香果健消片的質(zhì)控方法研究Ⅱ：木香主要成分的鑒別和含量測定

申力文，李夸巧，孫艷芬，肖培云

（大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000）

香果健消片的質(zhì)控方法研究Ⅱ：木香主要成分的鑒別和含量測定

申力文，李夸巧，孫艷芬，肖培云*

（大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000）

目的：建立香果健消片中木香主要成分的鑒別及含量測定方法。方法：采用薄層色譜法鑒別木香；高效液相色譜法測定木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量。結(jié)果：薄層色譜法鑒別斑點(diǎn)明顯，木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯進(jìn)樣量在0.10～2.00μg范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。加樣回收率分別為99.3%（RSD=1.24%，n=6）和100.8%（RSD=1.67%，n=6）。結(jié)論：上述方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于木香的鑒別、木香中木香烴內(nèi)酯及去氫木香內(nèi)酯的含量測定。

香果健消片；薄層色譜法；高效液相色譜法；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯

香果健消片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-1585-93）》，由蜘蛛香、草果、木香等藥材制備而成，具有健胃消食之功效〔1〕。其中木香具有行氣止痛、健脾消食的作用?，F(xiàn)代研究表明木香的主要活性成分為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯〔2〕，應(yīng)為含木香制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)。為保證該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，對處方中木香進(jìn)行了薄層色譜法（TLC）鑒別，并采用高效液相色譜法（HPLC）對木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯進(jìn)行了定量研究。

1 儀器與試藥

1．1 儀器 高效液相色譜系統(tǒng)（美國Agilent 1200）；AL204-IC電子天平（梅特勒-特利多儀器有限公司）；薄層色譜成像儀（武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司）；超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 試藥 香果健消片（云南云河藥業(yè)有限公司，批號：081201、090603、090706、090802）；木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品（批號分別為111524-200804、111525-200706，由中國藥品生物制品檢定所提供），木香對照藥材（批號：120921-200506）；薄層層析硅膠G（青島海洋化工有限公司）；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑為分析純。

2 方法和結(jié)果

采用TLC進(jìn)行鑒別，HPLC進(jìn)行定量。具體方法如下。

2.1 木香鑒別

2.1.1 供試液的制備 取香果健消片20片，除去糖衣，研細(xì)，精密稱取2.5 g，加乙醚30 mL，攪勻，靜置10min，超聲處理30min，濾過，濾液置水浴上低溫?fù)]干，殘渣加乙酸乙酯1mL，使其溶解，作為供試品〔3〕。

2.1.2 對照藥材溶液的配制 精密稱定0.5 g木香藥材，加乙醚6mL，搖勻，靜置10min，超聲處理30min，過濾，濾液置水浴上低溫?fù)]干，殘渣加乙酸乙酯0.5mL使其溶解，即得對照藥材溶液。

2.1.3 對照品溶液的配制 分別取木香烴內(nèi)酯對照品與去氫木香內(nèi)酯對照品，精密稱取10.0mg，于10mL容量瓶中，加甲醇溶解、定容、搖勻，作為儲備液。精密移取上述溶液1mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容、搖勻，即得0.10mg/mL的混合對照品溶液。

2.1.4 陰性對照品溶液的制備 按處方制備缺木香的陰性對照品，再按“2.1.1”項制備，即得陰性對照品溶液。

2.1.5 薄層鑒別結(jié)果 用毛細(xì)管吸取供試品、對照藥材、木香烴內(nèi)酯對照品、去氫木香內(nèi)酯對照品、陰性對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（15∶1∶0.1）〔4〕為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液〔3-7〕，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。見圖1。

圖1 木香的TLC圖譜

2．2 木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agela Venusil XBP-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（70∶30）〔3，5，8-10〕；檢測波長為220 nm；柱溫為25 ℃〔3，5，9-10〕；流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣5 μL。

2.2.2 供試液的制備 取本品20片，去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.5 g粉末，精密稱定，精密加入甲醇20mL，稱定，25℃下超聲提取40min，放冷，補(bǔ)重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 取缺木香的陰性對照品0.5 g，按“2.2.2”項供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各5μL進(jìn)樣測定，結(jié)果供試品色譜中呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰，陰性對照品在與木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品相同的保留時間處未顯色譜峰，故認(rèn)為無干擾。見圖2-4。

圖2 對照品HPLC色譜圖

圖3 供試品溶液HPLC色譜圖

圖4 陰性對照品HPLC色譜圖

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密移取0.10 mg/mL對照品混合液1，2，5，10，12，15，20 μL，分別注入高效液相色譜儀，測定峰面積值。結(jié)果對照品峰面積Y與其進(jìn)樣量X（μg）之間呈良好的線性關(guān)系，木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的線性范圍均為0.1～2.0μg，回歸方程分別為

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密移取對照品混合液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測其峰面積，木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD分別為0.31%和0.24%，結(jié)果表明精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密移取同一供試品溶液，按上述色譜條件在0，3，5，18，20，24 h進(jìn)樣測定，得木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的RSD分別為2.01%和0.78%。結(jié)果表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號（批號：090603）樣品，按供試品溶液制備項下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測定，木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯平均含量分別為0.118 2mg/g和0.214 2mg/g，RSD分別為1.57%和0.85%。結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的香果健消片6份，按表1精密加入對照品溶液，按供試品溶液制備項操作，按上述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.10 樣品含量測定 取4個不同批號的樣品，按供試品溶液制備方法操作，按上述色譜條件測定并計算結(jié)果。見表2。

表2 木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測定（n=3）

3 討論

3.1 提取時間考察 本實(shí)驗(yàn)對提取時間進(jìn)行了考察，分別考察了20，30，40，50，60 min，結(jié)果表明40min即可提取完全，故選擇提取時間為40min。

3.2 TLC條件的選擇 在TLC實(shí)驗(yàn)中考察了環(huán)己烷-丙酮（10∶3）〔3〕、環(huán)己烷-丙酮-甲苯（10∶3∶1、10∶3∶2）、甲苯-乙酸乙酯-冰乙酸（10∶1∶0.1、12∶1∶0.1、14∶1∶0.1、15∶1∶0.1等）的展開效果，其中甲苯-乙酸乙酯-冰乙酸（15∶1∶0.1）分離效果最好，故選用該展開系統(tǒng)。

3.3 HPLC條件的選擇 試驗(yàn)中考察了甲醇-水（65∶35、70∶30、72∶28、75∶25等）的分離效果，結(jié)果表明甲醇-水（70∶30）的分離效果最佳；同時還考察了不同柱溫，以25℃最為適宜。

本試驗(yàn)采用TLC薄層色譜法對香果健消片中木香進(jìn)行了薄層鑒別，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明陰性對照液對供試液無干擾，專屬性強(qiáng)，色譜清晰，特征斑點(diǎn)分離良好，斑點(diǎn)無拖尾現(xiàn)象，可以作為該藥品定性鑒別的指標(biāo)。本試驗(yàn)建立了同時測定香果健消片中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法，方法可靠，專屬性強(qiáng)。

〔1〕國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1990：120.

〔2〕王永兵，王強(qiáng)，毛福林，等.木香的藥效學(xué)研究〔J〕.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2001，32（2）：146.

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〔4〕高詠莉.木香理氣片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究〔J〕.天津藥學(xué)，2007，19（4）：18-19.

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〔10〕王曄，高沂.八味三香散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別和含量測定方法的研究〔J〕.中國藥學(xué)，2007，42（3）：232-233.

（責(zé)任編輯 蔣 康）

The Quality ControlMethod of Xiangguojianxiao TabletsⅡ:Identifying and Determ ining the Main Com ponents of Costustroot in Xiangguojianxiao Tablets

SHEN Liwen，LIKuaqiao，SUN Yanfen,XIAO Peiyun*
（College of Pharmacy，Dali University ，Dali，Yunnan 671000,China）

Objective:To establish a method for identification of Costustroot and determination of costunolide and dehydrocostus lactone in Xiangguojianxiao tablets.Methods:Costustroot was identified by TLC;the contents of costunolide and dehydrocostus lactone were determined by HPLC.Results:The developed TLC spots were quite clear;the calibration curve of costunolide and dehydrocostus lactone were linear within 0.10-2.00μg.The average recoveries of costunolide and dehydrocostus lactone were 99.3%with RSD of 1.24%（n=6）and 100.8%with RSD of 1.67%（n=6）,respectively.Conclusion:The established methods are specific,reproducible and suitable for the identification of costustrootand determination of costunolide and dehycostus lactone.

Xiaoguojianxiao Tablets;TLC;HPLC;costunolide;dehydrocostus lactone

R944.4

B

1672-2345（2010）12-0007-03

大理學(xué)院大學(xué)生科研基金資助項目（2009DXSY01）

2010-06-13

申力文，主要從事藥物分析研究.

*通信作者：肖培云，副教授，電話：15808729786.