HPLC法測定兒炎消栓劑中連翹苷的含量

楊飛雪 陳 濱

哈爾濱市紅十字中心醫(yī)院（150076）

兒炎消栓劑是添加了金銀花、連翹等中藥材成分制成的兒童用藥，主要作用為清熱解毒，輕宣風熱，臨床效果較好。連翹為中國臨床常用的傳統(tǒng)中藥之一，具有清熱解毒，消腫散結，疏散風熱等功效，連翹苷是連翹的主要有效成分之一，本研究采用高效液相色譜法檢測連翹苷含量，與《中國藥典》一部中連翹藥材含量測定方法[1]對應，結果準確、重現(xiàn)性好,現(xiàn)將相關資料報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀：美國Waters公司2695分離單元、2996二極管陣列檢測器、EMPOWER32色譜工作站；紫外可見分光光度計：瓦里安公司CARY 100型。

1.2 材料

乙腈：（色譜級）上海邁瑞爾化學技術有限公司公司；連翹苷對照品（批號：110821-200610）：中國藥品生物制品檢定所。水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。

兒炎消栓劑為自制樣品。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：邁瑞爾公司產(chǎn)DIAMONSIL C18柱 （5μ 200×4.6mm）；流動相：乙腈-水（35：65），柱溫：35℃；流速：1mL/min；進樣量：10μL。檢測波長：取連翹苷對照品溶液，在230～320nm光譜掃描，其最大吸收波長為274nm，因此選用274nm為檢測波長。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液

精密稱取減壓干燥至恒重的連翹苷對照品，加甲醇制成每1mL含35ug的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 待測品溶液

精密稱取樣品約1g，置小研缽中，加少量50%甲醇充分研磨，使分散均勻，再移至50mL容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，置高速離心機中3000r/min，10min，放至室溫，上清液以0.45μm濾膜過濾，即得。

2.2.3 陰性空白溶液

按處方稱取除連翹外的其他藥材，制備為空白樣本，同時制備陰性空白溶液。

2.3 專屬性檢測

分別取陽性對照品溶液、檢測品溶液及陰性空白溶液，在上述色譜條件下測定。

2.4 線性關系考察

稱取連翹苷對照品15.8mg，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度并搖勻，吸取10～50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，精密量取連翹苷對照品溶液1mL、2mL、4mL、8mL、10mL、20分別定溶到10mL容量瓶中（6.32μg/mL、12.64μg/mL、25.28μg/mL、50.56μg/mL、63.2μg/mL、126.4μg/mL）搖勻，按上述色譜條件，依次進樣，以峰面積為縱坐標，以濃度為橫坐標，求算得回歸方程。

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取待測品溶液10μL，按測定方法于室溫放置0、1、2、4、8、10h后按上述色譜條件進樣，含量變化以濃度計算相對標準方差。

2.6 精密度試驗

用5.56μg/mL的連翹苷對照液按上述色譜條件連續(xù)進樣8次，以峰面積計算相對標準方差。

圖1 連翹苷的對照品溶液

2.7 回收率試驗

采用加樣回收測定法，按上述色譜條件測定。

2.8 樣品的測定

按上述測定方法，對3個不同批次樣品進行連翹苷含量測定。

3 結 果

在該色譜條件下，連翹苷峰形良好，其他成分對測定無干擾，結果見圖1。

表1 回收率測定結果（n=9）

3.2 線性關系

以峰面積為縱坐標，以濃度為橫坐標，得回歸方程：Y=2.41×104Χ+9.04×103，Y-峰面積 X-對照液濃度。線性關系系數(shù)r=0.9999，表明在6.32μg/ml～126.4μg/ml濃度間線性良好。

3.3 穩(wěn)定性

根據(jù)上述色譜條件，濃度的含量變化的RSD為0.35%（n=6）,說明供試品溶液在10h內(nèi)保持穩(wěn)定。

3.4 精密度

按上述色譜條件連續(xù)進樣8次，通過對連翹苷的精密度檢測，RSD為0.21%（n=8）。結果表明：本法具有良好的精密度。

3.5 回收率

結果見表1。

此方法表明：本法回收率良好。

3.6 樣品含量

連翹苷的平均含量為1.72mg/g，RSD為2.4%（n=3）。

4 討 論

波長的選擇，精密稱取減壓干燥至恒重的連翹苷對照品，用流動相溶解配成標準溶液，對連翹苷標準溶液進行全波長掃描，結果表明標準溶液在274nm處有最大吸收，故選擇檢測波長為274 nm。根據(jù)對3批樣品的測定值，暫定兒炎消栓劑中的連翹苷含量為1.72mg/g。綜上可見，測定方法準確、可靠、重現(xiàn)性好，可以控制兒炎消栓劑中連翹苷的質(zhì)量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2005年版.一部[M].北京：化學工業(yè)出版社,2005：117.

[2]郭用莊,劉法錦,翟旭峰等.HPLC法測定連翹配方顆粒中連翹苷的含量[J].中藥材,2003,26(06)：431-432.

[3]曹音,石琳,宋志華等. HPLC法測定連翹水提液中連翹苷的含量[J].廣西中醫(yī)學院學報,2008,11(1)：54-55.