5株奶牛乳房炎鏈球菌的鑒定

■ 賈保中 王建軍 包頭市家畜改良工作站

奶牛乳房炎是奶牛乳房的乳腺組織或腺體發(fā)炎而形成的乳房疾病，是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之一。北京、上海、廣州、蘭州等城市的調(diào)查結(jié)果顯示，乳房炎是奶牛場最嚴重的疾病之一，發(fā)病率達20%～70%。乳房炎可造成奶牛產(chǎn)奶量下降，原料奶品質(zhì)降低和廢棄。由于國內(nèi)不少奶牛場濫用抗生素，耐藥菌株不斷出現(xiàn)，很多抗生素失去了治療作用，使乳房炎的發(fā)病率居高不下。

引起奶牛乳房炎的原因有物理因素、化學(xué)因素、機械因素、微生物的感染等。在引起乳房炎的各種因素中，微生物的感染又占相當(dāng)大的比例，微生物又可分為細菌、病毒等。其中鏈球菌是主要細菌之一。目前，鏈球菌屬共有30多種，比較常見的有10多種，其中，無乳鏈球菌為奶牛乳房炎最常見的致病菌。該菌能引起嬰兒敗血癥、腦膜炎和肺炎等，人醫(yī)臨床上對該菌以B群鏈球菌相稱。該菌感染牛、山羊、綿羊發(fā)生乳腺炎，不產(chǎn)生明顯的免疫，目前也無可靠的多價疫苗。本實驗對送檢的奶樣進行了分離，對其中分離到的5株鏈球菌生物學(xué)特性進行了研究。

1 實驗材料

1.1 乳樣

由奶牛場工作人員無菌操作，采集乳樣送至實驗室待檢。

1.2 藥敏紙片

由包頭市動物疫病預(yù)防控制中心化驗室提供。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

葡萄球菌1株（呈β－溶血），由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)與醫(yī)學(xué)院提供。

1.4 實驗動物

綿羊、小白鼠，由包頭市動物疫病預(yù)防控制中心化驗室提供。

圖1 實驗步驟

2 實驗步驟與方法

2.1 實驗步驟

本實驗的步驟如圖1所示。

2.2 實驗方法

2.2.1 形態(tài)學(xué)檢查

將乳樣進行涂片，革蘭氏染色之后，置顯微鏡下觀察細菌的形狀、排列和染色特性，初步判斷樣品中是否含有鏈球菌。

各層次、各專業(yè)的職業(yè)教育均是以職業(yè)能力的培養(yǎng)為核心，并按照核心崗位的需求來構(gòu)建課程體系，[2]這就要求中高職在市場調(diào)研的基礎(chǔ)上共同協(xié)商統(tǒng)籌專業(yè)課程。但當(dāng)前中高職銜接過程中關(guān)于課程設(shè)置的問題較為突出。文化課方面，中職堅持“簡單、夠用”，高職則強調(diào)“深度、廣度”。因此，中職學(xué)生進入高職院校后，學(xué)習(xí)文化課普遍感到吃力，尤其在高等數(shù)學(xué)和大學(xué)英語等級考試方面的能力較差，較難完成專業(yè)培養(yǎng)目標(biāo)要求。②專業(yè)課程方面。中高職在專業(yè)課程方面存在的最大問題是課程重復(fù)現(xiàn)象嚴重、課程先后順序不合理、課程內(nèi)容層次不分明。

2.2.2 分離培養(yǎng)

根據(jù)所要研究的鏈球菌的培養(yǎng)特性以及生長特性，選擇血液瓊脂培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)，獲得5株細菌。

2.2.3 細菌的培養(yǎng)特性及生長特性檢查

主要進行細菌培養(yǎng)特性檢查（營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣與CO2需要、溫度要求、pH值及對氯化鈉耐受性），細菌生長表現(xiàn)檢查（如菌落、生長表現(xiàn)等）及生化物性檢查（如糖代謝實驗、特征性生化實驗——CAMP實驗）。

2.2.4 細菌對抗菌藥物的敏感實驗

將細菌接種于血清肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24h后，進行無菌操作，用無菌吸管吸取肉湯0.1mL，滴于血液瓊脂培養(yǎng)基平皿中。用推棒先沿一個方向涂布，然后反方向涂布，使其涂布均勻，之后加蓋放置。待平皿稍干，用滅菌的鑷子將藥片貼于已經(jīng)平均分成若干份、標(biāo)記且已涂布的平皿上，并輕壓使其貼在培養(yǎng)基表面，藥敏片一旦接觸平板就不要移動。藥敏片之間的距離應(yīng)適當(dāng)，避免互相影響，之后置37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。測量抑菌圈直徑，按其大小報告敏感、中度敏感或耐藥。

2.2.5 細菌致病性實驗——動物實驗

3 實驗結(jié)果

3.1 形態(tài)

各樣品涂片、染色鏡檢可觀察到革蘭氏陽性菌長短不一的、鏈狀排列的球形或卵圓形的細菌，初步判斷為鏈球菌。

3.2 培養(yǎng)特性

營養(yǎng)要求比較高，普通瓊脂上生長不良，血液瓊脂上呈細小、灰白色、圓而微凸的菌落，有光澤，濕潤、閃光，呈露滴狀。血液瓊脂斜面上生長量中等，呈現(xiàn)類似一層灰白色的膜，將瓊脂斜面全部覆蓋，且邊緣整齊；無其它氣味，血液瓊脂無其它顏色或其它變化。從培養(yǎng)特性上看符合鏈球菌的所有培養(yǎng)特性。

3.3 生化特性

3.3.1 糖類代謝

根據(jù)糖類實驗結(jié)果（表1）可知，此5株菌接近于無乳鏈球菌。

3.3.2 CAMP實驗

實驗結(jié)果表明，5株細菌在交接處出現(xiàn)箭頭型溶血，可確定5株菌均為無乳鏈球菌。

3.3.3 藥物敏感性

此5株菌的藥物敏感性實驗結(jié)果如表2所示。

3.3.4 致病性

小白鼠1周之內(nèi)沒有死亡，致病性不強。

4 討論與小結(jié)

4.1 經(jīng)實驗鑒定，5株鏈球菌均為無乳鏈球菌，屬于革蘭氏陽性菌，是B群鏈球菌的成員，呈α溶血。從培養(yǎng)特性可知，無乳鏈球菌營養(yǎng)要求高，在普通瓊脂營養(yǎng)基中生長不良，5%血液培養(yǎng)基上生長也不是太好。實驗時要考慮加大血液培養(yǎng)基中血液的比例。糖類實驗中，5株無乳鏈球菌的結(jié)果并不完全一致，可能是因為5株無乳鏈球菌抗原構(gòu)造不同而使結(jié)果不一致。此5株無乳鏈球菌未產(chǎn)生很強的耐藥性，對多數(shù)抗生素敏感，而只對少數(shù)抗生素產(chǎn)生了耐藥性。

表1 糖類代謝結(jié)果

表2 藥物敏感性

4.2 鏈球菌是環(huán)境性病原微生物，它們常寄生在牛體及周圍環(huán)境中，因此搞好環(huán)境衛(wèi)生對于預(yù)防乳房炎極為重要，以下方法可供參考。一是要搞好周圍環(huán)境衛(wèi)生，牛舍、運動場要清潔、干燥，通風(fēng)換氣良好；要定期消毒，不積留糞尿；墊草要干、軟、清潔。二是要搞好牛體衛(wèi)生，經(jīng)常刷拭牛體，保持清潔。據(jù)報道，牛體、尾、后肢和乳頭細菌占全身的50%，因此要特別注意后肢、尾部和乳房的衛(wèi)生狀況。三是要盡量減少應(yīng)激反應(yīng)和外傷因素，增加營養(yǎng)，提高免疫力，防止其它疾病的繼發(fā)，還要規(guī)范擠奶操作。

［1］黃青云．畜牧微生物學(xué)．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005

［2］馬學(xué)恩．家畜病理學(xué)．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2007

［3］耿永鑫．獸醫(yī)臨床診斷學(xué)．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006