復(fù)方三拗止咳顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

孫 蕾，楊 競，林 昌

（1.江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京 210029； 2.江蘇省南京市腦科醫(yī)院，江蘇 南京 210029；3.南京醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院，江蘇 儀征 210029)

復(fù)方三拗止咳顆粒系三拗湯加減而成，由炙麻黃、前胡、黃芩、陳皮等組成的復(fù)方制劑，具有清熱化痰、降氣平喘、消炎止咳的功效，用于急性支氣管炎或慢性支氣管炎急性發(fā)作的咳嗽。筆者對該制劑進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[1]，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

CS-930型薄層掃描儀（日本島津）；Millipore純水機(jī)；BP211 D型十萬分之一電子分析天平，BP 121 S型萬分之一電子分析天平；UV-2500型分光光度計(jì)；硅膠G（青島海洋化工廠）。各對照藥材與對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供；復(fù)方三拗止咳顆粒由南京元泰醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司提供。甲醇為色譜醇；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

陳皮：取本品3 g，研細(xì)，加水 30 mL，超聲提取20 min，離心，上清液加乙醚提取2次，每次20 mL，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。取除陳皮的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一含1%氫氧化鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品溶液無干擾（圖1 A）。

前胡：取本品5 g，研細(xì)，加氯仿30 mL，回流提取20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)勇确? mL使溶解，作為供試品溶液。另取前胡對照藥材0.5 g，加氯仿10 mL，回流提取20 min，濾過，作為對照藥材溶液。取除前胡的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯(20∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照品溶液無干擾（圖1 B）。

黃芩[2]：取本品5 g，研細(xì)，加甲醇回流提取30 min，濾過，濾液蒸干，加水20 mL，微熱使溶解，加入鹽酸3滴，攪勻，加乙酸乙酯提取2次，每次30 mL，合并乙酸乙酯，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取除黃芩的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅦB]試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮 -乙酸 -水（10∶6∶4∶3）上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以4%三氯化鐵乙醇溶液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品溶液無干擾（圖1 C）。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 溶液制備

精密稱取鹽酸麻黃堿對照品5 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取本品5 g，研細(xì)，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇25.0 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。按不含炙麻黃的處方比例和制備工藝，制成不含炙麻黃的空白樣品，然后按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.2.2 測定波長選擇

分別吸取對照品溶液和供試品溶液各5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(20∶5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明供試品溶液和對照品溶液在波長505 nm處有最大吸收峰。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：照薄層色譜法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅵ B]試驗(yàn)，精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液 1，2，3，4，5，6，7 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(20∶5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。照薄層掃描法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]進(jìn)行掃描，檢測波長 !S=505 nm，參比波長 !R=445 nm，測量對照品吸收度積分值，得回歸方程 Y=3 663.109+16 099.456X，r=0.999 9。結(jié)果表明鹽酸麻黃堿點(diǎn)樣量在0.5～3.5μg范圍內(nèi)與吸收度積分值呈良好的線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液，分別點(diǎn)樣5μL，展開，顯色，分別在0，0.5，1.5，2.0 h測定樣品中鹽酸麻黃堿斑點(diǎn)吸收峰峰面積積分值，結(jié)果的 RSD=2.58%，表明樣品顯色斑點(diǎn)在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

同板精密度試驗(yàn)：分別精密吸取對照品溶液5μL，在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)5個(gè)點(diǎn)，展開，取出，晾干，顯色，加熱至斑點(diǎn)清晰，掃描，測定吸收度積分值，結(jié)果的 RSD=1.45%(n=5)。

異板精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液5μL，分別在不同的硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開，取出，晾干，顯色，加熱至斑點(diǎn)清晰，掃描，測定吸收度積分值，結(jié)果的 RSD=2.69% 。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品，分別制備6份供試品溶液，精密吸取5μL，點(diǎn)樣，展開，取出，晾干，顯色，加熱至斑點(diǎn)清晰，掃描，測定吸收度積分值并計(jì)算含量，結(jié)果的 RSD=3.38%。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量(0.626 mg/g)的樣品，精密稱取0.25 g，加入一定量的鹽酸麻黃堿對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，按薄層色譜條件測定吸收度積分值，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 樣品含量測定

取3個(gè)批次的樣品細(xì)粉5 g，精密稱定，每個(gè)批次的樣品測2份，取其平均值，按供試品溶液制備方法制備，點(diǎn)樣，按上述條件測定斑點(diǎn)吸收度積分值，以外標(biāo)二點(diǎn)法計(jì)算含量，結(jié)果測得的鹽酸麻黃堿平均含量為6.25 mg/袋，據(jù)此按80%計(jì)算，暫訂本品每袋含炙麻黃以鹽酸麻黃堿（C10H15NO·HCl）計(jì)算應(yīng)不少于5 mg。

3 討論

在黃芩的薄層色譜鑒別中，曾采用正丁醇-冰醋酸-水（10∶1∶0.5）為展開劑，但分離效果不理想，采用乙酸乙酯-丁酮-乙酸-水（10∶6∶4∶3）上層液為展開劑，斑點(diǎn)分離清晰，操作簡便，重現(xiàn)性好。本研究表明，薄層掃描色譜法方法簡單，重現(xiàn)性好，快速、經(jīng)濟(jì)，可作為復(fù)方三拗止咳顆粒含量測定的方法。

[1]黃順旺，曹明成.參蘇感冒膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2008，14(3):13-14.

[2]謝衛(wèi)峰，高玉珍，陳莉琳.感冒滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥，2008，30(8):1 171-1 174.