紫花松果菊揮發(fā)油抗氧化作用研究

袁彩紅，袁 藝，*，王文文，袁志清

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，安徽合肥230036；2.河北出入境檢驗(yàn)檢疫局，河北石家莊050051）

紫花松果菊揮發(fā)油抗氧化作用研究

袁彩紅1，袁 藝1，*，王文文1，袁志清2

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，安徽合肥230036；2.河北出入境檢驗(yàn)檢疫局，河北石家莊050051）

目的：研究紫花松果菊揮發(fā)油抗氧化作用。方法：以VC和薰衣草揮發(fā)油做對(duì)照，分光光度法測(cè)定松果菊揮發(fā)油對(duì)DPPH·、·OH的清除率以及對(duì)卵磷脂過(guò)氧化的抑制率。結(jié)果：松果菊揮發(fā)油、薰衣草揮發(fā)油和VC對(duì)DPPH·清除能力表現(xiàn)為：松果菊揮發(fā)油＞薰衣草揮發(fā)油＞VC；對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力表現(xiàn)為：松果菊揮發(fā)油＞薰衣草揮發(fā)油＞VC；對(duì)羥自由基清除能力表現(xiàn)為：VC＞薰衣草揮發(fā)油＞松果菊揮發(fā)油。結(jié)論：紫花松果菊揮發(fā)油具有抗氧化能力。紫花松果菊揮發(fā)油對(duì)DPPH·表現(xiàn)出清除作用，對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化體表現(xiàn)出抑制作用，并且其清除和抑制能力高于兩個(gè)對(duì)照組，而對(duì)·OH的清除作用低于對(duì)照組。

紫花松果菊，揮發(fā)油，DPPH·，·OH，卵磷脂過(guò)氧化

Abstract：This study was to examine the antioxidant effects of volatile oil of Echinacea purpurea L..Take ∨Cand Lavandula pedunculata as control group，using spectrophotometric method to determine the clearance rates of DPPH·and·OH as well as the inhibition ratio on the peroxidation of lecithin.The results showed that the effects of volatile oil of Echinacea purpurea L.on the clearance rate or inhibition ratio of DPPH·and peroxidation of lecithin were better than control group.But the effect on·OH showed quite the reverse.

Key words：Echinacea purpurea L.；volatile oil；DPPH·；·OH；peroxidation of lecithin

紫花松果菊（Echinacea purpurea L.）又名紫錐菊，為菊科松果屬多年生草本植物。原產(chǎn)于北美，在德國(guó)、加拿大、美國(guó)等國(guó)家得到廣泛應(yīng)用，成為國(guó)際草藥市場(chǎng)十大流行草藥之一［1］。目前國(guó)內(nèi)對(duì)松果菊功能方面的研究有松果菊抑瘤作用研究［2］以及免疫功能研究［3］，而對(duì)于抗氧化性能尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定紫花松果菊花序揮發(fā)油對(duì)DPPH·、·OH的清除能力以及對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化體的抑制能力而研究其抗氧化功能。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

紫花松果菊花序 購(gòu)自安徽桐城維慶藥用植物開(kāi)發(fā)有限公司，經(jīng)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物學(xué)教研室袁藝教授鑒定為紫花松果菊，材料干燥后磨成粉，陰涼干燥處儲(chǔ)存?zhèn)溆?；純天然薰衣草精油，無(wú)水硫酸鈉，無(wú)水乙醚，抗壞血酸，1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH·），95%乙醇，大豆卵磷脂，三氯乙酸（TCA），2-硫代巴比妥酸（TBA），濃鹽酸（HCl），七水合硫酸亞鐵，鄰二氮菲，30%過(guò)氧化氫。

UV751GD紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，電熱恒溫水浴鍋，離心機(jī)，超聲波清洗器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 紫花松果菊揮發(fā)油的提取 稱(chēng)取紫花松果菊花序粉末200g，加水浸泡2h，后水蒸氣蒸餾法提取4h。粗提物經(jīng)無(wú)水乙醚萃取，無(wú)水硫酸鈉除去水分后，自然揮發(fā)掉乙醚，得到揮發(fā)油。

1.2.2 DPPH·清除能力測(cè)定 根據(jù)參考文獻(xiàn)［4］中的方法并改良，分別配制不同濃度的松果菊揮發(fā)油、薰衣草精油95%乙醇溶液和VC水溶液，2×10-4mol/L的DPPH 95%乙醇溶液。取待測(cè)液1mL，加入1mL DPPH乙醇溶液，避光放置過(guò)夜，517nm處測(cè)定吸光度（A樣）；用1mL蒸餾水代替1mL待測(cè)液，測(cè)吸光度（A0）。各樣液對(duì)DPPH的清除率按下式計(jì)算：

1.2.3 脂質(zhì)過(guò)氧化抑制能力測(cè)定 采用Fe2+-VC體系誘發(fā)的卵磷脂過(guò)氧化模型，根據(jù)參考文獻(xiàn)［5］中的方法并改良。

1.2.3.1 脂質(zhì)分散液制備 超聲波溶解90mg卵磷脂于30mL pH7.4的磷酸緩沖液中待用。

1.2.3.2 TCA-TBA-HCl混合液配制 15g TCA，0.375g TBA和2.1mL濃鹽酸超聲波溶解，蒸餾水定容至100mL。

1.2.3.3 待測(cè)液配制 用95%乙醇配制不同濃度的松果菊和薰衣草待測(cè)液；用蒸餾水配制VC溶液。取1mL脂質(zhì)分散液，依次加入1mL 40!mol/L FeSO4、1mL 400!mol/L VC和1mL待測(cè)液，混勻，避光，37℃水浴 30min，后加入 2mL TCA-TBA-HCl，100℃水浴10min，冷卻，9000r/min離心 10min，取上清液，在532nm處測(cè)定吸光度As，1mL蒸餾水做空白，記作Ab。抑制率按下式計(jì)算：抑制率（%）=（Ab-As）/Ab×100%

1.2.4 ·OH清除能力測(cè)定 采用Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH體系，根據(jù)參考文獻(xiàn)［6］中的方法并改良。配制不同濃度的待測(cè)液，取3mL 0.2mol/L pH7.4的磷酸緩沖液，依次加入250!L 12mmol/L的鄰二氮菲溶液、250!L 12mmol/L的硫酸亞鐵溶液、250!L蒸餾水及 250!L 0.16%H2O2，混勻，37℃ 水浴 1h，在510nm處測(cè)定吸光度 As。以250!L蒸餾水代替0.16%H2O2測(cè)定吸光度A0，待測(cè)液代替蒸餾水測(cè)定吸光度A。清除率用按下式計(jì)算：

2 結(jié)果與分析

2.1 DPPH·清除能力的測(cè)定

由圖1可知，松果菊揮發(fā)油、薰衣草和 VC對(duì)DPPH·的清除率均隨濃度的增加而增加。通過(guò)所得數(shù)據(jù)，建立回歸方程，計(jì)算出松果菊揮發(fā)油、薰衣草和 VC的 IC50分別為4、8、10!g/mL。由此可知，松果菊對(duì)DPPH·的清除能力最強(qiáng)。

圖1 DPPH·清除率曲線

2.2 脂質(zhì)過(guò)氧化抑制能力測(cè)定結(jié)果

由圖2可知，薰衣草揮發(fā)油與松果菊揮發(fā)油對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制率均隨其濃度的增大而增加。經(jīng)過(guò)建立回歸方程可得出：松果菊揮發(fā)油IC50（5mg/mL）＜薰衣草揮發(fā)油IC50（9mg/mL）；VC在此濃度范圍內(nèi)呈負(fù)值。由此可知，松果菊揮發(fā)油對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化體有抑制作用，且其抑制能力強(qiáng)于薰衣草揮發(fā)油。

2.3 ·OH清除能力測(cè)定

由圖3可知，VC對(duì)·OH自由基的清除率呈上升趨勢(shì)，而薰衣草對(duì)·OH自由基的清除率呈先上升后下降趨勢(shì)。當(dāng)待測(cè)液濃度為3.5mg/mL時(shí)，對(duì)羥自由基的清除能力強(qiáng)弱次序?yàn)椋篤C＞薰衣草揮發(fā)油；松果菊揮發(fā)油在所設(shè)濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)為負(fù)值且負(fù)值呈上升趨勢(shì)。

圖2 脂質(zhì)過(guò)氧化清除率曲線

圖3 VC、薰衣草和松果菊揮發(fā)油的·OH清除率曲線

3 結(jié)論

3.1 本實(shí)驗(yàn)采用三種經(jīng)濟(jì)便捷的方法研究松果菊揮發(fā)油的抗氧化作用，結(jié)果表明：紫花松果菊揮發(fā)油具有抗氧化功能。松果菊在清除DPPH·和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制方面優(yōu)于對(duì)照組，但對(duì)羥自由基的清除方面，對(duì)照組優(yōu)于松果菊揮發(fā)油。

3.2 在DPPH·清除能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，清除DPPH·時(shí)，VC可在短時(shí)間內(nèi)反應(yīng)完成，而兩種揮發(fā)油需要較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)證明，反應(yīng)過(guò)夜可以使得兩種揮發(fā)油反應(yīng)完全。

3.3 在脂質(zhì)過(guò)氧化體抑制能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，由于揮發(fā)油不溶于水的性質(zhì)，導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果不穩(wěn)定，改善實(shí)驗(yàn)方法，將體系放置于超聲波中反應(yīng)，提高揮發(fā)油的溶解性，得到松果菊揮發(fā)油和薰衣草揮發(fā)油抑制率的規(guī)律變化。而VC在所設(shè)濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)負(fù)值，原因可能為VC將 F e3+還原為Fe2+，F(xiàn)e2+濃度升高使得由此誘導(dǎo)產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化物升高，從而吸光值增大，而清除率表現(xiàn)為負(fù)值。

3.4 在·OH清除能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，由于揮發(fā)油不溶于水，當(dāng)濃度過(guò)高時(shí)，反應(yīng)體系中乙醇含量降低，揮發(fā)油不能溶解，在反應(yīng)溶液中形成油滴或者出現(xiàn)分層現(xiàn)象。松果菊揮發(fā)油在濃度范圍內(nèi)，對(duì)·OH清除率表現(xiàn)為負(fù)值上升。根據(jù)文獻(xiàn)［7］推測(cè)其原因可能為低濃度的松果菊揮發(fā)油將Fe3+還原為Fe2+，F(xiàn)e2+與H2O2反應(yīng)生成新的·OH，而新的·OH氧化鄰二氮菲-Fe2+，降低吸光度。

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Study on the antioxidant effect of volatile oil of Echinacea purpurea L.

YUAN Cai-hong1，YUAN Yi1，*，WANG Wen-wen1，YUAN Zhi-qing2
（1.School of Life Science，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China；2.Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Shijiazhuang 050051，China）

TS201.1

A

1002-0306（2010）10-0152-03

2009-04-01 *通訊聯(lián)系人

袁彩紅（1983-），女，在讀碩士研究生，研究方向：資源植物開(kāi)發(fā)與利用。