HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地黃連飲片中生物堿的含量

羅文匯 李養(yǎng)學(xué) 胥愛(ài)麗 孫冬梅

廣東省中醫(yī)研究所（510095）

黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Fanch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖。具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效，用于濕熱痞滿，嘔吐吞酸，瀉痢，黃疸，高熱神昏，心火亢盛，心煩不寐，心悸不寧，血熱吐衄，目赤，牙痛，消渴，癰腫疔瘡；外治濕疹，濕瘡，耳道流膿。黃連有效成分為多種生物堿[1]。本文采用高效液相色譜法以鹽酸小檗堿為對(duì)照，分別計(jì)算表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿的含量，比較了8個(gè)產(chǎn)地黃連飲片，為更好的控制黃連飲片質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（美國(guó)）；Mettler-Toledo XS205DU電子分析天平（瑞士）；Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱。鹽酸小檗堿對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110713-200910。乙腈為色譜純?cè)噭耍疄殡p蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18柱（4.6mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g）[2]；檢測(cè)波長(zhǎng)：345nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃[3]。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在100℃干燥5h的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1mL含鹽酸小檗堿240.60μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品0.1g，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相80mL，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）40min，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性范圍的考查

精密量取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、7.0mL加流動(dòng)相定容至10mL，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣2次，每次10μL，測(cè)定峰面積值，以峰面積平均值和濃度的值進(jìn)行回歸處理，得回歸方程Y=3.53974378-37.505392；相關(guān)系數(shù)r=0.99994結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在0.2406～1.6842μg范圍內(nèi)線性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液（48.12μg/mL）10μL分別進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積積分值RSD為0.21。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10μL分別于0、1、2、4、6、8h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.29，表明供試品在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品（四川峨眉；批號(hào)：20091101）6份，分別精密稱定，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸小檗堿的含量為6.96%，RSD為0.77%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（四川峨眉；批號(hào)：20091101），分別精密加入一定量的鹽酸小檗堿對(duì)照品，按供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定，測(cè)得平均回收率為98.49%，RSD為1.20%。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 10批樣品的測(cè)定結(jié)果

取10個(gè)批號(hào)的黃連打粉，每個(gè)批號(hào)取0.1g精密稱定，分別按供試品溶液制備方法制備，得供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色色譜儀，測(cè)定，以鹽酸小檗堿對(duì)照品

表2 樣品中生物堿含量測(cè)定結(jié)果

圖1 鹽酸小檗堿對(duì)照品HPLC圖

圖2 供試品溶液HPLC圖

的峰面積為對(duì)照，分別計(jì)算小檗堿、表小檗堿、黃連堿和巴馬汀的含量，用待測(cè)成分色譜峰與鹽酸小檗堿色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間確定。

小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿的峰位，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍之內(nèi)，即得。表小檗堿的相對(duì)保時(shí)間為0.71，黃連堿的相對(duì)保留時(shí)間為0.78，巴馬汀的相對(duì)保留時(shí)間為0.91，小檗堿的相對(duì)保留時(shí)間為1.00[4]。各批黃連的生物堿含量量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2、圖1、圖2。

3 小 結(jié)

黃連飲片主要含有生物堿，采用單一對(duì)照品為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照峰進(jìn)行其他生物堿的含量測(cè)定，可以節(jié)省對(duì)照品的使用。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，各地黃連飲片品質(zhì)存在著差異四川洪雅的生物堿含量最高，可根據(jù)不同研究目的選擇合適的產(chǎn)地。

[1]曾秀芳,曾建亭,張洪等.不同產(chǎn)地黃連的質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,28(2)：151-152.

[2]肖平,李三新.反相高效液相色譜法測(cè)定五味黃連丸中鹽酸小檗堿的含量量[J].中南藥學(xué),2009,7(11)：879-880.

[3]羅小泉,吳國(guó)慶,河海峰等.RP-HPLC法測(cè)定黃連及酒黃連中3種生物堿的含量[J].江西中醫(yī)藥,2009,40(12)：74-75.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(2010年版,一部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.