HPLC法測定麻黃中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量

廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所（541002）陽志云 饒偉文

《中國藥典》2005年版一部收載的麻黃項(xiàng)下的含量測定中僅控制了麻黃堿[1]，而已有文獻(xiàn)報(bào)道的測定方法存在著樣品提取步驟多、耗時長、溶劑毒性大、流動相配制繁瑣等問題，筆者在現(xiàn)有方法的基礎(chǔ)上，經(jīng)系統(tǒng)研究，優(yōu)化了供試液制備方法、流動相系統(tǒng)等，使本法既簡便快速，又能同時測定麻黃中麻黃堿、偽麻黃堿兩種成分的含量，效果滿意。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司），BUT2030-40-06超聲波清洗器（必能信超聲上海有限公司），GZX-DH-BS電熱恒溫干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）， GR-202電子分析天平（日本A N D 公司）。鹽酸麻黃堿對照品（ephedrine hydrochloride）（批號171241-200506）鹽酸偽麻黃堿對照品（pseudoephedrine hydrochloride）（批號171237-200505）均購自中國藥品生物制品檢定所；麻黃藥材產(chǎn)自甘肅，經(jīng)筆者鑒定為草麻黃Ephedra sinica Stapf的干燥全草；乙腈、磷酸、三乙胺均為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 HPLC測定方法的建立與驗(yàn)證

2.1 供試液制備方法的優(yōu)選

2.1.1 提取溶劑的選擇 比較了①甲醇、②50%甲醇、③95%乙醇、④20%乙醇、⑤1mol.L-1鹽酸-20%乙醇（1：10）、⑥1mol.L-1鹽酸、⑦本文流動相等7種溶劑，結(jié)果用⑤、⑥、⑦號溶劑提取的供試液的色譜峰峰形好，雜質(zhì)峰少，其中⑤的提取率最高，故選其作為提取溶劑。

2.1.2 提取方法的選擇 在取樣量相同的前提下，以測得樣品的峰面積為指標(biāo)，比較了索氏提取、回流、超聲等提取方法的提取效率，結(jié)果回流提取效果最差，索氏提取和超聲提取效果相當(dāng)，而超聲法提取更簡便，故選之。見附表1。

2.1.3提取時間的選擇 用超聲法提取，仍以峰面積為指標(biāo)，比較了3種提取時間的提取率，結(jié)果表明超聲處理30分鐘以上，已基本提取完全，故本實(shí)驗(yàn)采用超聲處理30分鐘。見附表2。

2.2 流動相的選擇 比較了流動相：①乙腈-0.2%磷酸水溶液（4：96）[2]；②乙腈-0.02mol.L-1磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調(diào)pH值2.7）（2：98）[3]；③乙腈-0.1%磷酸（9：87）；④乙腈-0.2%磷酸-三乙胺（4：96：0.2），結(jié)果顯示采用流動相不僅基線穩(wěn)定，且能使各色譜峰達(dá)到良好的分離，120min的圖譜顯示55min后再沒有其他特征峰出現(xiàn)，故選為本實(shí)驗(yàn)流動相。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：Diamonsil-C18﹙250mm×4.6mm，5.0μm﹚；流動相：乙腈－0.2%磷酸－三乙胺（4：96：0.2）；流速：1ml.min-1；柱溫：30℃；檢測波長：207nm；進(jìn)樣量:20μl。在此色譜條件下，鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿可達(dá)到良好的分離。理論板數(shù)大于6000。

2.4 擬定的測定法

2.4.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10mg及鹽酸偽麻黃堿對照品10mg置同一100ml量瓶中，以1mol. L-1鹽酸-20%乙醇（1：10）為溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml至25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 供試品溶液的制備 取麻黃細(xì)粉約0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入上述溶劑25ml，超聲處理（220v， 50Hz）30分鐘，用45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4.3 測定法 分別精密吸取以上兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，依法測定。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 取鹽酸麻黃堿對照品溶液（104.3μg.ml-1）、鹽酸偽麻黃堿對照品溶液（101.1μg.ml-1），分別進(jìn)樣1、2、3、4、5、8、10、15、20、30、40、50μl，記錄色譜圖，以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，得到鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿回歸方程分別為：y=0.0005x-0.0008， Y=0.0004x+0.0091；質(zhì)量濃度線性范圍分別為104.3～521.5μg.ml-1﹙r=1，n=12﹚、101.1～505.5μg.ml-1﹙r=1，n=12﹚。

附表1 不同提取方法的效果比較（n=2）

附表2 不同提取時間的效果比較（n=2）

附表3 鹽酸麻黃堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

附表4 鹽酸偽麻黃堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

附表5 本實(shí)驗(yàn)方法與2005版藥典一部方法含量測定結(jié)果比較

2.5.2 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20μl，測定鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的峰面積，其RSD分別為0.41%（n=6）、0.53%（n=6），表明精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，照“2.4”項(xiàng)下的測定法，分別測定6次，結(jié)果鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量值的RSD分別為1.1%，1.21%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于0、2、8、14、43、58、82h進(jìn)樣20μl，測定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的峰面積，結(jié)果RSD分別為1.92%、2.01%，表明供試品溶液在82h穩(wěn)定性良好。

2.5.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取麻黃細(xì)粉0.1g，分別精密加入523μg.ml-1鹽酸麻黃堿對照品溶液、252μg.ml-1鹽酸偽麻黃堿對照品溶液各2ml，依法制備供試品溶液，測得鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的平均加樣回收率結(jié)果分別為103.1%和103%。見附表3、附表4。

2.6 本法與藥典法比較 取同一批樣品按本文方法及《中國藥典》2005年版一部收載的麻黃項(xiàng)下的含量測定方法測定鹽酸麻黃堿含量，兩種方法結(jié)果基本一致，見附表5。

3 討論

本文通過對供試液提取條件、流動相優(yōu)選等系統(tǒng)比較研究，重新建立了麻黃中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，操作簡便，所用試劑環(huán)保、結(jié)果準(zhǔn)確，各方面指標(biāo)均優(yōu)于藥典法，具有推廣應(yīng)用價(jià)值。