四種抗菌藥物對鯽魚苗的急性毒性試驗(yàn)

劉曉強(qiáng),劉海俠,梁 拓,梁欣欣

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西楊陵 712100;2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,陜西楊陵 712100)

鯽魚(Carassius auratus)俗稱鯽瓜子、喜頭、鮒魚、寒鮒等,隸屬于鯉形目(Cyprininae)、鯉科(Cyprinidae)、鯉亞科(Cyprinidae)、鯽屬 (Carassius),是我國分布廣泛的優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟(jì)魚類之一。鯽魚肉質(zhì)細(xì)嫩、肉味甜美、價(jià)格低廉、營養(yǎng)價(jià)值很高,深受廣大人民的喜愛[1]。鯽魚性味甘、平、溫,入胃、腎,具有和中補(bǔ)虛、除濕利水、補(bǔ)虛贏、溫胃進(jìn)食、補(bǔ)中生氣之功效,藥用價(jià)值很高。鯽魚分布很廣,除西部高原地區(qū)外,廣泛分布于全國各地。鯽魚的適應(yīng)性非常強(qiáng),不論是深水或淺水、流水或靜水、高溫水(32℃)或低溫水(0℃)均能生存。即使在pH為9的強(qiáng)堿性水域,鹽度高達(dá)4.5%的達(dá)里湖,仍然能生長繁殖。

長期以來,在水產(chǎn)養(yǎng)殖中,魚類作為數(shù)量和種類最為龐大的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物,不可避免的在養(yǎng)殖過程中受到各種致病菌的侵襲。為此,人們采用各種抗菌藥物抑制病菌對水產(chǎn)生產(chǎn)的影響,其中,甲砜霉素、痢菌凈、培氟沙星和氟苯尼考屬于常見藥物。但這4種藥物用于魚病治療的有效劑量和魚類的安全性問題尚不清楚,因而往往在使用時(shí)感到難以掌握。為此,進(jìn)行了甲砜霉素、痢菌凈、培氟沙星和氟苯尼考對鯽魚苗的急性毒性試驗(yàn),以期為鯽魚的健康養(yǎng)殖和病害防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用魚 試驗(yàn)用鯽魚苗購自陜西省寶雞市某漁場,平均體長2.4 cm±0.2 cm,體重4 g±0.2 g。試驗(yàn)前先在室內(nèi)常規(guī)飼喂1周,然后挑選大小基本一致,體表完整,健康活潑、無病無傷的個(gè)體用于試驗(yàn)。在整個(gè)試驗(yàn)期間不投餌。

1.1.2 試驗(yàn)藥物 痢菌凈,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院中獸醫(yī)研究所藥廠,含量 98.9%,批號:20051014;甲磺酸培氟沙星,新昌縣永興化工有限公司,含量99.7%,批號:20050302;甲砜霉素,浙江海翔藥業(yè)股份有限公司,含量 99.45%,批號:P-047-2005031;氟苯尼考,西安漢寶公司,含量 99.7%,批號:20060812。試驗(yàn)前用適當(dāng)溶劑將各試驗(yàn)藥物配成一定濃度的母液,正式試驗(yàn)時(shí)按適當(dāng)比例稀釋為所需濃度,將魚苗從低濃度向高濃度逐漸放入。

1.1.3 試驗(yàn)條件 試驗(yàn)期間水溫為22℃～25℃,預(yù)試驗(yàn)及正式試驗(yàn)用水為曝曬3 d以上的自來水,pH為 7.36,溶解氧為 5.83 mg/L,硬度為6.62 mmol/L,試驗(yàn)容器為容積約5 L的塑料盆,每盆加水3 L,試驗(yàn)期間不投餌,不充氣。

1.2 方法

為了確定藥物濃度的大概范圍,正式試驗(yàn)前先進(jìn)行24 h的預(yù)試驗(yàn),確定0～100%死亡的藥物濃度范圍[2-4]。正式試驗(yàn)按照改良寇氏法進(jìn)行,以預(yù)試驗(yàn)所得全死濃度和全不死濃度為基礎(chǔ),按照等對數(shù)間距法選擇一定的濃度梯度作正式急性毒性實(shí)驗(yàn)。分別設(shè)置5個(gè)質(zhì)量濃度梯度,同時(shí)設(shè)1個(gè)對照組及3個(gè)平行組,數(shù)據(jù)取平均值(見表1)。試驗(yàn)開始后連續(xù)觀察中毒癥狀、死亡時(shí)間、數(shù)量,并及時(shí)用吸管撈出死魚,記錄24、48、96 h各濃度魚苗的存活和死亡情況。試驗(yàn)期間不投餌,每24 h更換試驗(yàn)液1次,換水量100%,以使實(shí)驗(yàn)期間藥物的濃度盡量保持一致。試驗(yàn)對死魚的判斷標(biāo)準(zhǔn)為:以呼吸停止及對外界刺激無反應(yīng)作為死亡的判斷依據(jù),即當(dāng)試驗(yàn)魚中毒后鰓蓋完全停止活動(dòng),用玻璃棒輕輕刺激魚體5 min無反應(yīng),即確定為死亡[5-10]。

根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果,采用改良寇氏法計(jì)算得出氟苯尼考、培氟沙星、甲砜霉素、痢菌凈對鯽魚在24 h、48 h、96 h接觸時(shí)間內(nèi)的半數(shù)致死濃度(LC50)和安全濃度(SC)。

LC50的計(jì)算按綜合計(jì)算法公式計(jì)算

式中xm為最大死亡率組劑量對數(shù);d為組距(相鄰兩組劑量比值的對數(shù));p為各組死亡率,∑P為各組死亡率總和。

安全濃度估算公式[5-6]:SC=48 h LC50×0.3/(24 h LC50/48 h LC50)2mg/L

表1 試驗(yàn)藥物濃度Table 1 The concentrations of experimental drugs

2 結(jié)果

2.1 培氟沙星對鯽魚苗的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

由表達(dá)式可知,培氟沙星對鯽魚毒性相對較小。當(dāng)培氟沙星濃度為2 499.87 mg/L和2 200.21 mg/L時(shí),魚的游動(dòng)稍顯遲緩,并且隨著時(shí)間的延長這種情況加劇,2 499.87 mg/L濃度組5 h時(shí)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,14 h時(shí)死亡達(dá)到50%,21 h時(shí)全部死亡。2 200.21 mg/L濃度組24 h死亡率為80%,48 h的死亡率為100%,以后再無死亡。1 936.46 mg/L濃度組24 h死亡率為50%,48 h的死亡率為60%,以后再無死亡。1 704.33 mg/L濃度組和1 500.00 mg/L濃度組魚苗的活動(dòng)狀況與對照組基本相似,死亡率較低(表2)。

表2 培氟沙星對鯽魚苗的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Acute toxicity experimental results of pefloxacin to Carassius auratus fries

2.2 氟苯尼考對鯽魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

氟苯尼考對鯽魚的急性試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可知,當(dāng)氟苯尼考的濃度為1 898.11 mg/L時(shí),鯽魚苗表現(xiàn)不安,警覺,游動(dòng)緩慢,偶爾有浮頭、貼壁現(xiàn)象,4.5 h時(shí)出現(xiàn)死亡,19.5 h時(shí)死亡率達(dá)50%,23 h時(shí)全部死亡。1 528.99 mg/L濃度組24 h死亡率為80%,48 h的死亡率為 90%,以后再無死亡。1 232.47、993.13 、800.00 mg/L 3 個(gè)濃度組死亡率均在50%以內(nèi)。

表3 氟苯尼考對鯽魚苗的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Acute toxicity experimental results of florfenicol to Carassius auratus fries

2.3 甲砜霉素對鯽魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

甲硯霉素對鯽魚的急性毒性結(jié)果見表4。從試驗(yàn)結(jié)果來看,使用甲砜霉素和氟苯尼考后從高濃度到低濃度魚的表現(xiàn)相似,只是3個(gè)較高濃度組浮頭現(xiàn)象相對嚴(yán)重。

另外,由表3和表4可知,氟苯尼考和甲砜霉素對鯽魚苗的半致死質(zhì)量濃度48 h后處于穩(wěn)定值,即48 h后存活的魚很少再隨時(shí)間的延長而出現(xiàn)新的死亡。說明鯽魚苗對漂白粉的適應(yīng)性和耐受性較強(qiáng)且毒性積累較小。

表4 甲砜霉素對鯽魚苗的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果T able 4 Acute toxicity experimental results of thiamphenicol to Carassius auratus fries

2.4 痢菌凈對鯽魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

由表5可知,鯽魚苗對痢菌凈較為敏感,只有125.00 mg/L濃度組的魚苗活動(dòng)相對正常,其他濃度組的鯽魚苗均出現(xiàn)浮頭,興奮不安、驚厥,魚體彎曲等神經(jīng)癥狀,且隨濃度的增加而逐漸嚴(yán)重。在短時(shí)間內(nèi)(24 h)死亡率較高,說明痢菌凈在短時(shí)間對鯽魚苗的毒性較大。同時(shí)也發(fā)現(xiàn),鯽魚苗在高濃度組中即使未死亡,但也出現(xiàn)游動(dòng)緩慢、翻肚倒掛等現(xiàn)象,說明痢菌凈的毒性較大。

表5 痢菌凈對鯽魚苗的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Table 5 Acute toxicity ex perimental results of equindox toCarassius auratusfries

2.5 4種抗菌藥物對鯽魚的毒性試驗(yàn)結(jié)果分析

由表6可知,鯽魚苗對痢菌凈最為敏感,其在24、48、96 h的半數(shù)致死濃度與其他3種藥物的相應(yīng)半數(shù)致死濃度均存在極顯著差異(P＜0.01)。甲砜霉素與氟苯尼考在不同時(shí)間的相應(yīng)半數(shù)致死濃度差異不顯著(P＞0.05),這可能是由于二者均屬于氯霉素類藥物,結(jié)構(gòu)及抗菌機(jī)理等相似。培氟沙星與甲砜霉素和氟苯尼考之間的半數(shù)致死濃度存在顯著差異(P＜0.05)。根據(jù)測定的結(jié)果,參照魚類急性毒性試驗(yàn)毒性分級標(biāo)準(zhǔn)可以判定,甲砜霉素、氟苯尼考、培氟沙星對魚類均屬于低毒化合物,培氟沙星的毒性最小,而痢菌凈屬于中等毒性,安全范圍較小,所以在應(yīng)用時(shí)應(yīng)予以足夠重視。

表6 各種藥物的半致死濃度和安全濃度Table 6 The half lethal concentrations and safe concentrations of four drugs

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明,所選擇的培氟沙星、氟苯尼考、甲砜霉素和痢菌凈均對鯽魚有一定的致死性,且致死率和濃度及接觸時(shí)間呈一定相關(guān)性,隨著濃度的增加及處理時(shí)間的延長,鯽魚的死亡率均呈上升趨勢,只是在48 h后除痢菌凈外,其余3種藥物的死亡率減少或不死亡。而痢菌凈對鯽魚的毒性較大,短時(shí)間(24 h)死亡率較高,且與接觸時(shí)間呈正相關(guān)。

3.1 培氟沙星對鯽魚苗的毒性

培氟沙星屬于第3代喹諾酮類藥物,是一種新的甲-4-哌嗪喹諾酮類衍生物,具有廣譜、高效、低毒的特點(diǎn),吸收快、生物利用度好、組織藥物濃度高、體內(nèi)分布廣、維持時(shí)間長,且其抗菌機(jī)理獨(dú)特,不易產(chǎn)生耐藥性。李軍等[11]報(bào)道培氟沙星對熒光假單胞菌和腸型點(diǎn)狀產(chǎn)氣單胞菌的MIC為1.25 mg/L。試驗(yàn)結(jié)果表明,4種抗菌藥物中培氟沙星對鯽魚苗的毒性最小。

3.2 氟苯尼考和甲砜霉素對鯽魚苗的毒性

氟苯尼考和甲砜霉素都屬于氯霉素的同類物,都具有廣譜抗菌作用,且都克服了氯霉素的一些不足,在臨床上使用廣泛。特別是氟苯尼考作為一種動(dòng)物專用抗生素,近年在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用越來越廣泛。吳萬紅[12]報(bào)道其在治療虹鱒魚體表感染時(shí)僅用4 mg/L～8 mg/L即可獲得滿意效果。而本試驗(yàn)得到的其安全濃度是304.13 mg/L,因此,其在水產(chǎn)養(yǎng)殖當(dāng)中可安全使用。

3.3 痢菌凈對鯽魚苗的毒性

痢菌凈又名乙酰甲喹,是一種廣譜抗菌藥,有報(bào)道[13]其可用于治療魚類細(xì)菌性腸炎、赤皮病、斑點(diǎn)叉尾鮰腸型敗血癥等。但應(yīng)注意痢菌凈具有中等明顯蓄積毒性,容易蓄積中毒。這一點(diǎn)也通過試驗(yàn)得到了證實(shí),痢菌凈對鯽魚育苗的半數(shù)致死濃度與其他幾種藥物的半數(shù)致死濃度差異極顯著,在應(yīng)用時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎。

鯽魚對這4種抗菌藥物的敏感性依次為痢菌凈＞甲砜霉素＞氟苯尼考＞培氟沙星。

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