廣東部分地區(qū)豬場PRRS的血清學(xué)調(diào)查

臧瑩安,蔣天宇,楊展基,李春玲

(1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動物科學(xué)系,廣東廣州 510225;2.廣東梅州大浦縣畜牧局,廣東大浦 514200;3.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所,廣東廣州 510640)

廣東省是中國養(yǎng)豬大省,2006年廣東省生豬出欄量為3 662萬頭,其中3 000頭以下中小規(guī)模養(yǎng)殖占65%,萬頭以上豬場僅占12%。在我國養(yǎng)豬生產(chǎn)格局中,大中型豬場不斷增加,小型豬場不斷減少。但在相當長的時間內(nèi),中小規(guī)模養(yǎng)殖方式仍將延續(xù),這是我國和廣東省養(yǎng)豬生產(chǎn)的基本特點[1]。近年來,豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)成為嚴重危害廣東省中小規(guī)模豬場的重要傳染病,給廣大養(yǎng)豬戶帶來了巨大的經(jīng)濟損失,大大地挫傷了他們養(yǎng)豬的積極性[2-4]。本次調(diào)查采用酶聯(lián)免疫吸附試驗的方法[5-7]檢測茂名、惠州、東莞、四會、鶴山5個地區(qū)中小規(guī)模規(guī)模化養(yǎng)豬場PRRS的血清抗體水平,旨在了解廣東省部分地區(qū)中小規(guī)模豬場豬群中PRRSV感染情況及疫苗免疫狀況,為中小規(guī)模養(yǎng)豬場PRRS的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢血清 2008年7月至2009年1月,在茂名、惠州、東莞、四會、鶴山 5個地區(qū),通過對中小規(guī)模豬場各個階段豬群現(xiàn)場隨機或豬只死亡后2 h內(nèi)采集送樣的方式收集豬的血清。對PRR疫苗免疫豬場,豬群首免后1個月采集血樣。從各類型豬場共采集血清樣品866份。其中免疫過PRR疫苗的豬場血清547份,未免疫過的豬場血清319份(具體參見結(jié)果中各表)。

1.1.2 試劑 豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體檢測試劑盒(北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)),包括已包被好抗原的96孔酶聯(lián)反應(yīng)板,標準陰、陽性血清,HRPO標記抗 PRV gpI抗體,TMB底物溶液,終止液,樣品稀釋液,10倍濃縮洗滌液等;蒸餾水。

1.1.3 儀器 酶標檢測儀(美國寶特儀器有限公司 ,ELx800),洗滌器,50 μ L,100 μ L 微量移液器或連續(xù)移液器,一次性移液器吸頭,稀釋樣品的u型96孔稀釋板。

1.2 方法

按試劑盒說明書上的方法進行。用樣品稀釋液40倍稀釋被測樣品,取出抗原包被板,在做好標記的PRRS孔和NHC孔內(nèi)各自加入100 μ L沒有稀釋的陰性對照、100 μ L沒有稀釋的陽性對照和100 μ L已稀釋好的樣本。室溫下孵育 30 min。然后進行洗滌、酶標反應(yīng)、顯色反應(yīng)和終止反應(yīng),最后測量并記錄被檢血清和陰陽對照血清在650nm的吸光度 A(650)。計算S/P值(樣品/陽性對照比率)(具體方法參見試劑盒說明書)。

PRRS抗體的有無通過計算每個樣品陽性對照(S/P)的比值判定。如果S/P＜0.4,樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陰性;如果S/P≥0.4,樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陽性。

2 結(jié)果

2.1 PRRS未免疫接種豬場調(diào)查結(jié)果

未免疫豬場319份血清樣品檢測結(jié)果表明,茂名、惠州、東莞、四會、鶴山 5個地區(qū)的豬場均有PRRSV感染(表1)。豬群的抗體陽性率在57.14%～77.08%之間,平均陽性率為66.77%,在送檢的18個未免疫豬場都曾經(jīng)發(fā)生過PRRSV的野毒感染,豬場陽性率達到100%。這說明,PRRSV普遍存在于廣東這些地區(qū),如果豬場的豬只未進行免疫,都極有可能遭到PRRSV野毒感染。

表1 廣東5個地區(qū)未接種PRRS疫苗免疫豬場的PRRSV抗體檢測結(jié)果Table 1 Antibody positive rate of pig farms not vaccinated with PRRS vaccine in 5 rigions

2.2 PRRS免疫接種豬場調(diào)查結(jié)果

547份來自PRRS免疫接種豬場的血清樣品檢測結(jié)果表明:茂名、惠州、東莞、四會、鶴山 5個地區(qū)的22個進行過PRRS疫苗免疫豬場的PRRSV抗體陽性率在60.94%～93.14%之間(表2)。

表2 廣東5個地區(qū)已接種PRRS疫苗免疫接種豬場的PRRSV抗體檢測結(jié)果Table 2 Antibody positive rate of pig farms vaccinated with P RRS vaccine in 5 rigions

從表2可以看出,進行過PRRS疫苗免疫接種過的豬場,血清抗體陽性率處于較為理想的水平,只有四會地區(qū)的豬場血清抗體陽性率低于75%(為60.94%),其他4個地區(qū)的豬場抗體水平都較高。

2.3 未免疫接種PRRSV疫苗豬場不同日齡豬感染情況調(diào)查

非免疫豬場319份不同日齡的豬血清抗體檢測結(jié)果表明,生產(chǎn)母豬的PRRSV抗體陽性率高于仔豬,后備母豬的抗體陽性率高于生產(chǎn)母豬。同時發(fā)現(xiàn)仔豬中,3～4周齡豬的PRRSV抗體陽性率最低(45.59%),但隨年齡增長逐漸升高。

生產(chǎn)母豬平均S/P值顯著高于仔豬(P＜0.01),后備母豬的平均S/P值略高于生產(chǎn)母豬,但差異不顯著。在仔豬中,3周齡～4周齡豬的抗體S/P值最低,隨著年齡增長而逐漸升高,到16周齡的S/P值最高,隨后又降到和后備母豬差不多的水平(表3)。

2.4 免疫接種豬群不同日齡豬的抗體檢測情況調(diào)查

547份來自PRRS疫苗免疫豬場的血清抗體檢測結(jié)果表明,生產(chǎn)母豬的PRRSV抗體陽性率高于仔豬,后備母豬的陽性率高于生產(chǎn)母豬。同時發(fā)現(xiàn)仔豬中,3周齡～4周齡豬的PRRSV抗體陽性率最低(72.34%),16周齡的陽性率最高(91.18%)?？贵wS/P值顯示,仔豬平均S/P值顯著高于生產(chǎn)母豬(P＜0.01),后備母豬平均S/P值略高于仔豬,但差異不顯著。同時發(fā)現(xiàn)仔豬中,3周齡～4周齡豬的PRRSV抗體S/P值最低,20周齡的S/P值最高(表4)。

表3 未接種PRRSV疫苗免疫豬場不同年齡豬感染情況Table 3 Antibody positive rate of different day-age pigs not vaccinated with PRRS vaccine

表4 PRRSV疫苗免疫接種豬場不同年齡豬感染情況Table 4 Antibody positive rate of different pigs vaccinated with PRRS vaccine

3 討論

本調(diào)查通過對866份來自PRRS疫苗免疫豬場和非免疫豬場的血清樣品進行PRRSV特異性抗體檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)東莞、廣州、佛山、四會、鶴山地區(qū)的18個未免疫接種PRRS疫苗的豬場豬只存在較高水平的PRRSV感染率(57.14%～77.08%);而22個免疫接種過PRRS疫苗的豬場血清抗體陽性率為60.94%～93.14%,血清抗體陽性率平均值比未免疫豬場高,各豬場間卻存在顯著差異,且大多顯著高于未免疫豬場。這可能和各豬場的綜合防疫措施的差異有關(guān)。比較免疫和未免疫豬場相同日齡的豬只,更可以發(fā)現(xiàn)這個規(guī)律,免疫豬場血清抗體水平顯著高于未免疫豬場。提示在保育期間免疫豬群遭遇野毒感染將提高其抗體的S/P值。未免疫豬場的野毒感染率達100%,說明PRRS野毒感染在廣東地區(qū)的普遍存在。從豬場不同日齡豬的調(diào)查結(jié)果來看,不同日齡的豬群血清陽性率不一樣,3周齡～4周齡最低,然后隨年齡增長逐漸增高,接著在下降到后備母豬相當?shù)乃?。曾有報?仔豬4日齡就能檢測到母源抗體,并在3周齡后消失。在實驗室感染條件下用ELISA方法檢測到IgG的開始時間為接種后9 d～12 d。3周齡后ELISA抗體水平又逐漸升高可能與引進后備母豬時把PRRSV帶到豬群或豬場中其他帶毒豬循環(huán)傳播有關(guān)。3周齡～4周齡豬不同亞群狀態(tài)是由不同亞群母豬造成,母豬感染PRRSV會直接影響到仔豬感染[8-10],因此,建議母豬群免疫。

PRRSV的高陽性率和近年來養(yǎng)豬業(yè)的蓬勃發(fā)展密不可分[12]。省際間乃至國內(nèi)外豬只及相關(guān)產(chǎn)品交流日益頻繁,而相應(yīng)的管理、免疫措施卻不完善,由外地引進或購買豬只不隔離免疫直接混群,疫苗的選擇、免疫程序不合理,不嚴格執(zhí)行全進全出的管理模式,導(dǎo)致豬場暴發(fā)PRRSV的情況屢見不鮮[13]。尤其是廣東地區(qū)頗具數(shù)量的中小規(guī)模豬場,由于技術(shù)管理及資金等原因,防治措施的不力,導(dǎo)致近年來廣東地區(qū)的PRRS成為制約本地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要疾病。只有通過豬群的綜合系統(tǒng)檢測,防控技術(shù)或工程,以及逐步凈化或消滅一些重要的豬病才能有效地控制豬偽狂犬病,也就是說要建立與國際接軌的中小規(guī)模豬健康養(yǎng)殖生物技術(shù)體系[14-15]。

[1]臧瑩安,丁發(fā)源,陳 莊.我國中小規(guī)模豬場健康養(yǎng)殖體系建設(shè)[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊,2007(12):18-20.

[2]喬宏興,王川慶,方先珍,等.豬3種繁殖障礙疾病的血清學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)雜志,2004,20(6):55-57.

[3]徐引弟,宋念華,張厚芝,等.豬生殖和呼吸系統(tǒng)綜合征的血清學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)科技,2003,33(1):25-27.

[4]王東東,鄧雨修,招麗嬋.我國豬繁殖與呼吸綜合征流行概況[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2009,30(5):18-20.

[5]Rossi S,Artois M,Pontier D,et al.Long-term monitoring of classical swine fever in wild boar(Sus scrofa sp.)using serological data[J].Vet Res,2005,36(1):27-42.

[6]Tian K G,Yu X L,Zhao T Z,et al.Emergence of fatal P RRSV variants:unparalleled outbreaks of atypical P RRS in China and molecular dissection of the unique hallmark[J].PLoS ONE,2007,2(6):1-10.

[7]仝利劍,張社民,高英杰,等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒實驗室檢測技術(shù)研究進展[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(5):138-141.

[8]羅宗剛,王紅寧,黃 勇,等.規(guī)?；i場繁殖障礙性疾病的血清學(xué)調(diào)查[J].養(yǎng)豬,2006(2):33-36.

[9]李美花,童光志,楊先進,等.規(guī)?；i場各豬群中豬繁殖與呼吸綜合證的血清學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43(1):25-26.

[10]楊宗照,蔣建一,母安雄,等.對杭州地區(qū)4種豬病的血清學(xué)調(diào)查分析[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2005(3):227-229.

[11]田生花,夏玉芬,孫 瑛.豬繁殖與呼吸綜合征的血清學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)雜志,2006,42,(1):36-39.

[12]鄭文成,郭永祥,劉道新.豬繁殖與呼吸綜合征疫苗免疫研究概況[J].動物醫(yī)學(xué)進展2008,29(10):100-102.

[13]何世成,范仲鑫,劉道新.規(guī)?；i場豬瘟豬繁殖與呼吸綜合征血清學(xué)調(diào)查與分析[J].中國獸醫(yī)雜志,2009,45(4):41-43.

[14]楊漢春,管山紅,尹曉敏,等.豬繁殖與呼吸綜合癥病毒的分離與鑒定[J].中國獸醫(yī)雜志,1997,23(11):3-5.

[15]鄭 杰,寧宜寶,趙啟祖,等.高致病性變異株引起的豬繁殖與呼吸綜合征在我國的發(fā)生與流行[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43(6):48-50.