多酚對(duì)草魚生長(zhǎng)、肝脂及免疫功能的影響

馬貴華 曹雙俊 黃 亮

草魚(Ctenopharyngodon idellus)因其飼料利用率高、生長(zhǎng)迅速，已發(fā)展成為我國淡水養(yǎng)殖的當(dāng)家品種。尤其是近幾年飼料養(yǎng)魚的迅猛發(fā)展，現(xiàn)已迅速發(fā)展到池塘、水庫及湖泊等淡水養(yǎng)殖水域均主養(yǎng)草魚，網(wǎng)箱單養(yǎng)草魚也較為普遍。但由于高密度養(yǎng)殖[1]、水體環(huán)境日趨惡化和營(yíng)養(yǎng)成分的失衡等諸多因素，出現(xiàn)越來越多的以肝臟疾病為主要特征的草魚疾病，以及其機(jī)體免疫力下降而導(dǎo)致草魚病毒性出血病的高發(fā)病率和高死亡率等，給當(dāng)前我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了極大的危害[2-3]。因此，研究與開發(fā)對(duì)草魚具有護(hù)肝作用和提高免疫功能，且不影響其生長(zhǎng)的免疫增強(qiáng)劑已成為當(dāng)務(wù)之急。

α-苯基苯并吡喃(phenyl-benzopyran)是從一種分布廣泛的植物中提取的多酚類物質(zhì)，具有較強(qiáng)的生物學(xué)活性，無毒副作用、無殘留、不產(chǎn)生耐藥性[4]，為了驗(yàn)證其能否作為草魚的飼料添加劑開發(fā)利用而設(shè)計(jì)了本試驗(yàn),研究草魚攝食了添加α-苯基苯并吡喃的飼料后對(duì)其生長(zhǎng)性能、肝脂代謝及免疫功能的影響,旨在為該物質(zhì)作為免疫增強(qiáng)劑在草魚養(yǎng)殖業(yè)上應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用草魚來自德寧水產(chǎn)飼料有限公司順德市試驗(yàn)漁場(chǎng)，室內(nèi)試驗(yàn)在德寧水產(chǎn)飼料有限公司的水生生物研究中心進(jìn)行。α-苯基苯并吡喃由德寧水生生物研究中心提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)2006、2007年連續(xù)兩年在草魚養(yǎng)殖生產(chǎn)飼料中添加α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚護(hù)肝及提高其免疫力的效果,設(shè)計(jì)3個(gè)試驗(yàn)組,分別為含α-苯基苯并吡喃20 mg/kg(A組)、40 mg/kg(B組)2個(gè)劑量試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組(C組,不添加)，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾。1 500尾草魚種暫養(yǎng)一段時(shí)間后，從中選取體長(zhǎng)（12.5～13.5）cm的健康草魚450尾隨機(jī)分別飼養(yǎng)于15個(gè)300 L的圓形玻璃缸水族箱中。整個(gè)試驗(yàn)在室內(nèi)全自動(dòng)循環(huán)水系統(tǒng)中進(jìn)行，水溫控制在25～27℃。試驗(yàn)期的水質(zhì)指標(biāo)控制范圍為：溶氧大于 5.0 mg/l；酸堿度為 6.5～7.5；氨氮濃度低于 0.5 mg/l。每2周對(duì)養(yǎng)殖系統(tǒng)進(jìn)行清洗1次，試驗(yàn)共60 d。

1.3 飼養(yǎng)管理

對(duì)每組給定的飼料嚴(yán)格按最大攝食量投喂，投喂率為魚體重的2.5%～3.0%，每天投喂3次，分別為8：00、13：00、和18：00。每天精確記錄各組的飼料投喂量及各池魚的活動(dòng)情況、攝食情況、發(fā)病死亡情況等。每天清洗1次濾水棉墊，10～15 d換水1次等。

1.4 試驗(yàn)日糧

自配制加工基礎(chǔ)日糧，各試驗(yàn)組飼料是在基礎(chǔ)飼料上分別將 20 mg/kg(A 組)、40 mg/kg(B 組)α-苯基苯并吡喃均勻混合到配料中，經(jīng)逐級(jí)預(yù)混加工制成的顆粒飼料。各試驗(yàn)組飼料成分含量見表1。

1.5 樣品的采集及指標(biāo)測(cè)定

將魚停食1 d，使之排空糞便后開始試驗(yàn)，從每個(gè)水族箱中取魚10尾，稱重后擊打頭部致昏迷，立即解剖，先心臟采血，置離心管中靜置2 h后，離心10 min，分離血清；再取得肝臟和背部肌肉樣，分別稱其重量。所有樣品取得后立即置于-20℃冰箱中保存待測(cè)。

表1 基礎(chǔ)日糧配方組成（%）

從所取肌肉樣品，分別采用105℃常壓干燥法、凱氏定氮法、索氏抽提法及550℃灼燒法測(cè)定肌肉和肝臟的水分、粗蛋白、脂肪和灰分含量[5]。

1.6 養(yǎng)殖試驗(yàn)指標(biāo)

特定生長(zhǎng)率（%/d）=（lnW-lnWo）/d×100；

餌料系數(shù)=消耗的飼料量/魚體增重量；

肝體比=肝臟重/魚體重×100；

肥滿度=W/L3×100。

式中：W——試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體尾均重；

Wo——試驗(yàn)開始時(shí)魚體尾均重；

d——養(yǎng)殖試驗(yàn)天數(shù)；

L——試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體長(zhǎng)。

1.7 生理功能指標(biāo)及測(cè)定方法

溶菌酶活力測(cè)定采用冷凍干燥的溶壁微球菌測(cè)定方法[6]；超氧化物歧化酶活力測(cè)定采用鄰苯三酚自氧化方法[7]；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活力測(cè)定采用King氏法[8]測(cè)定。

1.8 數(shù)據(jù)處理

用 SAS（Release6.12）統(tǒng)計(jì)軟件 ANOVA、GLM 法進(jìn)行方差及協(xié)方差分析，Duncan's法檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較。表中結(jié)果表示為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚生長(zhǎng)的影響（見表2）

表2 α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響

從表2中可以看出，添加40 mg/kg(B組)α-苯基苯并吡喃的試驗(yàn)組的凈增重明顯優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），而且餌料系數(shù)最低，這說明在飼料中添加40 mg/kg α-苯基苯并吡喃對(duì)提高草魚的生長(zhǎng)性能具有一定的作用。

2.2 α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚品質(zhì)的影響比較

本試驗(yàn)測(cè)定了魚體營(yíng)養(yǎng)組成（包括水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分）、內(nèi)臟重占體重的百分比和肥滿度作為部分評(píng)價(jià)草魚魚體品質(zhì)的指標(biāo)（見表3）。

表3 α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚肌肉品質(zhì)的影響（%）

根據(jù)表3結(jié)果，對(duì)照組與試驗(yàn)組之間草魚水分、灰分含量、內(nèi)臟比差異不顯著，表明α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚水分、灰分含量和內(nèi)臟比無影響。從魚體蛋白含量看，添加α-苯基苯并吡喃的兩個(gè)試驗(yàn)組要高于對(duì)照組魚體蛋白含量，但差異不顯著。脂肪的數(shù)據(jù)顯示，隨著添加量增加，魚體脂肪含量呈下降趨勢(shì)。添加40 mg/kg(B組)α-苯基苯并吡喃的試驗(yàn)組肥滿度要顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

2.3 草魚血清功能指標(biāo)分析

草魚血清功能指標(biāo)見表4，試驗(yàn)B組草魚血清中ALT和AST顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，而血清中超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶（LSZ）的活力卻顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。表明α-苯基苯并吡喃可以通過提高草魚肝臟的解毒功能來提高魚體的免疫能力。

表4 α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚血清轉(zhuǎn)氨酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶的影響

2.4 α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚臟器指標(biāo)的影響（見表5）

表5 α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚肝臟的影響

從解剖中可以看出，對(duì)照組草魚的肝臟偏大，出現(xiàn)黃色脂肪沉積的現(xiàn)象，表5的數(shù)據(jù)也反映了這一情況，對(duì)照組與試驗(yàn)組相比，肝體比，肝脂明顯偏高，已出現(xiàn)脂肪肝癥狀，試驗(yàn)組各項(xiàng)數(shù)據(jù)明顯低于對(duì)照組，且隨α-苯基苯并吡喃添加量的增加，各項(xiàng)數(shù)據(jù)顯示下降趨勢(shì)。

在本次試驗(yàn)中，有意提高飼料中棉粕、菜粕的比例，兩者之和超過50%，添加少量豆粕、沒有添加魚粉等高質(zhì)量蛋白源。棉、菜粕用量過大，里面的有害物質(zhì)會(huì)對(duì)肝臟造成較大的毒副作用。魚類脂肪肝的形成原因很多，除了營(yíng)養(yǎng)不平衡外，因有毒、有害物質(zhì)造成脂肪肝的報(bào)道很多，可以認(rèn)為，飼料中棉、菜粕用量過大很可能會(huì)導(dǎo)致脂肪肝。若進(jìn)一步惡化，就會(huì)誘發(fā)肝膽綜合癥，而在飼料中添加一定量的α-苯基苯并吡喃，意在觀察可否顯著改善肝功能，可否預(yù)防脂肪肝的出現(xiàn)。

3 討論

在本試驗(yàn)中，添加量達(dá)到40 mg/kg α-苯基苯并吡喃可顯著提高試驗(yàn)組草魚的凈增重(P＜0.05)，可顯著提高草魚的肥滿度(P＜0.05)，并對(duì)草魚魚體品質(zhì)沒有造成影響。

如何評(píng)價(jià)養(yǎng)殖草魚的各項(xiàng)生理功能還是一個(gè)很值得研究的復(fù)雜課題，本試驗(yàn)僅選擇血清轉(zhuǎn)氨酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶這幾個(gè)常規(guī)指標(biāo)，希望能夠在一定程度上反映試驗(yàn)草魚的肝功能、免疫和防御能力，以便探討試驗(yàn)的飼料原料對(duì)草魚生理機(jī)能的影響。

轉(zhuǎn)氨酶是體內(nèi)催化轉(zhuǎn)氨基作用的酶，廣泛存在于機(jī)體組織。正常新陳代謝過程中，血清內(nèi)維持一定水平的轉(zhuǎn)氨酶活性。當(dāng)肝、腎、心等組織發(fā)生病變時(shí)，由于組織細(xì)胞腫脹、壞死會(huì)導(dǎo)致大量的轉(zhuǎn)氨酶釋放到血流中，從而引起血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性顯著升高，血清轉(zhuǎn)氨酶活力越高表明肝胰臟受損傷越嚴(yán)重。本試驗(yàn)檢測(cè)了這兩個(gè)指標(biāo)，結(jié)果顯示試驗(yàn)組的ALT和AST顯著低于對(duì)照組，表明α-苯基苯并吡喃對(duì)草魚肝臟有保護(hù)功能。

溶菌酶（LSZ）是破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的酶，其活力大小可以在一定程度上反映出魚體抵抗細(xì)菌侵襲的能力。超氧化物歧化酶（SOD）是機(jī)體超氧化自由基的清除劑，廣泛分布于細(xì)胞內(nèi)和各種體液間，能阻止并消除自由基的連鎖反應(yīng)，以保護(hù)機(jī)體免受損害，SOD活力的增加有助于提高魚體的自我保護(hù)能力。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組的SOD和LSZ活力均有所提高，添加40 mg/kg α-苯基苯并吡喃則可顯著提高草魚血清中ALT和AST的活力。

試驗(yàn)表明：α-苯基苯并吡喃可通過提高肝臟的解毒功能以保護(hù)肝臟來預(yù)防草魚肝膽綜合癥的出現(xiàn)、可提高草魚的免疫力以提高魚體對(duì)外界的防御能力，并且具有一定的促長(zhǎng)效果。

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