• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物羥基衍生化條件的優(yōu)化

    2010-11-08 05:04:18潘學(xué)軍劉晶靚高建培
    環(huán)境化學(xué) 2010年1期
    關(guān)鍵詞:類(lèi)固醇檢出限內(nèi)分泌

    黃 斌 潘學(xué)軍 劉晶靚 方 鍇 王 宇 高建培

    (昆明理工大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,昆明,650093)

    類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物羥基衍生化條件的優(yōu)化

    黃 斌 潘學(xué)軍**?jiǎng)⒕ъn 方 鍇 王 宇 高建培

    (昆明理工大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,昆明,650093)

    以 N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺 (MSTFA)為衍生化試劑,采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) (GCMS)系統(tǒng)研究了 4種類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物雌酮 (E1)、17β-雌二醇 (E2)、雌三醇 (E3)、17α-乙炔基雌二醇(EE2)的羥基衍生化,主要考察了MSTFA用量、衍生化溫度、衍生化時(shí)間對(duì)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物衍生化效果的影響以及衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性、標(biāo)準(zhǔn)曲線、儀器檢出限等.結(jié)果表明:100μl濃度為0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,MSTFA的最佳用量為 20μl;最佳衍生化條件為 70℃下反應(yīng) 30min;衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性較好,在 -20℃下放置 48h,相對(duì)響應(yīng)因子 (RRF)基本沒(méi)有降低;在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,各待測(cè)物具有良好的線性相關(guān)性,E1和 E2的儀器檢出限為 0.1pg·μl-1,EE2和 E3的儀器檢出限為 1pg·μl-1.

    類(lèi)固醇,內(nèi)分泌干擾物,羥基,衍生化,MSTFA.

    類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物 (Steroids Endocrine Disrupting Chemicals)是由膽固醇合成的一種生物活性物質(zhì),具有類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)[1],這類(lèi)物質(zhì)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,相對(duì)其它環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,有更強(qiáng)的內(nèi)分泌干擾作用,與人工合成的化學(xué)物質(zhì)相比,對(duì)生態(tài)環(huán)境影響尤其顯著[2],即使環(huán)境濃度在 0.1ng·l-1以下也會(huì)對(duì)生物體造成危害[3].類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物難降解、高親脂性、殘留期長(zhǎng)等特性使得此類(lèi)物質(zhì)可通過(guò)生物富集和食物鏈的放大作用在生物體內(nèi)積累,形成區(qū)域性或全球性的威脅,對(duì)生態(tài)系統(tǒng)及人類(lèi)造成極大的危害,直接影響到生物體生命延續(xù).

    在過(guò)去十多年中,多個(gè)國(guó)家的研究小組用不同的方法監(jiān)測(cè)這類(lèi)物質(zhì)在污水處理廠的進(jìn)水和出水中以及在河流、湖泊中的存在狀況[4—7],以此評(píng)價(jià)污水處理效率和環(huán)境風(fēng)險(xiǎn).但是由于其在水中的濃度極低,通常為 ng·l-1甚至 pg·l-1級(jí),以及水體中復(fù)雜基質(zhì)的干擾,使得類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的監(jiān)測(cè)難度較大,目前就世界范圍來(lái)說(shuō)還處于起步階段,沒(méi)有現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)分析方法.在各種分析技術(shù)中,氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)以其很好的檢測(cè)靈敏度和相對(duì)較低的運(yùn)行成本一直受到環(huán)境中痕量有機(jī)污染物分析的青睞[8—11].但是由于類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物基本上都含有羥基官能團(tuán),極性較大,直接用 GC-MS分析,在氣相色譜柱內(nèi)容易產(chǎn)生吸附,從而使檢出值比實(shí)際值偏低,靈敏度下降,不適合痕量分析,需通過(guò)衍生化轉(zhuǎn)化成極性較低、更易揮發(fā)且熱穩(wěn)定性好的衍生物,從而提高檢測(cè)靈敏度和改善色譜峰形[7,12,13].因此類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物羥基衍生化技術(shù)的發(fā)展,成為 GC-MS應(yīng)用于分析檢測(cè)此類(lèi)物質(zhì)的核心技術(shù).雖然目前國(guó)內(nèi)外對(duì)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的羥基衍生化進(jìn)行了一些探討[6,7,14—17],但是缺少系統(tǒng)的研究.

    本研究采用 GC-MS技術(shù),以N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺 (MSTFA)為衍生化試劑研究了具有代表性的 4種類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物雌酮 (Estrone,E1)、17β-雌二醇 (17β-Estradiol,E2)、17α-乙炔基雌二醇 (17α-ethynylestradoil,EE2)和雌三醇 (Estriol,E3)的羥基衍生化,主要考察了MSTFA用量、衍生化溫度、衍生化時(shí)間對(duì)衍生化效果的影響以及衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性、標(biāo)準(zhǔn)曲線、儀器檢出限等.

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)準(zhǔn)品與試劑

    類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的標(biāo)準(zhǔn)品 (E1,E2,EE2,E3)和雄烷 (內(nèi)標(biāo)),純度為 97%—99%,Sigma-Aldrich公司;衍生化試劑MSTFA(衍生化級(jí))和吡啶 (色譜純),Fluka公司;溶劑甲醇、二氯甲烷、正己烷為色譜純,Fisher公司.

    標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱(chēng)取 E1,E2,E3,EE2,內(nèi)標(biāo)各 40mg,分別溶于 40ml甲醇中,配成 1.0μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,放入冰箱冷凍待用(-20℃).實(shí)驗(yàn)中根據(jù)不同需要稀釋成所需濃度.

    標(biāo)準(zhǔn)混合溶液:分別從濃度為 1.0μg·μl-1的 E1,E2,EE2,E3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中移取 100μl,加入9.6ml甲醇,混合后配成 0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,放入冰箱冷凍待用 (-20℃).實(shí)驗(yàn)中根據(jù)不同需要稀釋成所需濃度.

    1.2 GC-MS實(shí)驗(yàn)條件

    使用 Ther mo Trace DSQ(美國(guó)熱電公司)GC-MS儀器.GC參數(shù):色譜柱為 DB-5MS毛細(xì)管柱(30m ×0.25mm ×0.25μm,美國(guó) J&W Scientific);以氦氣為載氣,流速為 1ml·min-1;不分流方式進(jìn)樣,進(jìn)樣口溫度為 280℃,進(jìn)樣體積 1μl;升溫程序?yàn)?初始溫度 50℃,保持 2min,以 12℃·min-1的速率上升到 260℃,保持 8min,然后再以 3℃·min-1的速率上升到 280℃,保持 5min.MS參數(shù):接口溫度為 280℃,傳輸線溫度為 300℃,離子源溫度為 250℃,電離方式為 EI,電子轟擊能量為 70 eV,溶劑延遲時(shí)間為 12min,以全掃描模式定性,掃描范圍 m/z 50—600,以選擇離子掃描模式(S IM)定量.

    1.3 衍生化實(shí)驗(yàn)

    取 100μl一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于 1.5ml色譜進(jìn)樣瓶中,放入氮吹儀中通入高純氮?dú)?99.999%)緩慢吹干,然后加入 20μlMSTFA和 50μl吡啶,混合后在一定溫度下反應(yīng)一定的時(shí)間,吹干,加入 90μl進(jìn)樣溶劑 (二氯甲烷 /正己烷:1/4,V/V)和 10μl濃度為 0.01μg·μl-1的內(nèi)標(biāo),取1μl注入 GC-MS分析.

    由于在衍生化過(guò)程中,衍生化試劑用量、衍生化時(shí)間、衍生化溫度等均對(duì)衍生化產(chǎn)物有一定的影響,因此對(duì)于含有多個(gè)羥基的化合物,衍生化可能會(huì)不完全,僅對(duì)其中的一個(gè)或兩個(gè)羥基有效.E1,E2,EE2,E3及其在衍生化過(guò)程中所有可能產(chǎn)生的衍生化產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)圖1,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要控制衍生化條件,盡量使待測(cè)物中的羥基全部衍生化.

    圖1 E1,E2,EE2,E3及其衍生化產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)圖Fig.1 Chemical structures of E1,E2,EE2,E3 and their derivatives

    2 結(jié)果與討論

    2.1 衍生化產(chǎn)物色譜圖

    取 100μl濃度為 0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于 1.5ml色譜進(jìn)樣瓶中,放入氮吹儀中通入高純氮?dú)饩徛蹈?然后加入 20μlMSTFA和 50μl吡啶,混合后在 70℃下反應(yīng) 30min,吹干,加入 90μl進(jìn)樣溶劑和 10μl濃度為 0.01μg·μl-1的內(nèi)標(biāo),取 1μl注入 GC-MS分析.分析結(jié)果如圖2B所示.

    圖2 類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物標(biāo)準(zhǔn)品 (A)和衍生化產(chǎn)物 (B)的總離子色譜圖 (全掃描)Fig.2 Total ion chromatogram of steroid endocrine disrupting chemicals(A)and their derivatives(B)(Scan)

    E1,E2,EE2,E3與MSTFA反應(yīng)后,羥基全部衍生化,相應(yīng)生成 T MS-E1,di-T MS-E2,di-T MSEE2,tri-T MS-E3,與未衍生化時(shí)相比 (圖2A),E3經(jīng)衍生化后峰形明顯提高,相對(duì)豐度由未衍生化時(shí)的不足 5%提高到 58%,峰面積提高了 159倍,E1和 E2的保留時(shí)間差也從 0.31min提高到0.68min,分離效果提高顯著,E1,E2和 EE2峰面積分別提高了 3.09,3.96和 4.02倍.T MS-E1,di-T MS-E2,di-T MS-EE2,tri-T MS-E3在 S IM模式下檢測(cè)的特征離子分別為 m/z 342,327,285,m/z 416,401,285,m/z 440,425,285,m/z 504,489,285.

    2.2 MSTFA用量的確定

    對(duì)于 100μl濃度為 0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,70℃下與 MSTFA反應(yīng) 30min,衍生化產(chǎn)物的RRF(相對(duì)響應(yīng)因子,即待測(cè)物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值)隨MSTFA用量的變化曲線如圖3所示.當(dāng)MSTFA用量為 5μl時(shí),E1僅有部分被衍生化成 T MS-E1,且能檢測(cè)到 E1的存在,E2雖衍生化生成 di-T MS-E2,但峰很低,相對(duì)豐度只有 20%,尚有很大部分未被衍生化,EE2也只被部分衍生化成mono-T MS-EE2,E3則完全未被衍生化.E1,E2,EE2衍生化的那部分羥基主要是在 C3位上,可見(jiàn),對(duì)于以MSTFA為衍生化試劑的衍生化反應(yīng),芳香烴上羥基的衍生化也優(yōu)先于脂肪烴上的羥基.隨著MSTFA用量的增加,有更多的羥基被衍生化,E1,mono-T MS-EE2,E3逐漸向 T MS-E1,di-T MS-EE2和 tri-T MS-E3轉(zhuǎn)化,di-T MS-E2的相對(duì)豐度也逐漸增加.當(dāng)MSTFA用量增大到 15μl時(shí),各物質(zhì)上的羥基都已基本上被衍生化,峰面積也都顯著增大,再增加MSTFA用量,峰形變化不大,基本趨于穩(wěn)定.當(dāng)用量達(dá)到 20μl時(shí),各衍生化產(chǎn)物的 RRF達(dá)到最大.因此,對(duì)于 100μl濃度為 0.01μg·μl-1標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,MSTFA的最佳用量為 20μl.

    2.3 衍生化溫度的優(yōu)化

    取 100μl濃度為 0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,吹干后加入 20μlMSTFA和 50μl吡啶,不同溫度下反應(yīng) 30min,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示.在不加熱的條件下 (常溫反應(yīng)),E1,E2,E3的羥基全被衍生化,相應(yīng)地生成 T MS-E1,di-T MS-E2和 tri-T MS-E3,EE2除被衍生化成 di-T MS-EE2,還有部分未被完全衍生化,生成了 mono-T MS-EE2,當(dāng)在 60℃加熱 30min后,mono-T MS-EE2消失,EE2已被完全衍生化成 di-T MS-EE2,各衍生化產(chǎn)物的 RRF在 70℃達(dá)到最大,隨著溫度的進(jìn)一步升高,各衍生化產(chǎn)物的 RRF都在降低,到 90℃時(shí),檢測(cè)不到 EE2的衍生化產(chǎn)物,可能是溫度過(guò)高使得 di-T MS-EE2分解,因此,70℃為最佳衍生化溫度.

    圖3 衍生化產(chǎn)物的 RRF隨MSTFA用量的變化曲線圖Fig.3 Comparison of the RRF values for steroid derivatives at different amount ofMSTFA

    圖4 衍生化產(chǎn)物的 RRF隨衍生化溫度的變化曲線圖Fig.4 Comparison of the RRF values for steroid derivatives at different reaction temperature

    2.4 衍生化時(shí)間的優(yōu)化

    取 100μl濃度為 0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,吹干后加入 20μlMSTFA和 50μl吡啶,70℃下反應(yīng)不同的時(shí)間,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示.E1,E2,E3的羥基在衍生化時(shí)間為 0min時(shí) (與MSTFA和吡啶混合后立即吹干加進(jìn)樣溶劑和內(nèi)標(biāo)直接進(jìn)樣)就已全被衍生化成 T MS-E1,di-T MS-E2和 tri-T MS-E3,EE2衍生化不完全,有部分被衍生化成 mono-T MS-EE2,當(dāng)在 70℃加熱下 10min后,mono-T MS-EE2全部轉(zhuǎn)化成 di-T MS-EE2,di-T MS-EE2的 RRF在 30min后達(dá)到最大并基本趨于穩(wěn)定,其余各衍生化產(chǎn)物的 RRF在整個(gè)衍生化時(shí)間范圍內(nèi)變化不大,因此,30min為最佳加熱時(shí)間.

    2.5 衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性

    取 100μl濃度為 0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,吹干后加入 20μlMSTFA和 50μl吡啶,混合后吹干,加入 90μl進(jìn)樣溶劑和 10μl內(nèi)標(biāo) (0.01μg·μl-1),然后將其置于 -20℃冰箱中,分別于 0h,3h,6h,12h,24h,36h和 48h取出進(jìn)樣檢測(cè),所得結(jié)果如圖6所示.從圖6中可以看出,E1,E2,EE2,E3經(jīng)過(guò)衍生化后,衍生物穩(wěn)定性較好,在放置 48h后 RRF仍沒(méi)有明顯降低.

    圖5 衍生化產(chǎn)物的 RRF隨衍生化時(shí)間的變化曲線圖Fig.5 Comparison of the RRF values for steroid derivatives at different reaction time

    圖6 衍生化產(chǎn)物的 RRF隨放置時(shí)間的變化曲線圖Fig.6 Comparison of the RRF values for steroid derivatives after different storage t ime

    2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線及儀器檢出限

    以 GC-MS在 S IM模式所測(cè)得各個(gè)濃度下衍生化產(chǎn)物的 RRF對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣濃度 (pg·μl-1)作線形回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及儀器檢出限見(jiàn)表1.結(jié)果表明,GC-MS檢測(cè)各化合物的線性相關(guān)性良好,E1和 E2的儀器檢出限為 0.1pg·μl-1,EE2和 E3的儀器檢出限為1.0pg·μl-1.

    表1 回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及儀器檢出限Table 1 Equation of linear regression,correlation coefficients,linear range, IQL

    3 結(jié)論

    MSTFA可以作為類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物 E1,E2,EE2和 E3的羥基衍生化試劑,在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,衍生化產(chǎn)物分別為 T MS-E1,di-T MS-E2,di-T MS-EE2和 tri-T MS-E3;對(duì)于 100μl濃度為0.01μg·μl-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,MSTFA的最佳用量為 20μl;最佳衍生化條件為 70℃下反應(yīng) 30min;在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性較好,各待測(cè)物具有良好的線性相關(guān)性,E1和 E2的儀器檢出限為 0.1pg·μl-1,EE2和 E3的儀器檢出限為 1.0pg·μl-1.

    [1] Ying G G,Kookana R S,Ru Y J,Occurrence and Fate of Hor mone Steroids in the Environment[J].Environment International,2002,28∶545—551

    [2] Manzoori J L,Nezhad G K,Selective Cloud Point Extraction and Preconcentration of Trace Amounts of Silver as a Dithizone Complex Prior to Flame Atomic Absorption Spectrometric Determination[J].Analytica Chim ica Acta,2003,484∶155—161

    [3] Liu R,Zhou J L,W ildingA,SimultaneousDetermination of Endocrine Disrupting Phenolic Compounds and Steroids inWater by Solid-Phase Extraction-Gas Chromatography-Mass Spectrometry[J].Journal of Chromatography A,2004,1022∶179—189

    [4] Fine D D,Breidenbach G P,Price TL et al.,Quantitation of Estrogens in GroundWater and Swine Lagoon SamplesUsing Solid-Phase Extraction,Pentafluorobenzyl/Trimethylsilyl Derivatizations and Gas Chromatography-Negative Ion Chemical I onization Tandem Mass Spectrometry[J].Journal of Chromatography A,2003,1017∶167—185

    [5] Sun Q F,Deng SB,HuangJ et al.,Contributors to EstrogenicActivity inWastewater from aLargeWastewater Treatment Plant inBeijing[J].Environmental Toxicology and Phar macology,2008,25∶20—26

    [6] KellyC,Analysisof Steroids in EnvironmentalWater SamplesUsing Solid-Phase Extraction and I on-Trap GasChromatography-Mass Spectrometry and Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry[J].Journal of Chromatography A,2000,872∶309—314

    [7] Quintana J B,Carpinteiro J,RodríGuez Iet al.,Determination ofNatural and Synthetic Estrogens inWater by Gas Chromatographywith Mass Spectrometric Detection[J].Journal of Chromatography A,2004,1024∶177—185

    [8] PetrovicM,Eljarrat E,LóPez de AldaM J et al.,RecentAdvances in theMass Spectrometric Analysis Related to Endocrine Disrupting Compounds in Aquatic Environmental Samples[J].Journal of Chromatography A,2002,974∶23—51

    [9] van Leeuwen S P J,de BoerJ,Advances in the Gas Chromatographic Deter mination of PersistentOrganic Pollutants in the Aquatic Environment[J].Journal of Chromatography A,2008,1186∶161—182

    [10] Díaz-CruzM S,López de Alda M J,López R et al.,Determination of Estrogens and Progestogens byMass Spectrometric Techniques(GC/MS,LC/MS and LC/MS/MS)[J].Journal of M ass Spectrometry,2003,38∶917—923

    [11] Shimada K,Mitamura K,Higashi T,Gas Chromatography and High-Perfor mance Liquid Chromatography ofNatural Steroids[J].Journal of Chromatography A,2001,935∶141—172

    [12] ShareefA,AngoveM J,WellsJ D,Optimization of SilylationUsingN-methyl-N-(trimethylsilyl)-trifluoroacetamide,N,O-bis-(trimethylsilyl)-trifluoroacetamide and N-(tert-butyldimethylsilyl)-N-methyltrifluoro Acetamide for the Deter mination of the Estrogens Estrone and 17α-ethinylestradiol by Gas Chromatography-Mass Spectrometry[J].Journal of Chromatography A,2006,1108∶121—128

    [13] Zhang K,Zuo Y G,Pitfalls and Solution for SimultaneousDetermination of Estrone and 17α-ethinylestradiol by GasChromatography-Mass Spectrometry afterDerivatization with N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide[J].Analytica Chim ica Acta,2005,554∶190—196

    [14] Ternes TA,StumpfM,Mueller J et al.,Behavior and Occurrence of Estrogens inMunicipal Sewage Treatment Plants—I.Investigations in Ger many,Canada and Brazil[J].The Science of the Total Environment,1999,225∶81—90

    [15] Carpinteiro J,Quintana J B,Rodríguez I et al.,Applicability of Solid-PhaseMicroextraction Followed byOn-Fiber Silylation for the Determination of Estrogens in Water Samples by Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry[J].Journal of Chromatography A,2004,1056∶179—185

    [16] ServosaM R,BennieD T,BurnisonB K et al.,Distribution of Estrogens,17β-estradiol and Estrone,in CanadianMunicipalWastewater Treatment Plants[J].Science of the Total Environment,2005,336∶155—170

    [17] Peng X Z,Yu Y Y,Tang C et al.,Occurrence of Steroid Estrogens,Endocrine-Disrupting Phenols,and Acid Pharmaceutical Residues in Urban RiverineWater of the Pearl RiverDelta,South China[J].Science of the Total Environment,2008∶1—9

    OPT IM ISATI ON OF DERIVATISATI ON COND ITI ONS FOR STERO I D ENDOCRINE D ISRUPTING CHEM ICALS

    HUANG B in PAN Xue-jun L IU Jing-liang FANG Kai WANG Yu GAO Jian-pei
    (Faculty of Environmental Science and Engineering,KunmingUniversity of Science and Technology,Kunming,650093,China)

    The derivatization of the hydroxyl groups in steroid endocrine disrupting chemicals,such as estrone(E1),17β-estradiol(E2),estriol(E3)and 17α-ethynylestradoil(EE2),with N-methyl-N-(trimethylsilyl)trifluoroacetamide(MSTFA)as derivatization reagent followed by gas chromatography-mass spectrometry(GCMS)was studied.The effects of the amount ofMSTFA,derivatization temperature and time on the derivatization of target compounds,as well as the stability of steroid derivatives,calibration curves and instrumental quantification l imits were systematically investigated.The results show that best derivatization results were obtained when the amount ofMSTFA was 20μl for 100μl steroids standard mix solution at 0.01μg·μl-1;the optimal derivatization condition was reaction at 70℃for 30min;The derivatives of target compounds were stable because their RRFs showed no observable change when kept at-20℃for 48h.Under the optimal condition,good linear correlation was obtained and the instrumental quantification limit was 0.1pg·μl-1for E1 and E2,while itwas 1pg·μl-1for EE2 and E3.

    steroid,endocrine disrupting chemicals,hydroxyl groups,derivatization,MSTFA.

    2009年5月9日收稿.

    *國(guó)家環(huán)保公益性行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)基金(200809136);國(guó)家自然科學(xué)基金(20767002);教育部留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金(教外司留[2008]890號(hào));云南省自然科學(xué)基金(2007B035M);云南省教育廳重點(diǎn)基金(07Z11057)資助.

    **通訊聯(lián)系人,Tel:0871-5189022;E-mail:xjpan@kmust.edu.cn

    猜你喜歡
    類(lèi)固醇檢出限內(nèi)分泌
    環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果低于最低檢出限數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理方法
    定量NMR中多種檢出限評(píng)估方法的比較
    前列腺癌的內(nèi)分泌治療
    超聲引導(dǎo)腕管注射類(lèi)固醇治療腕管綜合征及其對(duì)神經(jīng)電生理的影響
    什么是乳腺癌的內(nèi)分泌治療?
    人11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶基因克隆與表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究
    首都醫(yī)科大學(xué)內(nèi)分泌與代謝病學(xué)系
    穩(wěn)住內(nèi)分泌
    超聲引導(dǎo)下局部注射皮質(zhì)類(lèi)固醇混合制劑治療老年性膝骨關(guān)節(jié)炎的止痛療效
    基于EP-17A2的膠體金法檢測(cè)糞便隱血的空白限、檢出限及定量限的建立及評(píng)價(jià)
    美女国产高潮福利片在线看| 亚洲成人国产一区在线观看| 99国产精品一区二区三区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 成人18禁在线播放| 伦理电影免费视频| 亚洲人成网站高清观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 1024手机看黄色片| 亚洲欧美激情综合另类| 热99re8久久精品国产| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品久久视频播放| videosex国产| 久久99热这里只有精品18| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 成人欧美大片| 中出人妻视频一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 三级毛片av免费| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 国产精品 国内视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日本a在线网址| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 波多野结衣高清无吗| 波多野结衣高清无吗| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 在线观看免费视频日本深夜| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 激情在线观看视频在线高清| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 中文资源天堂在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日韩有码中文字幕| 美女 人体艺术 gogo| 精品久久久久久久末码| 哪里可以看免费的av片| 男女床上黄色一级片免费看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 两个人免费观看高清视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 无限看片的www在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 一级毛片高清免费大全| 黄色a级毛片大全视频| а√天堂www在线а√下载| 露出奶头的视频| 黄色视频,在线免费观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲自拍偷在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲国产精品999在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久精品国产清高在天天线| 日本 av在线| 岛国视频午夜一区免费看| 日韩视频一区二区在线观看| 天堂√8在线中文| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产伦人伦偷精品视频| 91国产中文字幕| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲成人久久爱视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 女人被狂操c到高潮| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美色欧美亚洲另类二区| 18禁美女被吸乳视频| 一二三四社区在线视频社区8| 国产91精品成人一区二区三区| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久久久精品国产欧美久久久| 三级毛片av免费| 国产人伦9x9x在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| xxx96com| 热re99久久国产66热| 欧美乱码精品一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 色综合婷婷激情| 色综合婷婷激情| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 精品国产乱子伦一区二区三区| 三级毛片av免费| 丝袜人妻中文字幕| 免费搜索国产男女视频| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲欧美激情综合另类| 国产成人影院久久av| 真人一进一出gif抽搐免费| 在线观看免费日韩欧美大片| 91av网站免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 99国产综合亚洲精品| 一级片免费观看大全| a在线观看视频网站| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 99久久国产精品久久久| 在线av久久热| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 伦理电影免费视频| 一级毛片女人18水好多| 国产亚洲精品一区二区www| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产成人精品久久二区二区免费| 午夜久久久在线观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 香蕉av资源在线| 亚洲av熟女| 精品无人区乱码1区二区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美久久黑人一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 午夜日韩欧美国产| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 搡老岳熟女国产| 91麻豆精品激情在线观看国产| 90打野战视频偷拍视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产av又大| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产成人欧美在线观看| 人人澡人人妻人| 国产伦在线观看视频一区| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲国产精品sss在线观看| 长腿黑丝高跟| a级毛片在线看网站| 成人手机av| 欧美一级毛片孕妇| 黄片播放在线免费| 色老头精品视频在线观看| 午夜免费成人在线视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久久久国内视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 色在线成人网| 欧美zozozo另类| 国产日本99.免费观看| 国产精品野战在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| e午夜精品久久久久久久| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲国产看品久久| 1024视频免费在线观看| 日本一本二区三区精品| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲成人精品中文字幕电影| 视频区欧美日本亚洲| 欧美日韩一级在线毛片| 9191精品国产免费久久| 成人三级黄色视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产高清videossex| 国产午夜福利久久久久久| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲人成电影免费在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲中文字幕日韩| av在线播放免费不卡| 十八禁人妻一区二区| 日日爽夜夜爽网站| www.自偷自拍.com| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品 国内视频| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| av在线播放免费不卡| 91国产中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 午夜影院日韩av| 色播亚洲综合网| 国产成人av激情在线播放| 久久久久久人人人人人| 俄罗斯特黄特色一大片| 在线看三级毛片| 色综合婷婷激情| 国产精品久久久av美女十八| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲在线自拍视频| 国产男靠女视频免费网站| 国产成人精品久久二区二区91| 国产片内射在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99热只有精品国产| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲第一电影网av| 婷婷精品国产亚洲av在线| 中国美女看黄片| 亚洲午夜理论影院| 哪里可以看免费的av片| 欧美中文综合在线视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久久国产成人免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 校园春色视频在线观看| 亚洲美女黄片视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 超碰成人久久| 久久久久久大精品| 午夜久久久久精精品| 精品电影一区二区在线| 日韩高清综合在线| 国产精品乱码一区二三区的特点| 欧美黑人欧美精品刺激| 成人三级做爰电影| 国产亚洲精品第一综合不卡| 18美女黄网站色大片免费观看| 人人妻人人看人人澡| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 91麻豆av在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久九九热精品免费| 91九色精品人成在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 免费在线观看影片大全网站| 麻豆av在线久日| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品免费一区二区三区在线| 色av中文字幕| 韩国精品一区二区三区| 久久香蕉激情| 午夜两性在线视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲中文日韩欧美视频| 天堂动漫精品| 亚洲男人的天堂狠狠| 日韩欧美 国产精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 香蕉久久夜色| 黄色视频不卡| 一本精品99久久精品77| 在线观看一区二区三区| 中出人妻视频一区二区| 亚洲全国av大片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 欧美黑人欧美精品刺激| 一本精品99久久精品77| 精华霜和精华液先用哪个| 国产国语露脸激情在线看| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 黄色丝袜av网址大全| 久久香蕉精品热| 精品免费久久久久久久清纯| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久久久九九精品影院| 亚洲五月色婷婷综合| 日本免费a在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 午夜日韩欧美国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 日本 av在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 97碰自拍视频| bbb黄色大片| 中文亚洲av片在线观看爽| 99国产精品一区二区蜜桃av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 精品高清国产在线一区| 长腿黑丝高跟| 中文字幕久久专区| 一二三四社区在线视频社区8| 高清在线国产一区| 国产av一区二区精品久久| 欧美中文日本在线观看视频| www.自偷自拍.com| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美成人午夜精品| 人成视频在线观看免费观看| 丁香六月欧美| 亚洲久久久国产精品| 国产久久久一区二区三区| 91成人精品电影| 可以在线观看的亚洲视频| 熟女电影av网| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲av熟女| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 色播在线永久视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| www.999成人在线观看| 在线播放国产精品三级| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日本三级黄在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久国产成人精品二区| 嫩草影视91久久| 两性夫妻黄色片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 成人午夜高清在线视频 | 母亲3免费完整高清在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 9191精品国产免费久久| 久久中文字幕人妻熟女| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 免费观看人在逋| 久久久久久久久中文| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日日夜夜操网爽| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产不卡一卡二| 91麻豆av在线| avwww免费| 久久草成人影院| 无遮挡黄片免费观看| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲全国av大片| 久久香蕉激情| ponron亚洲| 制服诱惑二区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 禁无遮挡网站| 悠悠久久av| 成年人黄色毛片网站| 国产精品国产高清国产av| 日本免费a在线| 国产伦在线观看视频一区| 黑丝袜美女国产一区| 男男h啪啪无遮挡| 国产三级黄色录像| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 精品无人区乱码1区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 午夜精品久久久久久毛片777| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美色视频一区免费| 亚洲电影在线观看av| 日韩高清综合在线| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 美女大奶头视频| 最新在线观看一区二区三区| 精品久久久久久,| av片东京热男人的天堂| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲人成伊人成综合网2020| 色在线成人网| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产激情久久老熟女| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 人妻久久中文字幕网| www日本黄色视频网| 女人被狂操c到高潮| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美av亚洲av综合av国产av| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 色尼玛亚洲综合影院| 他把我摸到了高潮在线观看| 级片在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 两个人看的免费小视频| 久久精品影院6| 日日爽夜夜爽网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品国产国语对白av| 久久中文字幕一级| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲精华国产精华精| 女同久久另类99精品国产91| 国产亚洲av嫩草精品影院| 色哟哟哟哟哟哟| 麻豆国产av国片精品| 欧美一区二区精品小视频在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 18禁观看日本| 性欧美人与动物交配| 在线视频色国产色| 午夜久久久在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 国内精品久久久久精免费| 亚洲av成人av| 看黄色毛片网站| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲av五月六月丁香网| 久久久久九九精品影院| 久久久久久九九精品二区国产 | 精品高清国产在线一区| 黄频高清免费视频| 国产乱人伦免费视频| 十八禁人妻一区二区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 男人舔女人的私密视频| 亚洲免费av在线视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产精品二区激情视频| 麻豆一二三区av精品| 叶爱在线成人免费视频播放| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 一进一出抽搐gif免费好疼| 午夜老司机福利片| 亚洲国产精品999在线| 美女扒开内裤让男人捅视频| 岛国视频午夜一区免费看| 日日爽夜夜爽网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产一区二区三区视频了| 国产极品粉嫩免费观看在线| 91成人精品电影| 午夜福利成人在线免费观看| 精品乱码久久久久久99久播| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩欧美免费精品| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久久国内视频| 亚洲专区中文字幕在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 99在线人妻在线中文字幕| 精品午夜福利视频在线观看一区| av在线播放免费不卡| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久香蕉国产精品| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 99国产极品粉嫩在线观看| 中出人妻视频一区二区| 国产精品久久久久久精品电影 | 黄频高清免费视频| 欧美成人午夜精品| 国产成人av教育| 无遮挡黄片免费观看| 日本在线视频免费播放| 在线天堂中文资源库| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 免费搜索国产男女视频| 丝袜在线中文字幕| 桃色一区二区三区在线观看| 两个人免费观看高清视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 中文字幕精品免费在线观看视频| www.www免费av| 日韩免费av在线播放| 国产成人欧美在线观看| 国产精品,欧美在线| 国产精品电影一区二区三区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国语自产精品视频在线第100页| 国产成人影院久久av| 日韩免费av在线播放| 中出人妻视频一区二区| 亚洲av美国av| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 无限看片的www在线观看| 精品久久久久久久末码| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产亚洲欧美精品永久| www.999成人在线观看| 91九色精品人成在线观看| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久草成人影院| 久久中文看片网| 国产成人精品久久二区二区免费| 啪啪无遮挡十八禁网站| 999精品在线视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产欧美日韩一区二区三| 麻豆一二三区av精品| 国产成人精品久久二区二区91| 动漫黄色视频在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 18禁国产床啪视频网站| 看黄色毛片网站| 日韩av在线大香蕉| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 午夜激情福利司机影院| 亚洲片人在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 性色av乱码一区二区三区2| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产麻豆成人av免费视频| 啦啦啦免费观看视频1| 国产成人av激情在线播放| 日韩欧美免费精品| 精品国产亚洲在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 在线永久观看黄色视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 老司机午夜十八禁免费视频| 国产免费av片在线观看野外av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美日韩乱码在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久国产成人精品二区| 99热只有精品国产| 一本综合久久免费| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲精品在线观看二区| 午夜久久久久精精品| 午夜福利免费观看在线| 亚洲五月色婷婷综合| 一本一本综合久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品久久久久久久久久久久久 | 国产又黄又爽又无遮挡在线| 黄色视频,在线免费观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| xxxwww97欧美| 亚洲av美国av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| tocl精华| 国产不卡一卡二| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 正在播放国产对白刺激| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产视频一区二区在线看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲激情在线av| 美国免费a级毛片| 青草久久国产| 国产在线观看jvid| 窝窝影院91人妻| 男女视频在线观看网站免费 | 听说在线观看完整版免费高清| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| e午夜精品久久久久久久| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美性长视频在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 一边摸一边抽搐一进一小说| 91成人精品电影| 欧美一级a爱片免费观看看 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产一区二区激情短视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产97色在线日韩免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲av五月六月丁香网| x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品色激情综合| 日韩精品中文字幕看吧| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 色av中文字幕| 久久久久久大精品| 一区二区三区激情视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久久久久久午夜电影| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久国产成人精品二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久这里只有精品19| 亚洲av美国av| 亚洲一区中文字幕在线| 精品无人区乱码1区二区| 久久久久久久久久黄片| 亚洲一区中文字幕在线| 免费在线观看成人毛片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲成人久久爱视频| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产色视频综合| 在线观看一区二区三区| 久久精品国产综合久久久| 久久性视频一级片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一区二区三区国产精品乱码| www.www免费av| 美女午夜性视频免费| 色综合婷婷激情| 久久午夜亚洲精品久久| 一a级毛片在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 身体一侧抽搐| 午夜福利成人在线免费观看| 黑丝袜美女国产一区|