• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    核桃隔膜多糖的分離純化及單糖組成分析

    2010-10-19 05:25:56帕提古力瑪合木提
    食品科學(xué) 2010年21期
    關(guān)鍵詞:單糖柱層析隔膜

    高 莉,王 強,帕提古力·瑪合木提,*

    (1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,新疆 烏魯木齊 830046;2.新疆大學(xué)理化性質(zhì)測試中心,新疆 烏魯木齊 830046)

    核桃隔膜多糖的分離純化及單糖組成分析

    高 莉1,王 強2,帕提古力·瑪合木提1,*

    (1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,新疆 烏魯木齊 830046;2.新疆大學(xué)理化性質(zhì)測試中心,新疆 烏魯木齊 830046)

    目的:分離純化核桃隔膜多糖并分析其單糖組成。方法:核桃隔膜經(jīng)水提醇沉、冷凍干燥得水溶性多糖,經(jīng)DEAE-纖維素52離子柱和SephadexG-100凝膠柱分離純化后得到多糖組分PDJL-A11(diaphragma ofjuglans regiaL. acid polysaccharide)。運用紫外光譜鑒定純度,氣相色譜分析多糖的單糖組成。結(jié)果:核桃隔膜多糖PDJL-A11單糖組成為:阿拉伯糖、果糖、甘露糖、鼠李糖和葡萄糖,其物質(zhì)的量比為2.11:6.52:8.81:12.59:15.58。結(jié)論:建立了核桃隔膜多糖分離純化的方法,確定了其單糖組成及其物質(zhì)的量比、可為核桃隔膜藥理學(xué)的研究提供參考。

    核桃隔膜;多糖;純化;氣相色譜;單糖組成

    Abstract:The purpose of this work was to isolate and purify polysaccharide from diaphragma ofJuglans regiaL (PDJL) and analyze its monosaccharide composition. A water-soluble crude polysaccharide was obtained by water extraction, ethanol precipitation and freeze-drying. The crude polysaccharide was purified to obtain a fraction of PDJL-A11 on DEAE-cellulose52 column and SephadexG-100 column. The purity of PDJL-A11 was analyzed by UV spectrophotometer. The monosaccharide composition and molecular ratio of PDJL-A11 were analyzed by gas chromatography. The monosaccharide composition of PDJLA11was composed of arabinose, fructose, mannose, rhamnose and glucose with a molar ratio of 2.11:6.52:8.81:12.59:15.58.

    Key words:diaphragma ofJuglans regiaL.;polysaccharide;purification;gas chromatography;monosaccharide composition

    核桃隔膜(diaphragma ofJuglans regiaL.)又名核桃分心木,為胡桃科(Juglandaceae)胡桃屬(JuglansL.)植物核桃的帶骨質(zhì)內(nèi)果皮的種隔[1]。在維吾爾族民間常用它泡服,具有補腎澀精、治療多汗、尿頻、遺尿、口腔潰瘍、牙齦出血等多重功效[2-3]。相關(guān)研究表明[4],核桃隔膜中含有蛋白質(zhì)、多糖、黃酮、生物堿、揮發(fā)油、有機酸、強心苷、甾類、皂苷等多種化學(xué)成分。而目前,對于其化學(xué)成分的研究僅限于黃酮、色素和揮發(fā)油。多糖作為一種重要的活性成分,除了有抗病毒、抗腫瘤、抗衰老的生理功能外,還有免疫調(diào)節(jié)、降血糖、抗凝血等作用[5-6]。

    本實驗運用離子交換和凝膠層析對核桃隔膜多糖提取物分離純化,紫外光譜和凝膠層析鑒定純度,采用氣相色譜對PDJL-A11的單糖組分進行分析,以期為核桃隔膜多糖的結(jié)構(gòu)解析、構(gòu)效關(guān)系及生物活性的研究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    核桃隔膜(和田薄皮核桃)購于烏魯木齊市二道橋。

    DEAE-cellulose52、SephadexG-100 Whatman公司;葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖 上海試劑公司;無水乙醇、氯仿、正丁醇、丙酮、乙醚、濃硫酸、氯化鈉、鹽酸、鹽酸羥胺、吡啶、醋酸酐、碳酸鋇、肌醇等均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    S24可見分光光度計 上海棱光技術(shù)有限公司;RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;SHZ-D循環(huán)水式真空泵、HH-S型水浴鍋 鞏義市英峪予華儀器廠;DHG-9141A型電熱恒溫干燥箱 上海精宏試驗設(shè)備有限公司;D-37520離心機 德國Kendro公司;ALPHA1-2LD真空冷凍干燥機 德國Martin Christ公司;HT6890氣相色譜儀 美國Aglient公司。

    1.3 方法

    1.3.1 核桃隔膜粗多糖的提取

    精確稱取100g經(jīng)過脫脂處理的核桃隔膜干粉,90%乙醇300mL在95℃提取2h,抽濾,濾渣揮干溶劑,按水料比1:80(m/V)、溫度90℃,水浴浸提180min,抽濾,濾渣可用少量溫水沖洗,得到核桃隔膜可溶性多糖浸提液。將多糖浸提液60℃真空濃縮成小體積,按體積比3:1加入Sevag混合液(氯仿與正丁醇體積比為4:1),劇烈振蕩20min后,4000r/min離心15min,收集上清液,仍按體積比3:1加入Sevag混合液,重復(fù)10~13次至中間層無變性蛋白。收集上清液,加入3倍體積的無水乙醇置4℃冰箱過夜,5000r/min離心5min沉淀多糖,沉淀用乙醚和丙酮各洗滌兩次,真空冷凍干燥,稱質(zhì)量,備用。

    1.3.2 核桃隔膜粗多糖的純化

    1.3.2.1 DEAE-纖維素52柱層析[7-8]

    柱規(guī)格為3cm×39.5cm,有效柱長15.5cm,50mg/mL糖液上樣6mL,采用0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4mol/L NaCl溶液進行梯度洗脫。控制流速0.5mL/min,5mL/管。蒽酮-硫酸法[9]隔管跟蹤檢測多糖流出部位,收集同一洗脫峰的多糖樣品,以管號為橫坐標,多糖洗脫液的吸光度為縱坐標,做洗脫曲線。

    1.3.2.2 Sephadex G-100柱層析[10]

    將DEAE-纖維素52柱層析洗脫組分經(jīng)透析、濃縮、冷凍干燥后配成20mg/mL溶液,上樣4mL,用0.1mol/L NaCl溶液洗脫,柱規(guī)格為2cm×40cm,有效柱長25.5cm,流速為0.2mL/min,3mL/管。蒽酮-硫酸法[9]隔管跟蹤檢測多糖流出部位,收集同一洗脫峰的多糖樣品,以管號為橫坐標,多糖洗脫液的吸光度為縱坐標,做洗脫曲線。

    1.3.3 亞級組分PDJL-A11純度鑒定

    1.3.3.1 SephadexG-100純度鑒定

    經(jīng)過SephadexG-100分離純化后的亞級組分5mg溶解于0.1mol/L NaCl溶液中,上樣1mL,0.1mol/L NaCl溶液洗脫,流速0.1mL/min,2mL/管。

    1.3.3.2 紫外光譜純度鑒定

    SephadexG-100分離純化后的亞級組分PDJL-A11,經(jīng)透析、濃縮、冷凍干燥后配成0.5mg/mL溶液,在UV-2450紫外-可見分光光度計上從波長200nm掃描到600nm,蒸餾水作空白對照,檢測有無核酸(波長260nm處)和蛋白質(zhì)(波長280nm處)特征吸收峰。

    1.3.4 單糖組成分析

    1.3.4.1 樣品完全酸水解[11]

    精確稱取20mg PDJL-A11置于安醅瓶中,加入2mol/L硫酸溶液5mL,酒精噴燈真空封管,置于烘箱里110℃水解6h,取出冷卻至室溫后加入BaCO3粉末靜置過夜,待其中和至中性,離心除去BaCO3沉淀,取上清液,冷凍干燥得到樣品單糖混合物,備用。

    1.3.4.2 內(nèi)標肌醇六乙酸酯的制備[12]

    稱取3g肌醇,加入4.5g鹽酸羥胺,45mL醋酸酐和3mL吡啶,在90℃水浴中加熱2h并不斷攪拌。將反應(yīng)液冷卻至室溫后倒入50mL冰水,使肌醇六乙酸酯析出。過濾后加20mL水洗滌,將壓干后產(chǎn)物放入100℃烘箱中烘干備用。制備的肌醇六乙酸酯用氣相色譜檢驗應(yīng)呈現(xiàn)單峰。

    1.3.4.3 糖腈乙酰酯衍生物的制備

    精確稱取水解后的樣品單糖混合物10mg,鹽酸羥胺10mg,內(nèi)標7mg,加入0.5mL吡啶,放入90℃水浴中加熱反應(yīng)30min并振蕩。取出冷卻至室溫,加入0.5mL醋酸酐,在90℃水浴中繼續(xù)反應(yīng)30min進行乙酰化,取清液進行氣相色譜分析。標準單糖的糖腈乙酰酯衍生物采用同法制備。

    1.3.4.4 氣相色譜條件

    HT6890氣相色譜儀配備HP-5石英毛細管柱,F(xiàn)ID檢測器,程序升溫:柱初溫190℃,保留2min,以5℃/min升溫至230℃,保留5min;汽化室溫度:230℃;進樣量:1μL;分流比30:1;載氣N2:1mL/min;H2:30mL/min;空氣:300mL/min。

    1.3.4.5 氣相色譜定性定量分析[13-14]

    將樣品與標準單糖的色譜峰保留值進行對照以確定樣品中單糖的種類,采用內(nèi)標法根據(jù)內(nèi)標物和試樣的質(zhì)量以及內(nèi)標物和被測組分的峰面積求出樣品中單糖的含量及物質(zhì)的量比。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 DEAE-纖維素52柱層析

    由圖1可知,用水洗脫獲得了一種中性多糖組分,命名為PDJL-W。由圖2可知,NaCl溶液梯度洗脫出現(xiàn)了3種酸性多糖組分,按照出峰順序分別命名為PDJL-A1、PDJL-A2、PDJL-A3。由于其余組分含量較低,很難收集足夠的量進行后續(xù)研究,所以通過DEAE-纖維素52柱層析只對PDJL-A1組分進行下一步Sephadex G-100的分離純化。

    圖1 核桃隔膜多糖DEAE-cellulose52柱層析水洗脫曲線圖Fig.1 Water elution curve of PDJL on DEAE-52 column

    圖2 核桃隔膜多糖DEAE-cellulose52柱層析鹽洗脫曲線圖Fig.2 Salt elution curve of PDJL on DEAE-52 column

    2.2 Sephadex G-100柱層析

    圖3 核桃隔膜多糖PDJL-A1-Sephadex G-100柱層析鹽洗脫曲線Fig.3 Salt elution curve of PDJL-A1on Sephadex G-100 column

    由圖3可知,在17管左右形成了一個明顯的主峰,但在此峰峰腰處即29管處出現(xiàn)了一個小峰。說明PDJL-A1中含有兩種分子質(zhì)量相差不太大的多糖組分,在凝膠柱上分離效果不好。為了能夠得到分子質(zhì)量比較均一的多糖,只收集1~27管洗脫液做后續(xù)研究,并將其命名為PDJL-A11。

    2.3 核桃隔膜多糖PDJL-A11純度鑒定

    2.3.1 Sephadex G-100純度鑒定

    圖4 PDJL-A11的Sephadex G-100純度鑒定Fig.4 Purity identification of PDJL-A11on Sephadex G-100 column

    將PDJL-A11溶解于0.1mol/L NaCl溶液中,通過Sephadex G-100層析柱洗脫得到了一個單一對稱峰。(圖4)說明通過分離純化得到的核桃隔膜酸性多糖PDJL-A11樣品是均一的純多糖,可以對其進行結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的研究。

    2.3.2 紫外光譜純度鑒定

    圖5 PDJL-A11的紫外-可見光譜圖Fig.5 UV-visible spectrum of PDJL-A11

    如圖5所示,PDJL-A11的紫外光譜圖在紫外光區(qū)波長280nm處和可見光區(qū)沒有吸收峰,說明不含蛋白質(zhì)和色素,波長260nm處有一個較小的吸收峰,說明其組分含有少量核酸。

    2.4 單糖組成分析

    7種標準單糖糖腈乙?;苌锏腉C分析結(jié)果見表1,樣品單糖組成的GC分析結(jié)果見圖6。

    表1 標準單糖糖腈乙?;苌锏腉C分析結(jié)果Table 1 GC analytical data of seven monosaccharide standards

    圖6 樣品單糖組成的氣相色譜圖Fig.6 Gas chromatogram showing the monosaccharide composition of PDJL-A11

    將樣品的氣相色譜圖與標準單糖氣相色譜圖進行對照,通過保留時間和峰面積對樣品中的單糖進行定性定量分析,結(jié)果見表2。由表2可以確定樣品PDJL-A11中含有葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖和阿拉伯糖5種單糖,并計算得阿拉伯糖、果糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖的物質(zhì)的量之比為2.11:6.52:8.81:12.59:15.58。

    表2 PDJL-A11的GC分析結(jié)果Table 2 GC analytical data of PDJL-A11

    3 結(jié) 論

    本研究采用DEAE-cellulose52陰離子交換樹脂和葡聚糖凝膠G-100層析柱從核桃隔膜中分離、純化得到了一種酸性多糖PDJL-A11。通過凝膠層析和紫外光譜分析,表明PDJL-A11為均一多糖組分。運用氣相色譜分析時,由于多糖本身不具有揮發(fā)性,所以選擇將其轉(zhuǎn)化成易揮發(fā)、對熱穩(wěn)定的糖腈乙酸酯衍生物。該法具有操作方便、定性簡單可靠、定量準確的優(yōu)點。

    通過氣相分析,確定PDJL-A11由葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖和阿拉伯糖5種單糖組成,并計算得出阿拉伯糖、果糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖的物質(zhì)的量之比為2.11:6.52:8.81:12.59:15.58。

    [1] 郗容庭, 張毅萍. 中國核桃[M]. 北京:中國林業(yè)出版社, 1992:78-81.

    [2] 菇克婭·沙德克. 維吾爾醫(yī)常藥材學(xué)(下冊)[M]. 烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社, 1993:53.

    [3] 孫龍生. 核桃的經(jīng)濟價值[J]. 新農(nóng)業(yè), 2007(1):50.

    [4] 王艷梅, 高莉, 帕提古麗·馬合木提, 等. 核桃隔膜化學(xué)成分定性研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2008(12):123-124.

    [5] 鄭敏, 盧葵花, 吳基良. 大蒜多糖體外抗乙型肝炎病毒作用研究[J].中藥藥理與臨床, 2005, 21(3):29-30.

    [6] 鄭敏, 梅賢臣, 鮑翠玉. 大蒜多糖體外抗柯薩奇病毒B作用[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2005, 22(1):4-6.

    [7] 吳茜茜, 吳克. 海帶巖藻多糖的分離與部分性質(zhì)研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2001, 27(10):39-42.

    [8] 孔慶勝, 王彥英. 南瓜多糖的分離、純化及其降血脂作用[J]. 中國生化藥物雜志, 2000, 21(3):130-132.

    [9] 張翼伸. 食品分析[M]. 北京:中國輕工業(yè)出版社, 1983:163.

    [10] 趙永芳. 生物化學(xué)技術(shù)原理及其應(yīng)用[M]. 武漢:武漢大學(xué)出版社,1999:113-146.

    [11] 李健, 劉寧, 陳平, 等. 香菇多糖單糖組成及含量的測定方法研究[J].化學(xué)與黏合, 2005, 27(2):71-73.

    [12] 張惟杰. 復(fù)合多糖生化研究技術(shù)[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1987:41-43.

    [13] 沈萍萍, 付庭治. 真菌多糖研究進展[J]. 南京大學(xué)學(xué)報, 1991, 27(3):524-529.

    [14] 朱明華. 儀器分析[M]. 3版. 北京:高等教育出版社, 2000:52-54.

    Isolation, Purification and Monosaccharide Composition Analysis of Polysaccharide from Diaphragma ofJuglans regiaL.

    GAO Li1,WANG Qiang2,PATIGUL Mahmut1,*
    (1. College of Life Science and Technology, Xinjiang University,rmqi 830046, China;2. Test Center of Physical and Chemical Characteristic, Xinjiang University,rmqi 830046, China)

    TS201.23

    A

    1002-6630(2010)21-0182-04

    2010-02-06

    高莉(1984—),女,碩士,主要從事資源植物成分分析研究。E-mail:gaoli40130@163.com

    *通信作者:帕提古力·瑪合木提(1959—),女,教授,本科,主要從事資源植物成分研究。E-mail:patigulimahemuti@126.com

    猜你喜歡
    單糖柱層析隔膜
    中藥活性肽的制備、分離純化及鑒定研究進展
    一種高壓鋼化橡膠雙隔膜濾板
    一種高壓鋼化橡膠雙隔膜濾板
    海藻多糖的單糖組成對體外抗氧化活性的影響
    柱層析用硅膠對羌活中主要成分的影響
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:15
    厚樸酚中壓硅膠柱層析純化工藝的優(yōu)化
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:46
    蹄葉槖吾葉多糖提取工藝優(yōu)化及單糖組成研究
    HPLC-ELSD法測定煙草中單糖含量
    大型氫氣隔膜壓縮機的開發(fā)及應(yīng)用
    反相C18柱層析法制備高純度辣椒堿單體
    欧美精品国产亚洲| 日本-黄色视频高清免费观看| 秋霞在线观看毛片| 淫秽高清视频在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 精品日产1卡2卡| 最近中文字幕高清免费大全6| 最好的美女福利视频网| 成人欧美大片| 简卡轻食公司| 欧美精品国产亚洲| 九九在线视频观看精品| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 成年女人永久免费观看视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 中文字幕久久专区| 人妻少妇偷人精品九色| 丰满人妻一区二区三区视频av| 搞女人的毛片| 国产日本99.免费观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 日本五十路高清| av黄色大香蕉| 久久6这里有精品| 小说图片视频综合网站| 国产精品久久电影中文字幕| 丝袜美腿在线中文| 成人国产麻豆网| 国产熟女欧美一区二区| 欧美高清性xxxxhd video| 嫩草影院入口| 日本 av在线| 久久久久国产网址| 久久久国产成人精品二区| 观看美女的网站| 看非洲黑人一级黄片| 欧美区成人在线视频| 国产色爽女视频免费观看| 国产亚洲精品久久久com| 精品久久久久久久久av| 久久热精品热| 内射极品少妇av片p| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费看av在线观看网站| 高清毛片免费看| 欧美最黄视频在线播放免费| 十八禁国产超污无遮挡网站| 99精品在免费线老司机午夜| 久久鲁丝午夜福利片| 中文资源天堂在线| 97超碰精品成人国产| 国产精品野战在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 丝袜喷水一区| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品一二三区在线看| 午夜爱爱视频在线播放| 一级毛片我不卡| av卡一久久| 91久久精品国产一区二区成人| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲最大成人av| www.色视频.com| 国产老妇女一区| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美不卡视频在线免费观看| 欧美高清成人免费视频www| 看片在线看免费视频| 成人欧美大片| 波多野结衣巨乳人妻| 赤兔流量卡办理| 18+在线观看网站| 18+在线观看网站| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产午夜精品论理片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲不卡免费看| 级片在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 校园春色视频在线观看| 成人综合一区亚洲| 在线播放无遮挡| 国内精品一区二区在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| av在线蜜桃| av中文乱码字幕在线| 国产av在哪里看| 午夜a级毛片| 国产精品一区二区三区四区久久| 淫秽高清视频在线观看| videossex国产| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日本熟妇午夜| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲真实伦在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 午夜福利高清视频| 国产精品无大码| 日日撸夜夜添| 嫩草影院精品99| 俺也久久电影网| 免费在线观看成人毛片| 极品教师在线视频| 久久精品国产亚洲av天美| 99热这里只有是精品50| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美区成人在线视频| 国产爱豆传媒在线观看| 久久国产乱子免费精品| 日本精品一区二区三区蜜桃| 一级毛片久久久久久久久女| 国产成人影院久久av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 97热精品久久久久久| 六月丁香七月| 97热精品久久久久久| 日韩高清综合在线| 男人的好看免费观看在线视频| 性色avwww在线观看| 97热精品久久久久久| 亚洲精品国产av成人精品 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 中文资源天堂在线| 伦精品一区二区三区| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品乱码一区二三区的特点| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲无线观看免费| 欧美+日韩+精品| 黄色配什么色好看| 亚洲av二区三区四区| 小说图片视频综合网站| 国产午夜福利久久久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 色视频www国产| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品伦人一区二区| 亚洲成a人片在线一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 麻豆乱淫一区二区| 国产69精品久久久久777片| 成人二区视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| a级毛片免费高清观看在线播放| 九九热线精品视视频播放| 嫩草影院新地址| 十八禁网站免费在线| 精品乱码久久久久久99久播| 床上黄色一级片| 九九热线精品视视频播放| 最近视频中文字幕2019在线8| 日本爱情动作片www.在线观看 | 淫妇啪啪啪对白视频| 成人综合一区亚洲| 日韩欧美在线乱码| 不卡视频在线观看欧美| 国产毛片a区久久久久| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 高清午夜精品一区二区三区 | 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美区成人在线视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 亚洲国产精品成人久久小说 | 可以在线观看的亚洲视频| 国产视频内射| 亚洲美女搞黄在线观看 | 男人舔女人下体高潮全视频| 一进一出好大好爽视频| 波多野结衣高清作品| 综合色av麻豆| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久久久国内视频| av女优亚洲男人天堂| 桃色一区二区三区在线观看| 日本三级黄在线观看| 亚洲在线观看片| 18+在线观看网站| 婷婷亚洲欧美| 两个人的视频大全免费| 国产av在哪里看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 在线免费观看的www视频| 亚洲国产欧美人成| 久久综合国产亚洲精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 日本黄色片子视频| 国产av一区在线观看免费| 看片在线看免费视频| 国产精品国产高清国产av| 成人特级黄色片久久久久久久| 97碰自拍视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美一区二区国产精品久久精品| 一夜夜www| 禁无遮挡网站| 99热6这里只有精品| 久久精品国产亚洲av天美| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美人与善性xxx| 99热精品在线国产| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品人妻熟女av久视频| 色av中文字幕| 丝袜喷水一区| 久久久欧美国产精品| 三级经典国产精品| 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚州av有码| 亚洲性夜色夜夜综合| 性色avwww在线观看| 久久久久性生活片| 国产精品久久电影中文字幕| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产伦在线观看视频一区| 高清午夜精品一区二区三区 | 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 看非洲黑人一级黄片| 精品久久久久久久久av| 国产成人a∨麻豆精品| 最近在线观看免费完整版| 欧美成人精品欧美一级黄| 69av精品久久久久久| 午夜福利在线观看吧| a级毛色黄片| 亚洲av成人精品一区久久| 日本熟妇午夜| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 婷婷六月久久综合丁香| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 69av精品久久久久久| 最近2019中文字幕mv第一页| 在线观看av片永久免费下载| 日日啪夜夜撸| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产中年淑女户外野战色| 久久久a久久爽久久v久久| 国产精品不卡视频一区二区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品国产三级普通话版| 久久久精品欧美日韩精品| 男插女下体视频免费在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 国产av麻豆久久久久久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 长腿黑丝高跟| 亚洲精品久久国产高清桃花| 又爽又黄无遮挡网站| 看片在线看免费视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 精品人妻视频免费看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| av在线播放精品| 一级黄片播放器| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲自偷自拍三级| 午夜福利在线观看吧| 国产精品久久久久久久久免| 人人妻人人看人人澡| 欧美三级亚洲精品| avwww免费| 免费大片18禁| 精品人妻熟女av久视频| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩精品中文字幕看吧| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久久久国内视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美+日韩+精品| 身体一侧抽搐| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产乱人偷精品视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 日本与韩国留学比较| 国产一区二区激情短视频| 99久久精品一区二区三区| 欧美性感艳星| 最近中文字幕高清免费大全6| 22中文网久久字幕| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久精品人妻少妇| 最新中文字幕久久久久| 久久久久久大精品| 午夜精品在线福利| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 看黄色毛片网站| 91久久精品电影网| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 性插视频无遮挡在线免费观看| 99热这里只有是精品在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久精品国产亚洲av天美| 岛国在线免费视频观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲内射少妇av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99热这里只有是精品50| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 综合色av麻豆| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久久a久久爽久久v久久| 成年版毛片免费区| 亚洲真实伦在线观看| 床上黄色一级片| 毛片女人毛片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久久久国产网址| 亚洲自拍偷在线| 久久久久久国产a免费观看| 精品久久久久久久末码| 午夜老司机福利剧场| 色视频www国产| 一级av片app| 在线国产一区二区在线| 91久久精品电影网| 少妇的逼好多水| 成人av在线播放网站| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产熟女欧美一区二区| 黑人高潮一二区| 毛片女人毛片| 黄色欧美视频在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 日本 av在线| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 精品久久久久久久久久久久久| 欧美区成人在线视频| 色吧在线观看| 在现免费观看毛片| 国产欧美日韩精品一区二区| 日日啪夜夜撸| 一夜夜www| 久久久久久久久久久丰满| av福利片在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 人妻少妇偷人精品九色| 国产亚洲精品av在线| 国产乱人视频| 亚洲高清免费不卡视频| 99视频精品全部免费 在线| av卡一久久| 大香蕉久久网| 精品久久久久久久久av| 欧美xxxx性猛交bbbb| 在线国产一区二区在线| 国产高清视频在线播放一区| 我的女老师完整版在线观看| 欧美zozozo另类| av女优亚洲男人天堂| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 97碰自拍视频| 色吧在线观看| 久久6这里有精品| 午夜久久久久精精品| 不卡一级毛片| 久久久精品94久久精品| 国产精品久久久久久久久免| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲内射少妇av| 成人二区视频| 女同久久另类99精品国产91| 国产成人福利小说| 一级av片app| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 欧美三级亚洲精品| 精品一区二区免费观看| 日本免费a在线| 免费看日本二区| 国产精品不卡视频一区二区| 高清午夜精品一区二区三区 | 热99在线观看视频| 久久久精品欧美日韩精品| 精品午夜福利在线看| 老司机影院成人| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 有码 亚洲区| 久久精品国产亚洲av天美| 一区二区三区高清视频在线| 久久6这里有精品| 午夜日韩欧美国产| 97超视频在线观看视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产一区二区激情短视频| 欧美极品一区二区三区四区| 国产高潮美女av| av视频在线观看入口| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 久久精品夜色国产| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99热6这里只有精品| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产精品sss在线观看| 如何舔出高潮| 99久久中文字幕三级久久日本| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 国产免费男女视频| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲第一区二区三区不卡| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩欧美精品v在线| 校园春色视频在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产在线精品亚洲第一网站| 97在线视频观看| 国产午夜精品论理片| 久久6这里有精品| 欧美区成人在线视频| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美日韩在线观看h| 午夜精品国产一区二区电影 | 热99在线观看视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 中文字幕熟女人妻在线| 三级经典国产精品| 久久午夜亚洲精品久久| 久久久午夜欧美精品| 91精品国产九色| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品电影一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 99久久九九国产精品国产免费| 国产久久久一区二区三区| 亚洲精品成人久久久久久| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 成人欧美大片| 欧美日韩乱码在线| 国产老妇女一区| 国产淫片久久久久久久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 极品教师在线视频| 亚洲av免费在线观看| 久久久欧美国产精品| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 久久久色成人| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美3d第一页| 一进一出好大好爽视频| 亚洲在线观看片| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久欧美国产精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 最近的中文字幕免费完整| 精品久久久久久久久亚洲| 天堂影院成人在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 黄色配什么色好看| 久久国内精品自在自线图片| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品永久免费网站| 男女边吃奶边做爰视频| 不卡视频在线观看欧美| 在线观看美女被高潮喷水网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲欧美精品自产自拍| 99久久中文字幕三级久久日本| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲乱码一区二区免费版| av女优亚洲男人天堂| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产av一区在线观看免费| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美丝袜亚洲另类| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲av美国av| 精品一区二区三区av网在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品国产高清国产av| 亚洲最大成人手机在线| 免费看a级黄色片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 九色成人免费人妻av| 少妇的逼水好多| 国产一区二区激情短视频| 看片在线看免费视频| 五月玫瑰六月丁香| 九九爱精品视频在线观看| 日本与韩国留学比较| 熟女人妻精品中文字幕| 22中文网久久字幕| 久久久色成人| 全区人妻精品视频| 久久午夜福利片| 亚洲av二区三区四区| 欧美激情在线99| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av一区综合| 中国美白少妇内射xxxbb| 听说在线观看完整版免费高清| 尾随美女入室| 俺也久久电影网| 日本与韩国留学比较| 国产综合懂色| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 秋霞在线观看毛片| 久久精品国产清高在天天线| 91在线观看av| 99久久精品国产国产毛片| 免费看a级黄色片| 久久久a久久爽久久v久久| 一级毛片久久久久久久久女| 永久网站在线| 如何舔出高潮| 色哟哟·www| 一个人看的www免费观看视频| 久99久视频精品免费| 最新中文字幕久久久久| 国产激情偷乱视频一区二区| 日日干狠狠操夜夜爽| 人妻夜夜爽99麻豆av| 91精品国产九色| 日日撸夜夜添| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩强制内射视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 午夜福利在线在线| 成熟少妇高潮喷水视频| 日韩三级伦理在线观看| 日本熟妇午夜| 午夜爱爱视频在线播放| 国产精品av视频在线免费观看| 午夜视频国产福利| 国产成人影院久久av| 亚洲自拍偷在线| 免费观看精品视频网站| 夜夜爽天天搞| 日日啪夜夜撸| 亚洲在线观看片| 丝袜美腿在线中文| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲不卡免费看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲国产高清在线一区二区三| 男人狂女人下面高潮的视频| 长腿黑丝高跟| 精品福利观看| 久久久久性生活片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产真实乱freesex| 精品一区二区免费观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 午夜爱爱视频在线播放| 99热网站在线观看| 国产探花极品一区二区| 国产成人aa在线观看| av免费在线看不卡| 搞女人的毛片| 亚洲国产色片| 香蕉av资源在线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| www日本黄色视频网| 国产伦精品一区二区三区四那| 性色avwww在线观看| 精品人妻视频免费看| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲高清免费不卡视频| 国产一区二区三区av在线 | 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美性感艳星| 老熟妇仑乱视频hdxx| 乱码一卡2卡4卡精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美+亚洲+日韩+国产| 十八禁国产超污无遮挡网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品福利在线免费观看| 国内精品久久久久精免费|