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    利用表面靜態(tài)法發(fā)酵干紅棗生產(chǎn)果醋的研究

    2010-09-12 13:35:14諶井岡
    食品工業(yè)科技 2010年8期
    關(guān)鍵詞:干酵母酒精度醋酸

    諶井岡

    (陜西師范大學(xué)食品工程系,陜西西安710062)

    利用表面靜態(tài)法發(fā)酵干紅棗生產(chǎn)果醋的研究

    諶井岡

    (陜西師范大學(xué)食品工程系,陜西西安710062)

    以干紅棗為原料,采用表面靜態(tài)法發(fā)酵工藝,對發(fā)酵的重要參數(shù)進行研究。結(jié)果表明:酒精發(fā)酵酵母采用BM45或者活性干酵母,接種量為3%,發(fā)酵溫度28℃;醋酸發(fā)酵菌種應(yīng)選用中科1.41(A.S1.41),溫度35℃,酒精度7%,接種量10%,發(fā)酵32d或者更長,為最佳生產(chǎn)工藝。

    紅棗,發(fā)酵,工藝

    Abstract:Using dry Chinese jujube as raw materials,important fermentation parameters were studied by surface static fermentation method.The results showed that yeast BM45 or active dry yeast,3%inoculum concentration,28℃ fermentation temperature were used in alcoholic fermentation.In acetic fermentation,A.S1.41 acetic acid bacteria,35℃,7%alcohol,10%inoculum concentration and 32d or longer fermentation were optional production technique.

    Key words:Chinese jujube;fermentation;technology

    關(guān)于果醋生產(chǎn)技術(shù),近幾年來報道的多為果汁液體深層發(fā)酵法。這種工藝雖較先進,但主要以鮮果汁為原料,且對菌種、設(shè)備要求都很高,建廠投資也大。若采用傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵法,雖簡單易行,但也存在輔料消耗多及需要浸淋工序等不足。鑒于日本和我國南方采用表面發(fā)酵法的優(yōu)點,如風(fēng)味佳,質(zhì)量好,便于實驗室研究,本文對液體表面發(fā)酵法生產(chǎn)紅棗果醋的一些重要因素作了實驗研究。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae) ACCC 21138,中國農(nóng)科院植物研究所;活性干酵母(Saccharomyces cerevisiae) 廣東丹寶利酵母有限公司生產(chǎn);干紅專用酵母菌(Saccharomyces ellipsoideus)Y2323,BM45 寧夏大學(xué)提供;小橢圓啤酒酵母菌(Saccharomyce scerevisiae Meyen ex Hansen)B184 陜西省微生物研究所提供;酵母液態(tài)培養(yǎng)基 麥芽汁(5~6°Be),pH6.4,121℃滅菌20min;酵母活化培養(yǎng)基

    紅棗汁(SSC 10%),121℃滅菌20min;醋酸活化培養(yǎng)基 1%葡萄糖,1%酵母膏,1.5%碳酸鈣,2%無水乙醇,pH6.8;中科1.41,滬釀1.01,醋酸菌膜。

    發(fā)酵罐 自制;滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、手持糖量計、旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀、722分光光度計 上海;無菌操作臺 江蘇;天平 德國;低速離心機 重慶。

    1.2 菌種活化方法

    1.2.1 酵母菌活化[1,3,9-10]活性干酵母的處理方法:活性干酵母用35~40℃新制紅棗果汁復(fù)水15~20min,溫度降至34℃以下活化1~2h。一級擴大培養(yǎng):新制紅棗果汁,121℃高壓滅菌20min,冷卻,接種,28℃條件下培養(yǎng)24h,血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)得酵母菌的濃度為108/mL;二級擴大培養(yǎng):新制紅棗果汁,121℃高壓滅菌20min,冷卻,接入一級培養(yǎng)酵母菌,28℃培養(yǎng)24h,血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)得酵母菌的濃度為108/mL。

    1.2.2 醋酸菌活化[1,3,9-10]一級擴大培養(yǎng):取 150mL三角瓶,醋酸菌活化培養(yǎng)基,121℃高壓滅菌30min,冷卻,接種,八層紗布封口,30℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)24h,轉(zhuǎn)速為60r/min;二級擴大培養(yǎng):取250mL三角瓶,121℃高壓滅菌30min,冷卻,接入一級培養(yǎng)醋酸菌,八層紗布封口,30℃恒溫?fù)u床培養(yǎng) 24h,轉(zhuǎn)速為60r/min。

    1.3 工藝流程

    干紅棗→挑選→提汁→糖調(diào)整→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵→成分分析[3]

    文中在沒有特別指出的情況下,按如下操作要點進行:干紅棗(60℃熱風(fēng)烘干、含水量約38%)經(jīng)過挑選,100℃熱水提汁(先加棗重4倍的水,提汁,然后再往渣中加干棗重4倍水提汁),兩次提取的汁液合并[3]。

    1.4 酒精發(fā)酵最佳條件的確定方法

    1.4.1 酵母菌最佳菌株的確定方法 向配制好的紅棗汁中接入3%的不同菌種:活性干酵母、BM45、Y2323、ACCC21138、B184,每小時測定一次酒精度和SSC含量。

    1.4.2 酵母菌最佳接種量的確定方法 將新制紅棗汁裝入自制發(fā)酵罐,接入1%、3%、5%和10%的活化BM45酵母,發(fā)酵溫度26℃,酒精度上升緩慢,不再產(chǎn)氣即停止發(fā)酵。

    1.4.3 酵母菌最佳發(fā)酵溫度的確定方法 向新制紅棗汁中接入3%活化BM45酵母菌,控制發(fā)酵溫度分別為22、25、28、30、33℃。至酒精度上升緩慢,不再產(chǎn)氣即停止發(fā)酵。

    1.5 醋酸發(fā)酵最佳條件的確定方法

    1.5.1 菌種的選擇 新制紅棗酒酒精度調(diào)為7%,接入10%三種活化醋酸菌,1000mL廣口發(fā)酵瓶裝液量為800mL,八層紗布封口,32℃發(fā)酵。

    1.5.2 酒精度對醋酸發(fā)酵的影響 紅棗酒酒精度調(diào)為4%、7%、10%和13%,接入 10%活化 A.S1.41,1000mL廣口發(fā)酵瓶裝液量為800mL,八層紗布封口,32℃發(fā)酵。

    1.5.3 接種量對醋酸發(fā)酵的影響 新制紅棗酒,酒精度調(diào)為 7%,接入 5%、8%、10%和 13%活化A.S1.41,1000mL廣口發(fā)酵瓶裝液量為800mL,八層紗布封口,32℃發(fā)酵。

    1.5.4 溫度對醋酸發(fā)酵的影響 新制紅棗酒,酒精度調(diào)為7%,接入10%的活化A.S1.41,1000mL廣口發(fā)酵瓶裝液量為800mL,八層紗布封口,在27、32、35、38℃不同發(fā)酵溫度下發(fā)酵。

    1.5.5 醋酸發(fā)酵正交實驗因素 新制棗酒,用蔗糖調(diào)可溶性固形物至4%,選擇對醋酸發(fā)酵影響較大的接種量(A)、酒精度(B)、發(fā)酵溫度(C)進行三因素三水平的正交實驗,32d后測醋酸度,實驗按L9(34)正交表設(shè)計,見表1。

    表1 醋酸發(fā)酵正交實驗因素水平表

    1.6 測定方法

    還原糖的測定采用菲林法[7];可溶性固形物(SSC)的測定采用手持糖度計直接測定[7];pH的測定采用醋酸度計直接測定[7];總酸的測定按照 GB 18187-2000的方法測定;酒精度的測定按照GB/T 15038-1994。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 酒精發(fā)酵

    2.1.1 酵母菌最佳菌株的確定測定結(jié)果 如圖1和圖2。

    圖1 不同菌株對主發(fā)酵的影響

    圖2 不同酵母發(fā)酵時SSC的變化

    從圖1、圖2中可得出,在主發(fā)酵階段,活性干酵母起發(fā)快,轉(zhuǎn)化速度也明顯高于其他菌種,發(fā)酵7d基本結(jié)束,其余四種酵母菌的酒精發(fā)酵時間基本一致,需要8d。從酵母菌轉(zhuǎn)化的酒精度和發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵液中SSC含量分析,活性干酵母和BM45酵母將糖轉(zhuǎn)化為酒精的能力較高,酒精度可達7.0%和6.5%。確定BM45為酒精發(fā)酵適合菌種。

    2.1.2 酵母菌最佳接種量的確定 由圖3可知,葡萄酒酵母BM45的添加量為3%時,主發(fā)酵結(jié)束時酒精度為7.2%,當(dāng)添加量為5%時生成的酒精度反而降低為6.4%,1%添加量的最終酒精度為6.2%則處于中間。在起發(fā)時間和前期發(fā)酵中,大的接種量則表現(xiàn)好于低接種量,隨著酵母菌添加量的增大,發(fā)酵速度相應(yīng)加快,主要是因為大量酵母存在并且繁殖,需要消耗果汁中的營養(yǎng)物質(zhì),使得生成酒精的底物減少,最終酒精度低。接種量如果過低,酵母需要長時間進行增殖,因而發(fā)酵時間會延長。

    圖3 接種量對酒精發(fā)酵的影響

    2.1.3 酵母菌最佳發(fā)酵溫度的確定 從圖4可得出,22℃酒精度上升緩慢平穩(wěn),第8d后仍在發(fā)酵;28℃的發(fā)酵早于25℃的1d結(jié)束,最終二者酒精度最高達到7%;30℃及33℃發(fā)酵溫度下,前4d酒精度上升最快,后4d酒精度上升變慢,最終酒精度為6.5%。溫度高,起發(fā)快,消耗營養(yǎng)物質(zhì)多;溫度低,起發(fā)慢,加上重氧化的影響,不利發(fā)酵。最終確定28℃為酒精發(fā)酵最適溫度。

    圖4 溫度對主發(fā)酵的影響

    2.2 醋酸發(fā)酵單因素分析

    2.2.1 過程分析 由圖5可知,隨著發(fā)酵時間的延長,酒精度逐漸下降,醋酸度逐漸增加,在11~25d之間,醋酸度上升最快,平均每天為0.32g/100mL,酒精度下降迅速,平均每天為0.33%,產(chǎn)酸曲線為直線,是醋化的主要階段。27d后,產(chǎn)酸達到高峰,酒精度、醋酸度變化平緩。從表觀來看,在整個過程中,菌膜不斷形成,破裂,再形成,再破裂,最后沉于缸底,醋酸化完畢。

    圖5 醋酸發(fā)酵曲線

    2.2.2 菌種的選擇 從圖6可以得出,三種醋酸菌的發(fā)酵結(jié)果相近。前期,滬釀1.01的發(fā)酵速度大于A.S1.41和醋酸菌膜,醋酸菌膜的發(fā)酵過程明顯長于前兩者。后期,滬釀1.01的發(fā)酵速度減慢,低于A.S1.41和醋酸菌膜的發(fā)酵速度,最終醋酸度分別為5.46、6.24和6.0g/100mL,A.S 1.41在發(fā)酵中,總酸含量達到最大值6.36g/100mL后又下降至6.24g/100mL,符合A.S1.41可以分解利用醋酸的生理特性。綜合發(fā)酵速度和產(chǎn)酸量,確立A.S1.41為醋酸發(fā)酵最佳菌種。

    圖6 菌種對醋酸發(fā)酵的影響

    2.2.3 酒精度對醋酸發(fā)酵的影響 從圖7可以得出,隨著酒精度增大,最終醋酸度依次 3、6.3、3.54、1.46g/100mL,從醋酸轉(zhuǎn)化率和酒精殘留量可知,當(dāng)酒精度為4%時,雖然轉(zhuǎn)化率高,但獲得的醋酸度低;當(dāng)酒精度在7%時酒精轉(zhuǎn)化率較高,醋酸度最高;酒精含量10%至13%時發(fā)酵受阻,轉(zhuǎn)化率大幅降低,特別是13%時28d后,總酸含量不足1.5g/100mL。確定7%為醋酸發(fā)酵最適酒精度。

    圖7 酒精度對醋酸發(fā)酵的影響

    2.2.4 接種量對醋酸發(fā)酵的影響 從圖8可以得出,隨接種量的增大,最終醋酸度依次為5.1、5.86、6.3、6.1g/100mL。在5%~13%接種量范圍內(nèi),醋酸含量有一個由小增大,又由大變小的過程,發(fā)酵液中營養(yǎng)物質(zhì)的量是一定的,接種量過大時,發(fā)酵液內(nèi)醋酸菌密度較大,其消耗的營養(yǎng)也越多,用于產(chǎn)物轉(zhuǎn)化的酒精減少,因此醋酸產(chǎn)生量也少。確定10%左右為醋酸發(fā)酵最適接種量。

    圖8 接種量對醋酸發(fā)酵的影響

    2.2.5 溫度對醋酸發(fā)酵的影響 從圖9可以得出,32℃和35℃時,發(fā)酵速度隨溫度的增大而增大,28d發(fā)酵完成后,醋酸度高達6.3g/100mL。27℃和38℃時,醋酸含量增加緩慢,第32d的醋酸度也不足3g/100mL。主要是由于低溫不利于醋酸菌增殖和代謝,高溫影響菌體內(nèi)的酶系活力所致。確定32℃左右為醋酸發(fā)酵最適溫度。

    圖9 溫度對醋酸發(fā)酵的影響

    2.3 醋酸發(fā)酵的正交實驗

    從表2中可以得出,酵母菌的存在,可溶性固形物調(diào)到4%時,糖轉(zhuǎn)化為酒精,初始酒精度為5%,最醋酸度能達到5.40g/100mL,甚至是6.06g/100mL,可見在進行醋酸發(fā)酵時,酵母菌的存在可以達到增酸的效果。用DPS數(shù)據(jù)分析軟件處理表2,極差分析可見,因素為C>A>B,即溫度>接種量>酒精度;各水平的的優(yōu)選是 C3A2B3,即酒精度為7%,接種量10%,溫度35℃。

    表2 實驗結(jié)果表

    3 討論

    酵母菌屬于兼性厭氧菌,而醋酸菌屬于嚴(yán)格需氧菌,在發(fā)酵過程應(yīng)不斷供應(yīng)氧氣。深層發(fā)酵可使醋酸發(fā)酵在7d內(nèi)達到發(fā)酵所需醋酸度,但通過這種方法生產(chǎn)的果醋風(fēng)味較差,揮發(fā)酸的含量低,刺鼻感強。且醋的風(fēng)味物質(zhì)主要來自各種酯類,而酯類來自微生物代謝產(chǎn)物和酸與堿的酯化反應(yīng)。通過靜止表面發(fā)酵研究紅棗醋的發(fā)酵工藝,確定了酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵的最佳工藝條件。本研究發(fā)現(xiàn),液態(tài)靜止表面發(fā)酵法的發(fā)酵時間和風(fēng)味物質(zhì)形成量介于固態(tài)發(fā)酵法和液態(tài)深層發(fā)酵法之間,可作為發(fā)酵技術(shù)發(fā)展方向由固向液轉(zhuǎn)變的過渡,并且更符合當(dāng)前我國果醋生產(chǎn)實際水平。

    [1]沈萍,范秀容,李廣武.微生物學(xué)實驗[M].北京:高等教育出版社,1999(6):214-218.

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    [3]錢存柔,黃儀秀.微生物學(xué)實驗教程[M].北京:北京大學(xué)出版社,2008,1:94-101.

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    Study on development of Chinese jujube vinegar by surface static fermentation method

    CHEN Jing-gang
    (Department of Food Engineering,Shaanxi Normal University,Xi’an 710062,China)

    TS255.47

    A

    1002-0306(2010)08-0172-04

    2009-08-25

    諶井岡(1984-),男,碩士研究生,研究方向:微生物發(fā)酵。

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