高效液相色譜法測定養(yǎng)陰降糖膠囊中葛根素的含量

林明越

（佛山市中醫(yī)院，廣東佛山 528000）

查閱相關文獻[1]，養(yǎng)陰降糖膠囊由養(yǎng)陰降糖片（《衛(wèi)生部藥品標準之中藥成方制劑》第五冊）改變劑型而得，主要成分為黨參、葛根、玄參、枸杞子、知母、川芎等12味藥材。參照2005版藥典[2]的含量測定方法，經(jīng)過篩選，采用HPLC法測定膠囊中有效成分葛根素的含量，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津高效液相色譜儀（LC-10Atvp泵，SPD-10Avp紫外檢測器，Z2000色譜數(shù)據(jù)工作站）。分析天平（美國梅特勒），進樣瓶（國產(chǎn)）。

1.2 試劑與試藥

葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：20080102），養(yǎng)陰降糖膠囊樣品為生產(chǎn)廠家提供；甲醇為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

采用 Agilent XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動相為甲醇∶磷酸鹽溶液=20∶80，紫外檢查波長為250 nm，柱溫：室溫。在此條件下，樣品得到良好的分離，在葛根素的出峰位置無干擾峰出現(xiàn)，從而不干擾該樣品的測定。

2.2 線性關系的考察

精密稱取經(jīng)無氧化二磷減壓干燥的葛根素對照品1.00 mg，甲醇定容至 5 ml容量瓶中，分別取 80、160、320、480 μl至2 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度。分別精密吸取10 μl，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，葛根素的濃度為橫坐標進行回歸計算，得葛根素的回歸方程為：Y=2.50×106+5.5×104，相關系數(shù) r=0.999 6，葛根素在 0.100～3.100 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。圖1。

2.3 重復性試驗

稱取本樣品5份，3 ml水溶解后，按照對照品的制備方法制備樣品，按上述方法經(jīng)線性關系方程計算含量，其RSD=2.11%，結(jié)果可知本方法重復性良好。

2.4 精密度考察

精密吸取上述樣品溶液10 μl入高效液相色譜儀中，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積，峰面積的RSD=0.80%，結(jié)果表明，本方法的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性考察

取樣品溶液，分別于 0、4、8、12、16 h 測定樣品中葛根素的含量，結(jié)果葛根素含量的RSD=1.12%，因此樣品在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 回收率的考察

取定量已知含量的樣品，采用加樣回收法，加入適量的對照品溶液，依照上述方法制備供試品溶液，測定含量，計算平均回收率，結(jié)果見表1。

2.7 樣品的測定

取樣品適量，研缽研細混勻后，精密稱取樣品1.0 g，精密吸取甲醇定容至25 ml容量瓶中，稱定，超聲提取30 min后，再用甲醇定容至刻度，過濾后，精密吸取濾液10 ml，水浴蒸干后，加入5.0 ml水溶解，置中性氧化鋁大孔吸附柱上，100 ml水洗滌后，用50%的乙醇200 ml洗脫，收集洗脫液后蒸干，用流動相溶液后，定容至2 ml容量瓶中，取10 μl高效液相色譜測定，結(jié)果表明本方法的測定結(jié)果良好。

表1 葛根素加樣回收率的考察結(jié)果（n=5）

3 討論

養(yǎng)陰降糖膠囊制劑中藥味較多，且在制劑成品中葛根素的含量較低，且存在一定的干擾因素，因此對樣品的前處理尤為關鍵[3]。本實驗考察了流動相對葛根素含量測定的影響?？疾炝思状肌?.1%磷酸溶液=25∶75、甲醇∶水=40∶60、甲醇∶0.1%磷酸溶液=20∶80等流動相進行比較，其中以甲醇∶0.1%磷酸溶液=20∶80的保留時間較為合理，并且分離度良好，其他兩種方法下葛根素的保留時間較短，且分離度差[4]。

在檢測波長的選擇方面，我們采取了稱取葛根素對照品適量，用流動相稀釋后制成對照品溶液，在180～325 nm波長范圍內(nèi)對葛根素的檢測波長進行掃描，在250 nm波長處存在最大吸收，因此選擇250 nm作為葛根素高效液相檢查的波長條件[5]。

綜合上述結(jié)果，HPLC法測定養(yǎng)陰降糖膠囊中葛根素的含量，操作簡單[6]，靈敏度高，結(jié)果準確，因此，可以作為該膠囊劑實際生產(chǎn)中的質(zhì)量控制標準。

[1]牛宇東,高東平,王云霞,等.HPLC法測定養(yǎng)陰降糖膠囊中葛根素的含量[J].陜西中醫(yī),2005,26(9):967-969.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版[M].一部.北京:化學工業(yè)出版社,2005:279.

[3]陸煒琨,曾芳,李媛.反相高效液相色譜法測定益氣降糖膠囊中葛根素的含量[J].廣東藥學院學報,2008,24(5):475-477.

[4]鄒安華.高效液相色譜法測定心康膠囊中葛根素的含量[J].白求恩軍醫(yī)學院學報,2007,5(1):33-34.

[5]張玉軍,路玫.高效液相色譜法測定降糖舒分散片中葛根素的含量[J].廣西醫(yī)學,2008,30(12):1902-1903.

[6]丁愛英,李艷茹,曲佳,等.十味降糖膠囊葛根中葛根素的HPLC含量測定[J].齊魯藥事,2009,28(1):22-24.