幾種植物組織提取液抑菌效率初報(bào)

崔東亞，滕紅梅，楊美玲，賈秀芹，蔣繼志

（1.運(yùn)城學(xué)院 生命科學(xué)系，山西 運(yùn)城 044000；2.河北大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，河北 保定 071000）

幾種植物組織提取液抑菌效率初報(bào)

崔東亞1，滕紅梅1，楊美玲1，賈秀芹1，蔣繼志2

（1.運(yùn)城學(xué)院 生命科學(xué)系，山西 運(yùn)城 044000；2.河北大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，河北 保定 071000）

利用17種植物材料的組織提取液對(duì)大腸桿菌和酵母菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)韭菜提取液的抑菌效果最為明顯，抑菌率平均達(dá)到78.6%。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，韭菜提取液的抑菌成分為水溶性，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定性差，提高溫度和稀釋倍數(shù)、延長(zhǎng)保存時(shí)間均影響最終的抑菌效果。

植物；組織提取液；抑菌效率

植物源抑菌劑是指利用植物根、莖、葉、花、果實(shí)等部分或提取到的具有抑菌活性的成分加工成的制劑。植物源抑菌劑是天然抑菌劑，具有無(wú)公害、可降解、對(duì)人畜安全、不污染環(huán)境且不易引起抗藥性等優(yōu)點(diǎn)。隨著人們環(huán)境保護(hù)意識(shí)的不斷加強(qiáng)，對(duì)植物源抑菌劑種類、抑菌成分、抑菌效果及其穩(wěn)定性的研究也越來(lái)越關(guān)注，逐漸成為近年來(lái)的一個(gè)研究熱點(diǎn)。世界上植物資源極其豐富，產(chǎn)生的次生代謝物質(zhì)種類也相當(dāng)繁多，目前已知的超過(guò)40萬(wàn)種[1]，其中很大一部分具有抑（殺）菌效果。沈靈犀等從西藏蒿屬的6種植物的精油中就提取到69種化合物[2]。白雪等比較了水楊梅和水團(tuán)花不同提取物的抑菌活性，從水團(tuán)花醋酸乙酯萃取部位分離出的化合物中，槲皮素——3——Oβ——D——葡萄糖苷顯示出了較好的抑菌作用[3]。本文試圖從現(xiàn)有的常用植物材料中篩選到幾種具有抑菌成分的植物，期望能夠從中分離出抑菌物質(zhì)，為植物源抑菌劑的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鮮活植物材料均采自菜市場(chǎng)和運(yùn)城市郊區(qū)的田間，包含韭菜、蒜、蔥、姜、百合、蘆葦、黃花菜、小麥、鳶尾等9種；中草藥購(gòu)自運(yùn)城中藥店，包含澤瀉、白芨、莪術(shù)、黃精、玉竹、天麻、郁金、麥冬等8種中藥材料。

菌種：大腸桿菌和酵母菌，由運(yùn)城學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

培養(yǎng)真菌、細(xì)菌的培養(yǎng)基分為液體和固體兩種類型培養(yǎng)基。真菌為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）；細(xì)菌為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基[4]，采用的試劑均為分析純?cè)噭?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 植物提取液的制備

鮮活植物提取液的制備：稱取植物供試新鮮部分50 g，先用清水沖洗，再用無(wú)菌水洗凈，無(wú)菌研缽研磨后，加入無(wú)菌水100ml，室溫下提取24小時(shí)，無(wú)菌紗布、濾紙過(guò)濾，將濾液作為母液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

炮制中草藥提取液的制備：按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)稱取各供試中草藥50 g，蒸餾水浸泡5 h，煎煮1 h。3000 r/min離心20min，取上清液作為母液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 抑菌試驗(yàn)

將兩種待試菌用相應(yīng)固體培養(yǎng)基活化，分別挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基，于恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱培養(yǎng)，大腸桿菌37℃培養(yǎng)14 h，酵母菌25℃培養(yǎng)24 h。

將已滅菌融化的固體培養(yǎng)基倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，水平放置待凝固。用無(wú)菌移液槍吸取0.2mL菌懸液加入到凝固的培養(yǎng)基上，用無(wú)菌三角涂棒涂布均勻，將已涂布好的培養(yǎng)皿用直徑為6毫米的打孔器打2到5個(gè)孔，用移液槍吸取200 ul各種植物組織提取液分別置于打好的孔里。大腸桿菌于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，酵母菌于26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h左右，取出觀察抑菌圈的大小，量出抑菌圈直徑，根據(jù)下列公式計(jì)算抑菌率。

菌生長(zhǎng)抑制率：c%=（抑菌圈半徑-處理孔半徑）/抑菌圈半徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同植物組織提取液的抑菌效果

實(shí)驗(yàn)共選用17種植物材料。表1為不同供試材料組織提取液的抑菌效果，其中4種鮮活材料的組織提取液對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)有抑制作用；炮制中藥中僅1種材料的提取液對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)有抑制作用，而17種材料中只有韭菜的提取液對(duì)酵母菌的生長(zhǎng)有抑制作用。圖1和圖2為韭菜與澤瀉對(duì)大腸桿菌的抑菌效果圖。

表1 不同供試材料組織提取液的抑菌效果

圖1 韭菜抑菌效果

圖2 澤瀉抑菌效果

2.2 具有抑菌活性的植物組織提取液的抑菌強(qiáng)弱

對(duì)具有抑菌活性的供試植物組織提取液做3次重復(fù)抑菌實(shí)驗(yàn)，測(cè)量抑菌圈的半徑，取實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值，計(jì)算抑菌率，結(jié)果見(jiàn)表2。表2表明，韭菜組織提取液對(duì)供試菌抑菌作用最強(qiáng)，對(duì)大腸桿菌的抑菌率平均達(dá)到81.3%，對(duì)酵母菌的抑菌率達(dá)到66.7%；其次是大蒜的組織提取液，對(duì)大腸桿菌的抑菌率可達(dá)78.6%；蔥的組織提取液的抑菌作用最小。抑菌效果由大到小分別為韭菜、大蒜、生姜、澤瀉和蔥。

表2 對(duì)大腸桿菌和酵母菌生長(zhǎng)的抑制率

2.3 韭菜不同組織部位提取液的抑菌效果

對(duì)韭菜莖部和葉子部分的提取液分別進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，韭菜不同組織部位提取液抑菌率沒(méi)有明顯差異，韭菜莖提取液的抑菌率略高于韭菜葉提取液的抑菌率。

表3 韭菜不同組織部位提取液的抑菌效果

2.4 韭菜葉提取液離心后的上清液和沉淀物的抑菌效果

取韭菜葉的組織提取液0.2 ml，進(jìn)行離心處理，得到上清夜和沉淀物，與提取液一起做抑菌實(shí)驗(yàn)，分別點(diǎn)樣于同一培養(yǎng)皿的三個(gè)孔中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。從表4可知上清液抑菌圈和原液的抑菌圈大小相近，差異不明顯，沉淀物的抑菌圈則比原液的要小。表明韭菜葉組織提取液的抑菌成分主要存在于上清液中，為水溶性物質(zhì)。圖3為韭菜上清液、沉淀物和處理原液的抑菌效果圖。

2.5 提取液濃度、保存時(shí)間和提取溫度對(duì)提取液抑菌效果的影響

將韭菜和蒜2種抑菌效果較好的組織提取液進(jìn)行不同濃度梯度處理，原液作對(duì)照，觀察抑菌效果。結(jié)果表明：隨著濃度下降，各濃度梯度的植物提取液的抑菌活性隨之下降，兩種提取液稀釋3倍后，抑菌效果為0；提取液于4℃保存24 h后，抑菌效果下降70%；提取溫度加熱到100℃時(shí)，提取液的抑菌效果為0?？梢?jiàn)，韭菜和蒜組織提取液的抑菌物質(zhì)穩(wěn)定性較差。

總之，通過(guò)采用研磨法制備植物組織提取液進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，共發(fā)現(xiàn)5種植物的提取液對(duì)大腸桿菌有抑菌活性，1種植物的提取液對(duì)酵母菌有抑菌活性。韭菜提取液的抑菌效果最為明顯，其抑菌物質(zhì)大量分布于上清液中，并對(duì)溫度和保存時(shí)間較為敏感，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，其化學(xué)成分不清楚，有待于進(jìn)一步研究探討。

表4 韭菜葉組織提取液離心后上清液和沉淀物的抑菌率

圖3 韭菜葉離心物的抑制效果

［1］Swain T.Secondary compounds of protective agents［J］.Annual review of plant physiology，1997，（28）：479-501.

［2］沈靈犀,扎西次仁,耿宇鵬等.西藏蒿屬六種植物精油化學(xué)成分分析及抑菌效果［J］.復(fù)旦學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，49（1）：73-80.

［3］白雪，林晨，李藥蘭等.水楊梅和水團(tuán)花提取物體外抑菌活性的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中草藥，2008，39（10）：1532-1535.

［4］范秀容，李廣武，沈萍.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第2版）［M］.北京:高等教育出版社，1993，262.

Abstract：Inhibition experiments were studied about 17 kinds of plants'tissue extracts to E.coli and Yeast.Inhibition effect of the leek was the best and inhibition effectwas 78.6%.In the further experiments，the antibacterial componentwas dissolved in the water，and its chemical propertieswas not stable.The long storage period，high temperature and dilution can affect the inhibition effect.

Keywords：plant；tissue extracts；inhibition effect

（責(zé)任編輯 王璟琳）

A PreliMinary Report of Inhibition Effect on Tissue Extracts of Several Plants

CUIDong-ya1，TENG Hong-mei1，YANGMei-ling1，JIA Xiu-qin1，JIANG Ji-zhi2

（1. Department of Life Science Yuncheng University，Yuncheng Shanxi 044000；2. College of Life Science Hebei University，Baoding Hebei 071000）

Q946.887

A

1673-2014（2010）05-0013-03

2010—09—08

崔東亞（1978— ），男，河北滿城人，講師，主要從事分子生物學(xué)教學(xué)與科研工作研究。