處理藕葉,將孢子懸浮液均勻地噴霧于葉片上,接種后的葉片連同燒杯置于(26±1)℃溫度條件下的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以噴霧蒸餾水為對(duì)照。

    不同菌株藕塊接種15塊,葉片接種6片。9 d后記錄各處理發(fā)病率;按調(diào)查的病級(jí)數(shù),計(jì)算病指。

    1.4 病害發(fā)病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

    根據(jù)腐敗病在蓮藕葉片、地下莖的發(fā)病特點(diǎn),確定病害發(fā)病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

    ①接種藕塊病級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 0級(jí):藕塊生長正常、完好;1級(jí):藕塊有輕微病變,病變尚未侵入藕塊組織;2級(jí):藕塊組織有明顯病變,維管束呈褐色;3級(jí):藕塊維管束呈深褐色,變色部分占總面積的10%以下;4級(jí):變色部分占藕塊總面積的10%~30%;5級(jí):變色部分占藕塊總面積的30%以上。每個(gè)藕塊為一計(jì)量單位。

    ②接種葉片病級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) a.菌絲塊接種葉片。0級(jí):葉片上未見癥狀;1級(jí):淺褐色病斑環(huán)在葉片上擴(kuò)展 0~3.0 cm;3 級(jí):水浸狀病斑環(huán)在葉柄上擴(kuò)展 3.0~3.5 cm;5 級(jí):水浸狀病斑環(huán)在葉柄上擴(kuò)展 3.5~4.0 cm;7 級(jí):水浸狀病斑環(huán)在葉柄上擴(kuò)展 4.0~4.5 cm;9 級(jí):水浸狀病斑環(huán)在葉柄上擴(kuò)展4.5 cm以上。以每個(gè)菌絲塊為一計(jì)量單位。

    b.孢子懸浮液噴霧接種葉片。0級(jí):無病癥;1級(jí):接種葉出現(xiàn)可見的褪綠小點(diǎn)或黃色小點(diǎn);2級(jí):接種葉出現(xiàn)1~5個(gè)黑色斑點(diǎn);3級(jí):接種葉上出現(xiàn)10個(gè)黑色斑點(diǎn)或葉尖出現(xiàn)黑斑;4級(jí):接種葉上出現(xiàn)11~15個(gè)黑色斑點(diǎn);5級(jí):接種葉上出現(xiàn)16~20個(gè)黑色斑點(diǎn);6級(jí):接種葉上出現(xiàn)20個(gè)以上黑色斑點(diǎn)。整個(gè)葉片十字交叉分為4等份,每1份為1個(gè)計(jì)量單位。

    1.5 供試病原菌遺傳差異性分析

    ①供試病原菌菌絲體的培養(yǎng) 在PDA平板上培養(yǎng)5 d的供試菌株菌落邊緣取10 mm×10 mm的菌絲塊,轉(zhuǎn)入100 mL的PD液體培養(yǎng)基中,25℃條件下?lián)u床120 r/min震蕩培養(yǎng)6 d,真空抽濾獲得菌絲體后,分別用無菌水和滅菌的生理鹽水洗滌2次后,45℃烘干備用。

    ②DNA的提取 具體操作參照曹宜等方法[4],略作修改。

    ③引物篩選和RAPD擴(kuò)增 從18條擴(kuò)增條帶數(shù)量適中、條帶清晰可辨的隨機(jī)引物(均由上海生工生物公司合成)中,進(jìn)一步篩選出主帶明顯、穩(wěn)定的3條隨機(jī)引物作為試驗(yàn)用引物。其引物序列分別為:S6 5'TGCCGAGCTG 3';S11 5'TGGACCGGTG 3';S16 5'AGATGCAGCC 3'。

    PCR反應(yīng)體系總體積為25 uL。其中:模板DNA 1 μL(50 ng),隨機(jī)引物 1 μL(約 5 pmol),10×PCR Buffer(含 Mg2+) 2.5 μL,dNTP 2 μL,Taq 酶 1 單位(U)0.5 U,加 ddH2O 至 25 μL。

    PCR反應(yīng)程序:94℃ 預(yù)變性4 min; 循環(huán):94℃變性30 s,37℃退火30 s,72℃ 延伸1 min,共35輪循環(huán);循環(huán)結(jié)束后,72℃ 延伸8 min,16℃保溫。

    檢驗(yàn): 取 PCR 產(chǎn)物 7.5 μL 加 2.5 μL 上樣緩沖液于2% 瓊脂糖膠(含0.5 μg/mL溴化乙錠) 上穩(wěn)壓100~110 V電泳1.5 h。紫外檢測儀觀察、拍照。

    ④數(shù)據(jù)分析 根據(jù)供試菌株RAPD-PCR擴(kuò)增條帶的有無,以1,0記數(shù)。統(tǒng)計(jì)穩(wěn)定、清晰的條帶,采用DPS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 供試病原菌不同接種方法對(duì)寄主發(fā)病的影響

    試驗(yàn)中采用5種方法對(duì)供試病原菌進(jìn)行人工接種,接種藕塊和葉片發(fā)病情況表明,所有接種方法都可導(dǎo)致接種體發(fā)病,且人工接種植株的感染癥狀與大田中自然發(fā)病的相同,在接種病株的再分離中所得病原菌的形態(tài)和培養(yǎng)性狀與接種菌完全一致。

    供試藕塊和葉片發(fā)病情況見表1。如表1所示,所有供試菌株中以菌絲塊對(duì)藕塊接種所致發(fā)病率最高,且發(fā)病最嚴(yán)重,病情指數(shù)最高。用病原菌菌絲體牙簽接種,藕塊的發(fā)病率雖然也較高,但與菌絲塊接種相比,無顯著差異,但接種藕塊的發(fā)病嚴(yán)重度則低于菌絲塊接種。孢子懸浮液噴霧接種,則是葉片接種的較好方法,該方法接種病原菌后,葉片的發(fā)病率及發(fā)病程度均高于藕塊的。試驗(yàn)結(jié)果還表明,不同接種方法,接種物出現(xiàn)癥狀的時(shí)間不同,菌絲塊接種的藕塊4 d左右即出現(xiàn)典型的癥狀,孢子懸浮液噴霧接種的葉片6 d左右才出現(xiàn)典型的癥狀。

    表1 供試病原菌不同接種方式的發(fā)病程度

    試驗(yàn)結(jié)果表明,用藕塊進(jìn)行腐敗病病原菌致病性測定時(shí),可選擇病原菌菌絲塊接種的方法;用藕葉進(jìn)行測定時(shí),可選擇孢子懸浮液噴霧接種的方法。綜合考慮接種物發(fā)病嚴(yán)重度,病情調(diào)查時(shí)記數(shù)的復(fù)雜性和接種后保濕效果好壞等因素,最適宜的方法應(yīng)首選藕塊菌絲塊接種測定的方法。

    2.2 不同來源病原菌對(duì)寄主致病性存在著分化

    試驗(yàn)中所采用的5種接種方法測定蓮藕腐敗病菌的致病力,試驗(yàn)表明,供試的7個(gè)菌株間的致病力均表現(xiàn)出差異性,存在明顯的致病性分化,但這種菌株間致病力差異與菌株地域來源并未表現(xiàn)出明顯的相關(guān)性。并且,各供試菌株在不同接種方法下,其所表現(xiàn)出的致病力強(qiáng)度具有一致性,如F1菌株,其在5種不同接種方法下,均表現(xiàn)出較強(qiáng)的致病力;F6菌株在5種接種方法下,致病力表現(xiàn)得都較弱。從表1中還看出,從發(fā)病的藕塊上分離的鐮刀菌菌株對(duì)藕塊、葉片致病力較強(qiáng);從百合、黃瓜上分離獲得的鐮刀菌菌株對(duì)供試藕塊、葉片也具有一定的侵染性。

    2.3 不同來源病原菌遺傳多樣性

    引物S16對(duì)6個(gè)供試鐮刀菌病原菌菌株的RAPD擴(kuò)增圖譜見圖1,根據(jù)擴(kuò)增出的譜帶繪制的聚類樹狀圖??梢钥闯?,來自同一植株(蓮藕)的鐮刀菌菌株間既有共同的特征性譜帶,又有自己特異性的譜帶,菌株間存在著較大的遺傳多態(tài)性。這種多態(tài)性似乎同地域沒有關(guān)系。如分離自湘鄉(xiāng)藕田病株的病原菌與分離自超市病藕的病原菌遺傳相似性非常高(但超市病藕產(chǎn)地不詳);與分離自長沙病株上的病原菌則存在較大的遺傳距離。而來自百合和黃瓜兩寄主的鐮刀菌,與來自蓮藕寄主的鐮刀菌菌株多存在較大的遺傳差距。

    圖1 引物S16對(duì)供試鐮刀菌的RAPD擴(kuò)增圖譜

    3 小結(jié)與討論

    筆者初步摸索了蓮藕腐敗病菌(鐮刀菌)致病性測定的室內(nèi)人工接種方法。結(jié)果表明,病原菌菌絲塊對(duì)嫩藕藕塊接種,可達(dá)到發(fā)病率高、發(fā)病程度高的效果,這為鑒定我國蓮藕主產(chǎn)區(qū)不同致病菌之間的小種差異、蓮藕抗病性品種的篩選提供了簡便、易行、準(zhǔn)確的抗性鑒定人工接種方法,但這種實(shí)驗(yàn)室內(nèi)病原菌與藕塊單純的一對(duì)一的互作結(jié)果所篩選出的蓮藕對(duì)病原菌的抗性與田間表現(xiàn)是否一致,還需要進(jìn)一步研究。

    試驗(yàn)結(jié)果表明,不同蓮藕腐敗病鐮刀菌病原菌間致病力表現(xiàn)出了一定差異,對(duì)供試菌株基因組DNA應(yīng)用RAPD技術(shù)進(jìn)行多態(tài)性分析,結(jié)果表明,各菌株間存在一定的遺傳多態(tài)性,因此確定蓮藕主栽區(qū)腐敗病致病菌是否存在生理小種的分化及其強(qiáng)致病性生理小種的篩選,對(duì)該病害的有效防治及抗病品種的選育,就顯得尤為重要。此外,非蓮藕寄主中分離獲得的鐮刀菌對(duì)蓮藕也具有一定的侵染能力,能引起蓮藕腐敗病,在對(duì)蓮藕腐敗病進(jìn)行防治及耕作時(shí)應(yīng)對(duì)這些因素加以考慮。

    猜你喜歡
    牙簽蓮藕鐮刀
    記憶里的一彎鐮刀
    愛“吃”糖的牙簽
    夏季這樣管蓮藕
    蓮藕
    大灰狼(2018年8期)2018-09-03 18:45:42
    藏在泥中的蓮藕
    蓮藕這樣不易黑
    樂活老年(2016年9期)2016-04-11 15:40:45
    神奇的牙簽
    一把鐮刀
    鴨綠江(2013年12期)2013-03-11 19:42:10
    鐮刀與鐵錘
    中國火炬(2011年7期)2011-07-25 10:38:31
    牙簽城
    超色免费av| 99久久综合免费| 国产一区二区三区av在线| 欧美在线黄色| 婷婷色av中文字幕| 丝袜美足系列| 男的添女的下面高潮视频| 午夜福利视频在线观看免费| 嫩草影院入口| 国产精品一区二区在线不卡| 麻豆av在线久日| 国产探花极品一区二区| 亚洲国产成人一精品久久久| 黄色怎么调成土黄色| 国产精品成人在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 免费看av在线观看网站| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲,欧美,日韩| 一二三四在线观看免费中文在| 天美传媒精品一区二区| 国产激情久久老熟女| 亚洲精品乱久久久久久| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人精品久久二区二区91 | 欧美精品一区二区免费开放| 国产日韩欧美在线精品| 国产亚洲一区二区精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 人人澡人人妻人| 亚洲精品乱久久久久久| 一级,二级,三级黄色视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 人妻一区二区av| 妹子高潮喷水视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美另类一区| 又大又黄又爽视频免费| 久久精品国产亚洲av高清一级| 青春草视频在线免费观看| 亚洲国产最新在线播放| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲经典国产精华液单| 丝袜在线中文字幕| 热re99久久国产66热| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲天堂av无毛| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲欧美色中文字幕在线| av女优亚洲男人天堂| 青春草亚洲视频在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产一区二区激情短视频 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产在视频线精品| 国产激情久久老熟女| av网站免费在线观看视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 黄色毛片三级朝国网站| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 综合色丁香网| av免费观看日本| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 精品第一国产精品| 日本色播在线视频| 在线精品无人区一区二区三| 久久久久久久国产电影| 成年人午夜在线观看视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 精品一区二区免费观看| 在线天堂最新版资源| 亚洲在久久综合| 在线免费观看不下载黄p国产| 看免费av毛片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 1024视频免费在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 久久国内精品自在自线图片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 岛国毛片在线播放| av在线app专区| 另类精品久久| 99九九在线精品视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 午夜av观看不卡| 免费大片黄手机在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产亚洲一区二区精品| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲天堂av无毛| 90打野战视频偷拍视频| 久久狼人影院| 国产成人欧美| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久青草综合色| 一边亲一边摸免费视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 美女中出高潮动态图| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品视频人人做人人爽| 国产精品免费视频内射| 国产成人免费无遮挡视频| av网站在线播放免费| 69精品国产乱码久久久| 欧美激情高清一区二区三区 | 嫩草影院入口| 欧美精品av麻豆av| 亚洲精品av麻豆狂野| 美国免费a级毛片| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲内射少妇av| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩大片免费观看网站| 18在线观看网站| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产成人一区二区在线| 久久久国产欧美日韩av| 香蕉精品网在线| 婷婷色综合www| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 90打野战视频偷拍视频| 黄色配什么色好看| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲国产成人一精品久久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| 2021少妇久久久久久久久久久| 9色porny在线观看| 中国三级夫妇交换| 日本av免费视频播放| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久鲁丝午夜福利片| 国产成人精品婷婷| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美精品一区二区大全| 国产欧美亚洲国产| 亚洲第一青青草原| 欧美成人午夜免费资源| 国产精品免费视频内射| 亚洲成人手机| 国产视频首页在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| av在线观看视频网站免费| 国产av码专区亚洲av| 十八禁网站网址无遮挡| 久久这里有精品视频免费| 精品亚洲成国产av| 亚洲三区欧美一区| 亚洲国产精品成人久久小说| 午夜日韩欧美国产| 黄色怎么调成土黄色| 国产一区亚洲一区在线观看| av福利片在线| 国产精品国产三级专区第一集| 青草久久国产| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲av日韩在线播放| 国产精品.久久久| 宅男免费午夜| 一区福利在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久久免费高清国产稀缺| 在线免费观看不下载黄p国产| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 高清不卡的av网站| 久久久精品94久久精品| 精品久久久久久电影网| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲av国产av综合av卡| 日韩人妻精品一区2区三区| 伊人亚洲综合成人网| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 不卡av一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 69精品国产乱码久久久| 久久99精品国语久久久| 99国产综合亚洲精品| 在线精品无人区一区二区三| 尾随美女入室| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 黄色 视频免费看| 看免费av毛片| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩中字成人| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲综合色惰| 久久久久精品久久久久真实原创| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久精品人人爽人人爽视色| av有码第一页| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲成人av在线免费| 日本免费在线观看一区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲成人av在线免费| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 蜜桃在线观看..| 亚洲一区中文字幕在线| 日韩成人av中文字幕在线观看| 午夜激情久久久久久久| av免费观看日本| 哪个播放器可以免费观看大片| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲av福利一区| 一本色道久久久久久精品综合| av又黄又爽大尺度在线免费看| 99热国产这里只有精品6| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久久久久伊人网av| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精品乱久久久久久| 色吧在线观看| 美女主播在线视频| 国产成人91sexporn| 日韩大片免费观看网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 中国三级夫妇交换| 99香蕉大伊视频| 日韩精品有码人妻一区| 日本午夜av视频| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲欧洲日产国产| 久久97久久精品| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品免费视频内射| 99热全是精品| 午夜福利视频在线观看免费| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 丝袜喷水一区| 日韩视频在线欧美| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 美女中出高潮动态图| 宅男免费午夜| 午夜福利,免费看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日本-黄色视频高清免费观看| 制服丝袜香蕉在线| 久久99一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 永久网站在线| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 男女啪啪激烈高潮av片| 香蕉国产在线看| 亚洲伊人久久精品综合| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久久久久精品精品| 老司机影院成人| 中文字幕亚洲精品专区| 久久精品国产亚洲av天美| 国产爽快片一区二区三区| 午夜福利视频精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 免费观看性生交大片5| 亚洲精品久久午夜乱码| xxxhd国产人妻xxx| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲国产欧美网| 老司机影院成人| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久国内精品自在自线图片| 久久精品夜色国产| 99久久精品国产国产毛片| 好男人视频免费观看在线| 午夜福利影视在线免费观看| 一二三四在线观看免费中文在| 婷婷色av中文字幕| 男女午夜视频在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲第一av免费看| 亚洲第一青青草原| 国产一区二区三区综合在线观看| av.在线天堂| 九九爱精品视频在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 一级,二级,三级黄色视频| 成人国语在线视频| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利影视在线免费观看| 少妇 在线观看| 国产成人aa在线观看| 三级国产精品片| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 日本91视频免费播放| 亚洲伊人色综图| 97在线人人人人妻| 成年女人在线观看亚洲视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 黄片小视频在线播放| 亚洲在久久综合| 久久av网站| 九草在线视频观看| av有码第一页| 国产精品av久久久久免费| 国产成人精品久久二区二区91 | 人体艺术视频欧美日本| 男女边摸边吃奶| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲av.av天堂| 国产精品三级大全| 亚洲综合色网址| 国产亚洲最大av| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲色图综合在线观看| 丝袜美足系列| 欧美国产精品va在线观看不卡| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久午夜福利片| 欧美日韩av久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久久久久人妻| 男女无遮挡免费网站观看| h视频一区二区三区| 欧美日本中文国产一区发布| 岛国毛片在线播放| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩人妻精品一区2区三区| 极品人妻少妇av视频| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| www.熟女人妻精品国产| 国产精品 欧美亚洲| 日日爽夜夜爽网站| 日本av手机在线免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久人人爽人人片av| 欧美成人精品欧美一级黄| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 婷婷成人精品国产| 国产爽快片一区二区三区| 波多野结衣av一区二区av| 青春草视频在线免费观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 国产成人欧美| 欧美成人午夜免费资源| 男人添女人高潮全过程视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产毛片在线视频| 国产精品一区二区在线观看99| 成人亚洲精品一区在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产精品一区二区在线观看99| 美女大奶头黄色视频| 一区在线观看完整版| 日韩精品有码人妻一区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产精品 欧美亚洲| 天美传媒精品一区二区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产精品一国产av| 亚洲国产欧美在线一区| 精品久久久精品久久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 成年动漫av网址| 日韩电影二区| 免费大片黄手机在线观看| 看免费成人av毛片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一级毛片 在线播放| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久免费观看电影| 黄频高清免费视频| 天堂8中文在线网| 18禁观看日本| 成人亚洲欧美一区二区av| 色吧在线观看| 久久久久精品性色| 黄色配什么色好看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩人妻精品一区2区三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 飞空精品影院首页| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 各种免费的搞黄视频| 99久国产av精品国产电影| 两个人免费观看高清视频| 久久精品国产自在天天线| av电影中文网址| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲av国产av综合av卡| 在线观看美女被高潮喷水网站| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美日韩综合久久久久久| 精品午夜福利在线看| 国产精品一二三区在线看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产黄色免费在线视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久久久久久国产电影| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲av男天堂| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产精品国产av在线观看| 国产 一区精品| 午夜免费鲁丝| 午夜精品国产一区二区电影| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产综合精华液| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩电影二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品少妇内射三级| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 大片免费播放器 马上看| 欧美av亚洲av综合av国产av | 中文字幕制服av| 国产一区二区激情短视频 | 电影成人av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产精品 国内视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 自线自在国产av| 亚洲成人av在线免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 成人二区视频| 国产在线视频一区二区| 99热网站在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 十八禁网站网址无遮挡| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品无大码| 在线观看免费高清a一片| 丝瓜视频免费看黄片| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 激情五月婷婷亚洲| 热re99久久精品国产66热6| 久久精品人人爽人人爽视色| 少妇人妻 视频| 国产片特级美女逼逼视频| 国产毛片在线视频| 精品国产一区二区久久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产伦理片在线播放av一区| av免费观看日本| 国产片特级美女逼逼视频| 女人久久www免费人成看片| 精品久久蜜臀av无| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产一区二区激情短视频 | 久久久国产一区二区| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲欧洲国产日韩| 最近手机中文字幕大全| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 丝袜人妻中文字幕| 精品少妇内射三级| 精品视频人人做人人爽| 午夜日本视频在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲图色成人| 大话2 男鬼变身卡| 国产视频首页在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久久精品94久久精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久青草综合色| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 女人精品久久久久毛片| 久久久久网色| 不卡视频在线观看欧美| 久久久国产一区二区| 久久精品国产a三级三级三级| 交换朋友夫妻互换小说| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产午夜精品一二区理论片| 看非洲黑人一级黄片| 午夜91福利影院| 日韩欧美一区视频在线观看| 日本wwww免费看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品一区在线观看国产| 在线观看人妻少妇| 91国产中文字幕| 国产成人a∨麻豆精品| 精品一品国产午夜福利视频| 中文欧美无线码| 综合色丁香网| 国产淫语在线视频| 一区在线观看完整版| 一级a爱视频在线免费观看| 黑丝袜美女国产一区| 91久久精品国产一区二区三区| www.自偷自拍.com| 日韩一本色道免费dvd| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日韩电影二区| 亚洲国产av新网站| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产av码专区亚洲av| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲三级黄色毛片| 久久精品国产自在天天线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产高清不卡午夜福利| 国产一区二区 视频在线| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 最黄视频免费看| 亚洲五月色婷婷综合| 国产免费现黄频在线看| 国产精品一区二区在线不卡| 91成人精品电影| 观看av在线不卡| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产一区二区激情短视频 | 最近最新中文字幕大全免费视频 | 青春草视频在线免费观看| 中国三级夫妇交换| 国产在线一区二区三区精| 国产黄色免费在线视频| 性色avwww在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 搡老乐熟女国产| 国产成人精品一,二区| 久久久久精品久久久久真实原创| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 久久99精品国语久久久| 一级毛片我不卡| 女人久久www免费人成看片| 国产高清国产精品国产三级| 欧美精品高潮呻吟av久久| av福利片在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 90打野战视频偷拍视频| 成人影院久久| 美女午夜性视频免费| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品一二三区在线看| 精品福利永久在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产精品二区激情视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 高清在线视频一区二区三区| 视频在线观看一区二区三区| 五月天丁香电影| 国产精品av久久久久免费| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品少妇黑人巨大在线播放| 黑人猛操日本美女一级片| 国产色婷婷99| 国产97色在线日韩免费| 香蕉精品网在线| 亚洲精品,欧美精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久人妻熟女aⅴ| 午夜福利视频精品| 人妻一区二区av| 多毛熟女@视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产成人91sexporn| 亚洲精品在线美女| 成人毛片60女人毛片免费| av不卡在线播放| 精品酒店卫生间| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美黄色片欧美黄色片| www.精华液| 丝袜喷水一区| 日本色播在线视频| 99热全是精品| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 午夜老司机福利剧场| 不卡视频在线观看欧美| 免费观看性生交大片5| 亚洲男人天堂网一区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品不卡视频一区二区| √禁漫天堂资源中文www| 丝袜喷水一区| 极品人妻少妇av视频| 亚洲精品一区蜜桃| 国产麻豆69| 韩国精品一区二区三区| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 日韩视频在线欧美| 亚洲成国产人片在线观看|