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    榆黃蘑菇飲料抑制腫瘤和拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用的研究

    2010-11-02 07:37:48施溯筠李秀國(guó)
    食品工業(yè)科技 2010年8期
    關(guān)鍵詞:荷瘤毒副作用環(huán)磷酰胺

    施溯筠,李秀國(guó)

    (1.延邊大學(xué)長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,吉林延吉133000; 2.延邊大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,吉林延吉133000)

    榆黃蘑菇飲料抑制腫瘤和拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用的研究

    施溯筠1,李秀國(guó)2,*

    (1.延邊大學(xué)長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,吉林延吉133000; 2.延邊大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,吉林延吉133000)

    目的:探討榆黃蘑飲料抑制腫瘤和拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用的影響。方法:在抑制腫瘤實(shí)驗(yàn)中,50只小鼠分成空白組、環(huán)磷酰胺組(85mg/kg)和3個(gè)榆黃蘑飲料組,分別灌胃蒸餾水或3個(gè)不同濃度(165、330和660g·L-1,0.1mL·10g-1體重)的榆黃蘑飲料,30d后,環(huán)磷酰胺組和榆黃蘑飲料組接種S180荷瘤。在接種腫瘤細(xì)胞的第1d和第5d,環(huán)磷酰胺組腹腔注射環(huán)磷酰胺85mg/kg。8d后,處死小鼠,檢測(cè)胸腺指數(shù)和腫瘤塊重。在拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用實(shí)驗(yàn)中,分組同上,第22d及第27d環(huán)磷酰胺組和飲料組小鼠均灌胃85mg/kg的環(huán)磷酰胺,第30d小鼠眼眶取血,檢測(cè)血清中NO和MDA的含量及SOD、ALT和AST的活性。結(jié)果:在抑制腫瘤實(shí)驗(yàn)中,榆黃蘑飲料對(duì)S180荷瘤的抑瘤率比空白組顯著增高(P<0.05或0.01),胸腺指數(shù)比環(huán)磷酰胺組也顯著增高(P<0.01)。在拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用實(shí)驗(yàn)中,與環(huán)磷酰胺組相比,榆黃蘑中、高劑量飲料組的SOD活性明顯上升(P<0.01),榆黃蘑飲料組的MDA含量明顯下降(P<0.05),ALT和AST活性明顯下降(P<0.05或0.01)。結(jié)論:榆黃蘑飲料能夠抑制小鼠S180腫瘤和拮抗環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠的毒副作用。

    抗腫瘤,拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用,榆黃蘑,小鼠

    《神農(nóng)本草經(jīng)》中稱:“蘑菇久服輕身不老”,蘑菇因具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂、抗炎和保肝等藥理活性作用而受到重視[1],日本目前已開發(fā)出抗腫瘤的飲料,而我國(guó)尚未有相關(guān)報(bào)道。榆黃蘑(Pleurotus citrinopileatus Sing.)是擔(dān)子菌亞門,層菌綱,傘菌目,側(cè)耳科,側(cè)耳屬,具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯和止痢作用[2]。其干燥子實(shí)體含豐富的粗蛋白和人體必需氨基酸,有較多粗纖維和較低的粗脂肪,富含鈣、鎂、鉀、鈉等常量元素及鋅、鐵、銅等人體必需微量元素,有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[3]。新鮮的榆黃蘑子實(shí)體由于具有味道鮮美、無(wú)毒而被普遍食用。本文用榆黃蘑的新鮮子實(shí)體制成不同濃度榆黃蘑飲料給小鼠灌胃30d后,探討榆黃蘑飲料抑制腫瘤和拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    昆明種小鼠 質(zhì)量18~22g,延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(吉)2007-0003。

    HH-501超級(jí)恒溫水浴 江蘇金壇市恒豐儀器廠;SARTOTIUS萬(wàn)分之一電子天平 北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;VIS-723型分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司;KA-1000低速臺(tái)式離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠;打漿機(jī) 順德市容桂區(qū)甜康電器廠;門冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒 北京北化康泰臨床試劑有限公司,批號(hào):20081009和20081113;榆黃蘑 市售,由延邊大學(xué)藥學(xué)院呂惠子副教授鑒定為真品。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 榆黃蘑飲料制備 榆黃蘑新鮮子實(shí)體在50℃浸提30min后,過(guò)濾,加調(diào)味劑和穩(wěn)定劑(pH3.6~3.8),均質(zhì),采用巴氏分段滅菌后制得660g·L-1榆黃蘑飲料,使用時(shí)用蒸餾水稀釋成330、165g·L-1。

    1.2.2 荷瘤小鼠模型制備 取腹腔內(nèi)傳代7d的S180荷瘤小鼠,在無(wú)菌條件下抽取腹腔內(nèi)瘤細(xì)胞,并以生理鹽水洗滌3次,2500r/min離心3min,棄上清液,用無(wú)菌生理鹽水調(diào)整瘤細(xì)胞濃度為 4×107個(gè)/mL。

    1.2.3 榆黃蘑飲料抑制S180荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn) 領(lǐng)取昆明種小鼠50只,雌雄各半,按體重隨機(jī)分5組,每組10只。在動(dòng)物室適應(yīng)飼養(yǎng)2d,每日灌胃量如下:空白組和環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide)組灌胃蒸餾水,低、中、高劑量組每日分別灌胃165、330和660g·L-1的榆黃蘑飲料(0.1mL·10g-1體重飲料),第30d給每只小鼠右前肢腋窩部皮下注射0.2mL配制好的荷瘤細(xì)胞懸液。在接種腫瘤細(xì)胞的第1d和第5d,環(huán)磷酰胺組腹腔注射環(huán)磷酰胺85mg/kg。實(shí)驗(yàn)期間讓實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食和飲水。接種腫瘤細(xì)胞8d后,稱重記錄,脫臼處死小鼠,然后剝離腫瘤塊和胸腺,稱重。胸腺指數(shù)=胸腺平均質(zhì)量(mg)/平均體重(g),抑瘤率(%)=(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100%[4]。

    1.2.4 榆黃蘑飲料拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用實(shí)驗(yàn) 領(lǐng)取昆明種小鼠50只,雌雄各半,按體重隨機(jī)分5組,每組10只。在動(dòng)物室適應(yīng)飼養(yǎng)2d,空白組和環(huán)磷酰胺組每日灌胃蒸餾水,低、中、高劑量組每日分別灌胃165、330和660g·L-1的榆黃蘑飲料(0.1mL· 10g-1體重飲料),并在灌胃的第22d及第27d環(huán)磷酰胺組和飲料組小鼠均灌胃85mg/kg的環(huán)磷酰胺。第30d小鼠眼球取血,離心取血清,測(cè)定血清中SOD、MDA和NO及肝中AST和ALT等指標(biāo)。SOD采用羥胺法檢測(cè)[5],MDA采用硫代巴比妥酸法測(cè)定[6],ALT和AST采用試劑盒測(cè)定。

    1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件處理,結(jié)果以(±s)表示,各實(shí)驗(yàn)組分別與空白組和模型組進(jìn)行比較,采用t檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 榆黃蘑飲料抑制S180荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)

    如表1所示,環(huán)磷酰胺組抑瘤率達(dá)57.44%,但同時(shí)胸腺指數(shù)卻比空白組下降顯著(P<0.05)。榆黃蘑飲料對(duì)S180荷瘤的抑瘤率比環(huán)磷酰胺組低,但與空白組相比呈濃度梯度增強(qiáng)(P<0.05或0.01),同時(shí)胸腺指數(shù)比空白組顯著升高,其中低劑量組比空白組的胸腺指數(shù)有明顯升高(P<0.01),中、高劑量組升高的更顯著一些(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在接種腫瘤之前給小鼠口服榆黃蘑飲料,有良好的抑瘤作用。

    表1 榆黃蘑飲料對(duì)S180荷瘤小鼠的抗腫瘤作用(±s,n=10)

    表1 榆黃蘑飲料對(duì)S180荷瘤小鼠的抗腫瘤作用(±s,n=10)

    注:與對(duì)照組相比*為P<0.05,**為P<0.01;與模型組相比△為P<0.05,△△為P<0.01,表2同。

    組別 胸腺指數(shù)(mg/g)瘤重(g)抑瘤率(%) 26.84 1.50±0.18 2.97±0.13環(huán)磷酰胺組 1.20±0.15* 1.26±0.16** 57.44低劑量組 1.81±0.19*△△ 2.76±0.20*△△ 6.98中劑量組 2.56±0.22**△△ 2.27±0.26**△△ 23.54高劑量組 2.78±0.17**△△ 2.17±0.32**△△空白組

    2.2 榆黃蘑飲料拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用實(shí)驗(yàn)

    表2 榆黃蘑飲料拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s,n=10)

    表2 榆黃蘑飲料拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s,n=10)

    組別 SOD(UI/mg) MDA(nmol/mg) NO(μmol/L) ALT(UI/L) AST(UI/L) 76.90±3.70環(huán)磷酰胺組 35.77±2.08** 3.78±0.41* 26.27±1.74** 67.35±2.78** 91.21±5.29*低劑量組 41.84±3.58 2.26±0.35△ 36.81±1.39**△ 54.21±3.18△△ 67.63±2.86△△中劑量組 60.12±3.43**△△ 2.33±0.21△ 47.82±2.86**△△ 45.32±2.55△△ 76.04±3.72△高劑量組 61.52±2.25**△△ 2.47±0.31△ 53.31±2.18**△△ 44.99±1.34△△ 81.30±5.25空白組 46.36±2.07 2.49±0.32 79.85±6.44 48.51±2.27△

    如表2所示,與空白組比較,環(huán)磷酰胺組的SOD活性明顯下降,而MDA的含量,ALT和AST活性有明顯升高(P<0.05或0.01),說(shuō)明造模成功。與空白組相比較,榆黃蘑中、高劑量飲料組的SOD活性明顯上升(P<0.01),榆黃蘑飲料組的MDA含量、ALT和AST活性無(wú)明顯差異。與環(huán)磷酰胺組相比較,榆黃蘑中、高劑量飲料組的SOD活性明顯上升(P<0.01)。榆黃蘑飲料組的NO含量明顯上升(P<0.01),MDA含量明顯下降(P<0.05),ALT和 AST活性明顯下降(P<0.05或0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明榆黃蘑飲料有拮抗環(huán)磷酰胺毒副作用的效果。

    3 討論

    胸腺是體內(nèi)最重要的中樞免疫器官之一,胸腺指數(shù)反映胸腺的發(fā)育和功能狀況,間接反映了機(jī)體的免疫水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明榆黃蘑飲料在對(duì)S180荷瘤有抑制作用的同時(shí),對(duì)小鼠的胸腺?zèng)]有產(chǎn)生如環(huán)磷酰胺的毒害作用。

    環(huán)磷酰胺是目前臨床上常用的烷化劑類的抗腫瘤藥物,抗瘤譜較廣,對(duì)多種類型腫瘤有效,特別是對(duì)惡性淋巴瘤療效顯著,但環(huán)磷酰胺對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的選擇性不高,它在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí),也損傷了正常組織細(xì)胞,特別是人體中生長(zhǎng)旺盛的血液、淋巴組織細(xì)胞,產(chǎn)生了許多毒副作用,對(duì)肝臟也造成一定程度的損傷,所以環(huán)磷酰胺的毒副作用一直是困擾臨床用藥的一個(gè)突出的難題[7]。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,環(huán)磷酰胺模型組小鼠血清中ALT和AST活性較空白組明顯降低,說(shuō)明環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠肝臟有一定程度的損傷。另外,環(huán)磷酰胺模型組小鼠血清中SOD活性和NO含量較空白組明顯降低,而血清中MDA的含量卻顯著增加,說(shuō)明環(huán)磷酰胺抑制了機(jī)體的抗氧化能力,使機(jī)體抗氧化能力下降,導(dǎo)致體內(nèi)自由基不能及時(shí)清除,過(guò)多的自由基通過(guò)攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸,引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用,導(dǎo)致小鼠血清中脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA的含量增加,造成組織細(xì)胞膜毒性反應(yīng),影響了正常組織形態(tài)和功能的完整性,這可能是環(huán)磷酰胺在臨床治療過(guò)程中出現(xiàn)某些毒副作用的原因之一。

    實(shí)驗(yàn)顯示,榆黃蘑飲料能明顯抑制環(huán)磷酰胺致肝損傷小鼠血清ALT和AST的活性的升高,還顯著升高血清中SOD活性和NO含量,降低MDA的含量,說(shuō)明榆黃蘑有利于清除自由基,減少膜脂質(zhì)的過(guò)氧化,其對(duì)環(huán)磷酰胺造成的肝損傷有良好的保護(hù)作用。從以上結(jié)果可知,榆黃蘑飲料有望開發(fā)成一種有價(jià)值的保健品。

    [1] Lindequist U,Niedermeyer TH,Julich WD.The pharmacologicalpotentialofmushrooms[J].Evid Based Complement Alternat Med,2005,2(3):285-299.

    [2]阮瑞國(guó),丁李春,潘祥華,等.榆黃蘑[J].食用菌學(xué)報(bào),2006,13(4):33-38.

    [3]張影,包海鷹,李玉.珍貴食藥用菌金頂側(cè)耳研究現(xiàn)狀[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,25(1):54-57.

    [4]蘇云明,王文凱,王宏婷,等.靈芪膠囊對(duì)S180荷瘤小鼠抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].天津中醫(yī)藥,2007,24(5):397-398.

    [5]Choi HY,Song JH,Park YS,et al.Flow injiection-chemilum nescent assay for the determination of superoxide dismutase ativity[J].Can J Chem,2001,79(1):337-341.

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    [7]辛?xí)悦?,張慶柱,王浩,等.杜仲總多糖的提取及其對(duì)環(huán)磷酞胺致肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2007,25 (9):1896-1899.

    Anti-tumor and antagonism of side effects caused by cyclophosphaide of Pleurotus citrinopileatus juice beverage in mice

    SHI Su-yun1,LI Xiu-guo2,*
    (1.Key Laboratory for Organism Resources of the Changbai Mountain and Functional Molecules,Ministry of Education,Yanbian University,Yanji 133000,China;2.College of Basic Medicine,Yanbian University,Yanji 133000,China)

    Objective:To investigate the anti-tumor and anti-antagonization of side effects caused by cyclophosphaide of Pleurotus citrinopileatus juice beverage(PCJB)in mice.Methods:Mice were divided into a control,a cyclophoshaide(85mg/kg)and three PCJB groups for anti-tumor of S180 test.They were orally administered with distilled water(for control and cyclophoshaide groups)and three different doses of PCJB(165,330 and 660g·L-1,0.1mL·10g-1body)for 30d.The cyclophoshaide and beverage groups injected S180 ascites tumor at the right oxter of mice.The cyclophoshaide group was administered 85mg/kg of cyclophosphamide in the 1st day and 5th day.After 8d,the tumor weight and spleen index were measured.In antagonism of side effects caused by cyclophosphaide test,ibid division in mice.The control and model group mice were administered 85mg/kg of cyclophosphamide in the 22th and 27th day.The contents of NO and MDA and the activities of SOD,ALT and AST of serum in mice were determined in the 30th day.Results:The inhibiting tumor rates of PCJB were significantly higher than control(P<0.05,0.01)and the spleen index(P<0.01)of PCJB were significantly higher than cyclophoshamide group in the anti-tumor test.Compared with the model group,the PCJB treatments significantly increased the activity of SOD(P<0.01),and decreased the content of MDA(P<0.05)and activity of ALT and AST(P<0.05 or 0.01)on serum of mice in antagonism of side effects caused by cyclophosphaide test. Conclusion:PCJB improved the anti-tumor and antagonism of side effects caused by cyclophosphaide in mice.

    anti-tumor;antagonism of side effects caused by cyclophosphaide;Pleurotus citrinopileatus;mice

    TS201.1

    A

    1002-0306(2010)08-0332-03

    2009-06-30 *通訊聯(lián)系人

    施溯筠(1972-),博士,副教授,研究方向:長(zhǎng)白山特色植物保健食品開發(fā)。

    延邊大學(xué)“211”工程項(xiàng)目(YB211-2)。

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