上海地區(qū)多種動(dòng)物萊姆病的血清學(xué)調(diào)查*

劉佩紅,徐 鋒,沈莉萍,葛菲菲,王 建

(上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,上海 201103)

萊姆病(Lyme disease,LD)是由伯氏疏螺旋體引起的一種蜱傳自然疫源性人畜共患傳染病。我國于1986年首次在黑龍江省海林縣林區(qū)發(fā)現(xiàn)該病[1]。血清流行病學(xué)調(diào)查表明,我國至少有27個(gè)省(直轄市、自治區(qū))的人群和動(dòng)物群中存在伯氏疏螺旋體感染,病原學(xué)證實(shí)其中18個(gè)省(直轄市、自治區(qū))有萊姆病自然疫源地的存在,9種蜱攜帶伯氏疏螺旋體[2-3]。很多與人類關(guān)系密切的動(dòng)物均有發(fā)生此病的報(bào)道,已證實(shí)約有40多種哺乳動(dòng)物和鳥類為伯氏疏螺旋體的宿主[4-5]。為初步了解上海地區(qū)動(dòng)物群中伯氏疏螺旋體的感染狀況,探討動(dòng)物在萊姆病流行環(huán)節(jié)中的作用,本研究針對與人類關(guān)系密切的豬、牛、羊、馬、犬、雞、鴨和野鳥等多種動(dòng)物,共 870份樣品進(jìn)行了萊姆病血清學(xué)檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源與處理 豬血清采自3個(gè)區(qū)的規(guī)模豬場,每場15份,共45份;牛血清采自3個(gè)區(qū)的規(guī)模牛場,每場 15份,共45份;羊血清采自3個(gè)區(qū)(縣)的散養(yǎng)戶,每區(qū)20份,共 60份;馬血清采自4個(gè)區(qū)的養(yǎng)馬場或游樂園,其中養(yǎng)馬場41份,游樂園13份,共54份;雞血清采自4個(gè)區(qū)的規(guī)模場和散養(yǎng)戶,其中規(guī)模場58份,散養(yǎng)戶 44份,共102份;鴨血清采自4個(gè)區(qū)的7個(gè)專業(yè)養(yǎng)殖戶,共86份;野鳥血清共37份,其中動(dòng)物園火烈鳥3份、野鳥棲息地野鴨24份、野鳥棲息地不知名野鳥12份;犬血清共374份,其中家養(yǎng)健康寵物犬292份、門診發(fā)病寵物犬24份、養(yǎng)殖場犬 45份、留驗(yàn)所犬 12份。血液自然凝固析出血清后,離心取血清備用。

1.1.2 主要試劑 VIDAS Lyme IgG和IgM檢測試劑盒(LYT)由法國梅里埃公司生產(chǎn),批號090325-0。

1.2 方法

1.2.1 原理 試劑盒與法國梅里埃公司生產(chǎn)的全自動(dòng)定量免疫熒光酶標(biāo)儀(VIDAS)一起使用,采用酶聯(lián)熒光測定技術(shù)(ELFA)定性檢測血清中萊姆病感染總抗體IgG和IgM的量。

1.2.2 步驟 從冰箱中取出試劑盒并使其放置至室溫,至少30 min;將 LYT試劑條和固相包被針(SPR)放置于VIDAS載物盤上,在VIDAS電腦上按使用手冊輸入相關(guān)信息;將標(biāo)準(zhǔn)品、對照和樣品用渦旋混合器完全混勻,分別取100 μ L至樣品孔,插入SPR和試劑條至屏幕指示位置,按使用手冊開始操作,儀器自動(dòng)控制所有操作步驟,大約35 min內(nèi)可得到結(jié)果;操作結(jié)束后,將使用過的SPR和試劑條高壓滅菌處理。

2 結(jié)果

豬、牛、羊、雞、鴨和野鳥中均未檢測到萊姆病感染抗體。54份馬血清中檢測到LD抗體陽性10份,陽性率18.5%,其中2個(gè)養(yǎng)馬場均有陽性檢出,陽性率17.07%;1個(gè)游樂場為陰性,1個(gè)游樂場陽性檢出率25%;374份犬血清中檢測到LD抗體陽性46份,陽性率12.3%,其中292份家養(yǎng)健康寵物犬的陽性率為9.93%;24份門診發(fā)病寵物犬陽性率為25%,45份養(yǎng)殖場犬陽性率為8.89%,12份留驗(yàn)所犬陽性率為58.33%(表1)。

表1 不同動(dòng)物萊姆病血清學(xué)檢測結(jié)果Table 1 The serologic results of Lyme disease from different animal species

3 討論

自1975年Streere發(fā)現(xiàn)萊姆病,1982年Burgdorferi等從已知萊姆病流行區(qū)采集的硬蜱中分離到伯氏疏螺旋體以來,目前已知該病分布于五大洲30多個(gè)國家,估計(jì)年發(fā)病30余萬人[6]。在美國尤為嚴(yán)重,并有第二“艾滋病”之稱,目前仍有不斷增多的趨勢。1992年,世界衛(wèi)生組織(WHO)將此病列為重點(diǎn)防治研究對象[7-8]。我國于1986年首次在黑龍江海林縣林區(qū)發(fā)現(xiàn)該病,到目前已有20多個(gè)省(直轄市、自治區(qū))發(fā)現(xiàn)有此病的分布及報(bào)告,其危害已日益受到人們的關(guān)注。

蜱是萊姆病的重要傳播媒介,我國地跨古北界和東洋界兩大區(qū)系,分布的蜱種較多,已從9種蜱中分離到萊姆病病原體,但目前能夠肯定為媒介的只有全溝硬蜱。我國全溝硬蜱的宿主動(dòng)物范圍廣泛,成蜱寄生于大中型家畜及野生動(dòng)物,包括偶蹄類、食肉類、嚙齒類。幼蟲和若蜱寄生于小型哺乳類和鳥類[9]。萬康林等對我國20個(gè)省(直轄市、自治區(qū))的萊姆病調(diào)查結(jié)果表明,犬的感染率在38%～60%,牛在18%～32%,羊在17%～61%[10]。河北承德地區(qū)牛、羊的感染率分別為23.3%和30%,是承德地區(qū)萊姆病的重要貯存宿主[11]。天津地區(qū)牛、羊、犬的感染率分別為8.14%、8.80%和5.43%[12]。

本研究對上海地區(qū)與人類關(guān)系較密切的豬、牛、羊、馬、犬、雞、鴨和野鳥等多種動(dòng)物進(jìn)行了萊姆病血清學(xué)檢測,結(jié)果表明,上海地區(qū)動(dòng)物群中伯氏疏螺旋體的感染率相對較低,牛、羊、豬、雞、鴨和野鳥中均未檢出萊姆病抗體。牛、羊的感染情況與國內(nèi)其他省市調(diào)查結(jié)果有所不同,豬、雞、鴨和野鳥血清流行病學(xué)調(diào)查方面的報(bào)道較少。但國外已從畫眉等野鳥體內(nèi)分離到病原體[13],且由于野鳥可以長距離飛行傳播萊姆病而備受關(guān)注,上海地處三大候鳥遷徙路線之一,野鳥在疫病傳播中的作用不容忽視。本次研究因樣品采集所限,野鳥的樣品相對較少,在下一步的研究中還將擴(kuò)大覆蓋面、增加樣本量,以更全面地了解野鳥的感染狀況。

馬對萊姆病有一定的感染性,感染率為18.5%。上海地區(qū)馬匹養(yǎng)殖量很少,但在本次調(diào)查的一個(gè)游樂場中,為數(shù)不多的馬匹中有25%的感染率,因游樂場馬匹與游人接觸密切,應(yīng)引起重視。

犬的感染率為12.3%,其中留驗(yàn)所犬感染率最高,為58.3%。留驗(yàn)所收養(yǎng)了大量流浪犬和非法養(yǎng)殖犬,可能由于飼養(yǎng)密度、飼養(yǎng)環(huán)境等因素的影響,造成了該病的傳播和感染;家養(yǎng)健康寵物犬和養(yǎng)殖場犬中也檢出了較高的感染率,提示在萊姆病的傳播中可能起重要作用。國內(nèi)外大量研究都已證實(shí),犬是萊姆病的重要宿主,一方面犬作為寵物與人類關(guān)系密切,另一方面,萊姆病抗體在犬體內(nèi)持續(xù)時(shí)間較短,而人和其他動(dòng)物血清抗體陽性可持續(xù)幾年,通過監(jiān)視犬血清抗體陽性率可以很好地反映當(dāng)前特定地區(qū)萊姆病的實(shí)際發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)率[14-15],許多研究者提議將犬作為萊姆病潛在區(qū)探測發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的“哨兵動(dòng)物”。因此,對犬的監(jiān)控是今后工作的重點(diǎn)。

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