阿德福韋酯對慢性乙型肝炎患者外周血HBV-DNA和Th1/Th2平衡的調(diào)節(jié)作用

黃遵仁，羅利飛

(1.浙江省浦江縣中醫(yī)院感染科，浙江 金華 322200； 2.浙江省臺州醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 臺州 317000）

乙型肝炎的發(fā)病主要是機(jī)體清除乙型肝炎病毒（HBV）引發(fā)的細(xì)胞免疫病理改變，Th1/Th2的平衡在HBV感染人體后的病情發(fā)展方向中起著決定作用[1－2]，白細(xì)胞介素 4（IL－4）和干擾素 －γ（IFN－γ）是維持Th1/Th2細(xì)胞比例的關(guān)鍵分子。阿德福韋酯是一種新型核苷類抗HBV藥物，通過競爭脫氧腺苷三磷酸底物，使HBV－DNA鏈的延長終止而抑制HBV－DNA的復(fù)制，從而使慢性乙型肝炎患者病毒學(xué)、肝功能和組織學(xué)指標(biāo)得到改善[3－4]，但國內(nèi)外關(guān)于其對外周血Th1/Th2細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用報(bào)道均較少。筆者通過觀察阿德福韋酯對慢性乙型肝炎患者外周血HBV－DNA及IL－4、IFN－γ含量的影響，探討其治療慢性乙型肝炎的療效及對外周血Th1/Th2細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月至12月在我院感染科門診就診或住院治療的輕中度慢性乙型肝炎患者共40例作為治療組，患者診斷均符合2000年西安全國病毒性肝炎會議制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。其中男25例，女 15 例；年齡 17～58歲，平均（37.2±9.8）歲。所有患者治療前HBV－DNA均為陽性，排除其他肝炎病毒重疊感染。另選擇30例正常健康體檢者作為對照組，其中男19例，女11例；年齡18～60歲，平均（38.5±11.3）歲。兩組研究對象性別、年齡比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法

治療組口服阿德福韋酯(江蘇正大天晴有限公司)10 mg，每日1次，連續(xù)服用12周。在治療前和治療12周后檢測患者外周血HBV－DNA和IL－4及IFN－γ含量，根據(jù)治療后HBV－DNA復(fù)制指標(biāo)陰轉(zhuǎn)情況、乙型肝炎病毒e抗原及e抗體（HBeAg/HBeAb）轉(zhuǎn)換情況分為治療有效組與治療無效組。對照組上述指標(biāo)只測定1次。

1.3 檢測方法

用淋巴細(xì)胞分離液從肝素抗凝血中分離單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×109/mL，加入植物血凝素(PHA)100 g/L，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，收集上清液。采用雙抗體夾心ELISA法檢測PBMC培養(yǎng)上清液中IL－4和IFN－γ含量。試劑盒購于法國Daclone公司，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。HBVDNA采用熒光探針PCR法檢測，試劑由深圳匹基生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。HBeAg及HBeAb的檢測試劑為上?？迫A公司產(chǎn)品。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X ±s)表示，以 SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1。可見，與對照組比較，治療組患者治療前外周血培養(yǎng)上清PBMC中IL－4水平明顯上升，而IFN－γ水平明顯下降(P＜0.01)，治療 12周后 IL－4水平和 HBV－DNA含量明顯下降，IFN－γ水平明顯上升(P＜0.05或 P＜0.01)，但治療有效組較治療無效組變化更明顯(P＜0.01)。

表1 外周血培養(yǎng)上清PBMC中IL－4和IFN－γ水平及HBV－DNA含量(±s，ng/L)

表1 外周血培養(yǎng)上清PBMC中IL－4和IFN－γ水平及HBV－DNA含量(±s，ng/L)

注：與對照組比較，*P ＜0.01；與治療前比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01；與治療無效組比較，■P＜0.01。

指標(biāo) 對照組（n=30） 治療組（n=40） 治療有效組(n=26)治療無效組(n=14)IL－4 IFN－γ HBV－DNA 36.5±11.5 294.5±52.7－治療前68.2±20.5*159.2±32.5*1.37×108±2.45×107治療后45.6±12.4△223.4±42.1△3.96 ×105±6.73 ×104▲30.4±6.9■279.5±37.2■3.76 ×102±2.34 ×102■73.8±12.5 119.2±24.3 9.84×107±5.32×107

3 討論

HBV感染機(jī)體時(shí)，細(xì)胞免疫在肝細(xì)胞損害及病毒清除中起重要作用，而Th應(yīng)答類型與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，Th1/Th2比例是否平衡是機(jī)體能否有效清除病毒和病毒感染細(xì)胞的主要因素之一[6－7]。在HBV特異性抗原的刺激下，CD4+T細(xì)胞在不同細(xì)胞因子作用下分化為Th1和Th2兩種類型，從而影響細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)之間的平衡。

阿德福韋酯是新一代抗HBV藥，目前在我國剛進(jìn)入臨床應(yīng)用階段[3]。阿德福韋酯口服后經(jīng)過體內(nèi)非特異性酯酶水解，迅速轉(zhuǎn)化為阿德福韋。阿德福韋是一種無環(huán)單磷酸脫氧腺苷類似物，被細(xì)胞內(nèi)普遍存在的激酶磷酸化生成二磷酸阿德福韋。二磷酸阿德福韋和脫氧腺苷三磷酸(dATP)與多聚酶結(jié)合位點(diǎn)競爭性結(jié)合,從而抑制HBV－DNA多聚酶、人免疫缺陷病毒(HIV)逆轉(zhuǎn)錄酶、對拉米夫定耐藥的HBV－DNA多聚酶活性，還可與腺苷酸競爭性摻入病毒DNA鏈，終止DNA鏈合成以抑制病毒復(fù)制[4,8]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，阿德福韋酯可明顯提高慢性乙型肝炎患者Th1類細(xì)胞因子IFN－γ的產(chǎn)生水平，降低Th2類細(xì)胞因子IL－4水平，改善Th1/Th2功能失衡狀態(tài)，可明顯糾正慢性乙型肝炎患者肝臟生化功能和減輕血清病毒學(xué)活動[9]。馬萍等[10]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)阿德福韋治療后的慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫應(yīng)答有一定程度的恢復(fù)，與治療前丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，阿德福韋酯可抑制HBV－DNA復(fù)制，調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子比例平衡，使免疫反應(yīng)由Th2型向Th1型逆轉(zhuǎn)。其作用機(jī)制可能是阿德福韋酯可以促進(jìn)Th1細(xì)胞發(fā)育，抑制Th2細(xì)胞發(fā)育，進(jìn)而促進(jìn)IFN－γ等Th1型細(xì)胞因子的分泌，抑制IL－4等Th2型細(xì)胞因子的分泌，提高細(xì)胞免疫反應(yīng)，抑制體液免疫反應(yīng)，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的活性，從而清除細(xì)胞內(nèi)病毒，降低血清HBV－DNA的含量。由本研究中治療有效組與治療無效組的療效可見，治療有效組Th1/Th2平衡比治療無效組更傾向于Th1優(yōu)勢應(yīng)答，說明阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎患者是通過調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞的平衡，提高Th1細(xì)胞免疫反應(yīng)，抑制Th2體液免疫反應(yīng)，從而抑制HBV－DNA的復(fù)制。

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