2種佐米曲普坦制劑的人體生物等效性研究

韓中剛（貴州遵義市人民醫(yī)院藥劑科，遵義市 563000）

佐米曲普坦（Zolmitriptan）系一種選擇性5-HTIB/ID受體激動(dòng)藥，通過激動(dòng)顱內(nèi)血管和三叉神經(jīng)系統(tǒng)交感神經(jīng)上的5-HTIB/ID受體，引起顱內(nèi)血管收縮并抑制前炎癥神經(jīng)肽的釋放，臨床上適用于成人伴或不伴先兆癥狀的急性偏頭痛的治療。為評(píng)價(jià)重慶凱林制藥有限公司研制的佐米曲普坦分散片在健康男性受試者的藥動(dòng)學(xué)特征及其與市售佐米曲普坦片是否等效，筆者建立了可靠的血藥濃度測定方法，并對(duì)國產(chǎn)分散片和市售普通片的藥動(dòng)學(xué)及生物等效性進(jìn)行了研究。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括LC-10泵系統(tǒng)、SPD-10A型可調(diào)波長紫外檢測器和C-R7Ae plus積分儀（日本島津公司）；電子天平（1/10萬）（德國Sartorius公司）；VXH-3微型旋渦混合器（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；KDC型電子可控沉淀器（廣東合誠無線電廠）。

1.2 試藥

受試制劑：佐米曲普坦分散片（重慶凱林制藥有限公司，規(guī)格：每片2.5 mg，批號(hào)：20051101，含量：97.6%）；參比制劑：佐米曲普坦片（成都天臺(tái)山制藥有限公司，規(guī)格：每片2.5 mg，批號(hào)：050601，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20050072）；佐米曲普坦對(duì)照品（重慶凱林制藥有限公司，純度：99.8%）；內(nèi)標(biāo)：替硝唑?qū)φ掌罚ㄖ貞c華邦制藥股份有限公司，純度：99.61%，批號(hào)：020304）；甲醇、磷酸二氫鈉、磷酸等均為分析純，乙腈、二氯甲烷為色譜純，水為三重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱：Hypersil C18（200 mm×5.0 mm，5 μm），預(yù)柱；固定進(jìn)樣環(huán)：50 μL；流動(dòng)相：乙腈∶磷酸鹽緩沖液（0.05 moL·L－1磷酸二氫納，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.0）＝15∶85；流速：1.2 mL·min－1；紫外檢測波長：223 nm；柱溫：室溫；內(nèi)標(biāo)：替硝唑。

2.2 受試者選擇

18例中國健康男性志愿者，漢族，年齡（22.1±3.0）歲，體質(zhì)量（59.2±6.6）kg，身高（171.0±5.1）cm。試驗(yàn)前全面體格檢查證實(shí)為健康者，無藥物過敏史。受試前2周內(nèi)未服過任何藥物。受試者了解受試須知后，簽署知情同意書。本試驗(yàn)方案經(jīng)貴州遵義市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

2.3 給藥方法及血樣采集

采用隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，單劑量口服給藥。將18名受試者隨機(jī)分為A、B組，每組9名，在Ⅰ、Ⅱ階段分別交叉服藥，交叉服藥前經(jīng)1周清洗期。試驗(yàn)前禁食12 h后，于次日晨8∶00時(shí)空腹吞服受試制劑或參比制劑10 mg（200 mL溫開水送服）。服藥當(dāng)日統(tǒng)一進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)餐。受試期間禁止劇烈活動(dòng)、吸煙、飲酒及含酒精、咖啡因類飲料，且禁止使用一切非試驗(yàn)藥物，并由醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行健康監(jiān)護(hù)。采集服藥后0.17、0.33、0.67、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0 h靜脈血3.0 mL，分離血漿，低溫保存（－20℃），及時(shí)測定。間隔1周后交換口服另一種制劑，同法采取靜脈血。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取佐米曲普坦對(duì)照品9.2 mg，用適量甲醇溶解，置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即為368 μg·mL－1的佐米曲普坦標(biāo)準(zhǔn)貯備液，使用時(shí)用甲醇將該標(biāo)準(zhǔn)貯備液稀釋為736 ng·mL－1的工作濃度。精密量取替硝唑?qū)φ掌?9.3 mg，用適量甲醇溶解，置于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即為586μg·mL－1的替硝唑標(biāo)準(zhǔn)貯備液，使用時(shí)用甲醇將該標(biāo)準(zhǔn)貯備液稀釋為1 172 ng·mL－1的工作濃度。

2.5 血漿樣品處理[1]

取受試者血漿1.0 mL，加內(nèi)標(biāo)溶液（1 172 ng·mL－1替硝唑溶液）100μL，加0.2 mol·L－1碳酸鈉 0.1 mL，加二氯甲烷4 mL，渦旋振搖1 min，3 000 r·min－1離心2 min，取有機(jī)層置于40℃水浴用氮?dú)獯蹈?，用流?dòng)相100μL復(fù)溶，進(jìn)樣50μL，記錄色譜。

2.6 色譜行為

在本試驗(yàn)所采用的色譜條件下，血漿中佐米曲普坦、替硝唑的相對(duì)保留時(shí)間分別約為4.5、6.5 min。佐米曲普坦與內(nèi)標(biāo)峰形良好，且不受血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1HPLC Chromatogram

2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備與最低檢測濃度

在空白血漿中分別添加佐米曲普坦對(duì)照品，使血藥濃度相當(dāng)于73.6、36.8、18.4、9.2、4.6、2.3、1.15 μg·L－1，按“2.5”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理并測定，記錄色譜。以佐米曲普坦峰面積/替硝唑峰面積（Y）對(duì)佐米曲普坦血藥濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y＝0.090 48X－0.029 42（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，佐米曲普坦血藥濃度在1.15～73.6 ng·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測濃度1.15 ng·mL－1（n＝5，RSD＝10.83%）[2]。

2.8 回收率及精密度試驗(yàn)

于空白血漿中加入高、中、低（73.60、18.40、1.15 ng·mL－1）3種濃度的佐米曲普坦標(biāo)準(zhǔn)溶液，以評(píng)價(jià)本法測定血漿中佐米曲普坦含量的回收率及日內(nèi)、日間RSD?；厥章始熬芏仍囼?yàn)結(jié)果見表1。

表1 回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 1Results of recovery and precision tes（t±s，n＝5）

表1 回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 1Results of recovery and precision tes（t±s，n＝5）

加入濃度/ng·mL－1 1.15 18.40 73.60測得濃度/ng·mL－1回收率/%±s/%94.61±8.00 102.99±2.29 98.94±1.82 x 23452345 1 1.22 19.35 72.51 1.11 18.68 73.62 1.00 19.24 73.40 1.00 19.13 70.63 1.11 18.35 73.95 1 106.09 105.16 98.52 96.52 101.52 100.03 86.96 104.56 99.73 86.96 103.97 95.96 96.52 99.73 100.48日內(nèi)測得量/ng·mL－1 1.00±0.17 18.60±0.32 71.78±1.14日內(nèi)RSD/%17.00 1.72 1.59日間測得量/ng·mL－1 1.02±0.14 18.83±0.39 72.67±1.35日間RSD/%13.72 2.07 1.86

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.9.1 常溫穩(wěn)定性：將佐米曲普坦和替硝唑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液室溫放置，于0、18、36、52、72 h時(shí)進(jìn)行測定，測得佐米曲普坦?jié)舛确謩e為11.72、11.06、11.39、11.06、11.06 ng·mL－1，測定結(jié)果為（11.26±0.30）ng·mL－1，RSD＝2.67%，表明混合標(biāo)準(zhǔn)溶液室溫放置72 h穩(wěn)定性良好。

2.9.2 凍融穩(wěn)定性：將含藥血漿反復(fù)冷凍（－20℃）、融化，按“2.5”項(xiàng)下方法處理后測定，4 d內(nèi)測定5次，測得佐米曲普坦?jié)舛确謩e為6.97、6.86、6.64、6.75、7.19 ng·mL－1，測定結(jié)果為（6.88±0.21）ng·mL－1，RSD＝3.05%，表明血漿樣品4 d內(nèi)反復(fù)凍融穩(wěn)定性良好。

2.10 單劑量相對(duì)生物利用度

2.10.1 藥-時(shí)曲線：18名健康受試者單劑量口服2種佐米曲普坦制劑10 mg后的平均藥-時(shí)曲線見圖2。

2.10.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)：采用3p97計(jì)算機(jī)軟件（中國數(shù)學(xué)藥理學(xué)會(huì)），計(jì)算各個(gè)體的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，Cmax、tmax以實(shí)測值計(jì)算，AUC按梯形面積法計(jì)算。采用各受試者的佐米曲普坦受試制劑與參比制劑的AUC0～t分別計(jì)算相對(duì)生物利用度（F），結(jié)果表明，

一室血管外給藥模型較佳。有關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。

圖2 18名健康受試者單劑量口服2種佐米曲普坦制劑10 mg后的平均藥-時(shí)曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of zolmitriptan in 18 volunteers after a single oral administration of 10 mg zolmitriptan agents

2.11 生物等效性評(píng)價(jià)

用雙單側(cè)t檢驗(yàn)分析2種制劑的Cmax和AUC0～10，高、低側(cè)t檢驗(yàn)均有顯著性差異（P＜0.05），（1－2α）置信區(qū)間分別為86.7%～116.2%和96.7%～108.0%，表明2種制劑的Cmax和AUC0～10均生物等效（α＝0.05）。tmax用非參數(shù)（Wilcoxon法）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，2種制劑間無顯著性差異（P＞0.05）。以上結(jié)果表明2種制劑具有生物等效性。

表2 18名健康受試者單劑量口服2種佐米曲普坦制劑10 mg后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較（n＝18）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters of zolmitriptan in 18 volunteers after a single oral administration of 10 mg zolmitriptan agents（n＝18）

2.12 不良反應(yīng)監(jiān)測結(jié)果

在臨床試驗(yàn)中，第Ⅰ周期口服受試制劑或參比制劑后0.5～1 h，多數(shù)受試者有頭痛癥狀（15人）；此外有極少部分受試者自感乏力、頸肩部酸痛、發(fā)熱、口干、惡心、頭昏等癥狀（各種癥狀分別為1～3人），但均能耐受，平臥休息后即好轉(zhuǎn)。

在第Ⅱ周期口服受試制劑或參比制劑后，同樣是以頭痛（13人）及頸肩部酸痛、口干、發(fā)熱等癥狀（各種癥狀分別為1～3人）為主，但均能耐受，自覺較第Ⅰ周期為輕，未予任何處理，休息后自行好轉(zhuǎn)。

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道[3]，本品長期服用耐受性好，24 h內(nèi)最大用藥量可達(dá)10 mg。雖然試驗(yàn)中大多數(shù)受試者均出現(xiàn)了不同程度的不良反應(yīng)，但均能耐受，未經(jīng)處理，峰濃度過后不良反應(yīng)逐漸減輕或消失。

雙單側(cè)t檢驗(yàn)是國際上判斷生物等效性通用的一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法[4]。雙單側(cè)t檢驗(yàn)是使用小概率原理，無效假設(shè)（H0）為2種藥物不等效，備擇假設(shè)（H1）為2種藥物等效。在H0成立時(shí)，t1、t2服從自由度為n－2的t分布。查t臨界值表，得到tα（n－2），如果t1、t2均大于相應(yīng)的t臨界值時(shí)（P＜0.05），拒絕H0，接受H1，認(rèn)為2種藥物等效。

本研究中健康志愿者空腹口服佐米曲普坦受試制劑或參比制劑10 mg后，血漿中2種制劑的平均藥物濃度與變化趨勢相似，屬一室藥動(dòng)學(xué)模型，于1.8 h左右達(dá)到血藥濃度峰值，t1/2β分別為（2.79±1.15）和（3.01±1.13）h，在體內(nèi)滯留時(shí)間較短。由圖2和表2亦可見，2種佐米曲普坦制劑在人體內(nèi)吸收、分布、消除較為接近，佐米曲普坦分散片的相對(duì)生物利用度為（95.54±10.99）%，可認(rèn)為2種制劑生物等效。

[1]何海霞，蒙 華，周遠(yuǎn)大，等.液-液萃取RP-HPLC法測定人血漿中佐米曲普坦的濃度[J].藥物分析雜志，2005，25（3）：323.

[2]曾經(jīng)澤.生物藥物分析[M].第2版.北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998：230.

[3]Spencer CM，Gunasekara NS，Hills C.Zolmitriptan-a review of its use in migraine[J].Drugs，1999，58（2）：347.

[4]余松林主編.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：330.