烏藥產地加工的研究

楊立平 鄧桂明 歐陽榮

烏藥為樟科植物烏藥 Lindera strychnifolia(Sieb．ef Zucc．)Vill．的干燥塊根［1］，烏藥中主要含有揮發(fā)油、異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜三類主要成分［2］，共同構成了烏藥的化學特征。烏藥為歷代中醫(yī)臨床常用的理氣藥，功能理氣止痛、溫腎散寒［3］。

烏藥的現(xiàn)代研究多注重于生藥的化學成分及藥理作用的研究，對于產地加工、干燥工藝對成分的影響，尚無系統(tǒng)研究報道。本實驗結合現(xiàn)代技術手段，對烏藥的產地加工工藝進行研究，通過比較不同溫度、攤層厚度、干燥時間等與干燥工藝直接相關的因素，采用烏藥主要有效成份烏藥醚內酯為指標［4］，得出了烏藥產地加工工藝的規(guī)范化工藝參數(shù)。該研究方法新穎，手段先進，為烏藥炮制的規(guī)范化研究提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent110高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司);電熱恒溫鼓風干燥箱(上海躍進醫(yī)療器械廠);不銹鋼電熱恒溫水浴鍋(北京市醫(yī)療設備廠);KQ-600型超聲波清洗器(昆山市淀山湖檢測儀器廠);植物粉碎機(泰特儀器有限公司);水分測定裝置。

甲醇、乙腈為色譜純(天津市密歐化學試劑有限公司);甲苯、無水乙醇、香草醛、石油醚、乙酸乙酯、硫酸等為分析純;水(滅菌用水，自制)。

烏藥藥材，采于湖南衡東，經湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥檢室鑒定為樟科植物烏藥Lindera strychnifolia(Sieb．ef Zucc．)Vill．的干燥塊根。

2 實驗方法與結果

2.1 產地新鮮藥材切制工藝的考察

2.1.1 烏藥飲片含水量曲線的制備

2.1.1.1 樣品的制備 藥材凈取后直接切片，以3 kg/m2(約1 cm厚)、6 kg/m2(約2 cm厚)、9 kg/m2(約3 cm厚)的厚度攤層，分別在60℃、80℃、100℃溫度下，烘箱中干燥，每1 h取樣一次。從所取樣品中稱取10 g，粗粉碎后按2005年版《中國藥典》附錄中之甲苯法測飲片含水量。(見表1)。

表1 不同溫度及攤層厚度下烏藥含水量測定

2.1.1.2 結果分析 結果表明:烏藥在常壓下80℃、100℃時3 kg/m2、6 kg/m2組在3 h后含水量均趨于穩(wěn)定，而9 kg/m2組趨于恒定的時間各不相同。

2.1.2 烏藥醚內酯的含量測定

2.1.2.1 色譜條件 流動相:梯度洗脫(甲醇:乙腈:水)梯度洗脫，洗脫梯度見表2;波長235 nm;柱溫:35℃;流速:1 ml/min。

表2 梯度洗脫表

2.1.2 對照品的制備 精密稱定烏藥醚內酯對照品2 mg，置25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。(每1 ml中含烏藥醚內酯80 μg)。

2.1.3 樣品制備

2.1.3.1 浸泡時間的考察 烏藥粉碎成細粉，取1 g，每個供試品取8份，分別精密稱定，置250 ml錐形瓶中，參照《中國藥典》2005年版一部烏藥含量測定項下所用溶劑，各精密加入甲醇 50 ml，稱重重量，分別浸泡 0 h、1 h、4 h、24 h 后，超聲15 min，放冷，再稱定重量，并用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，備用。結果表明烏藥浸泡0 h和1 h時烏藥醚內酯的含量比較高，但兩者的含量相差不大，而4 h、24 h含量降低，所以實驗過程中選擇將藥材粉末浸泡0 h后進行提取。

2.1.3.2 超聲時間的考察 烏藥粉碎成細粉，取1 g，每個供試品取10份，分別精密稱定，置250 ml錐形瓶中，參照《中國藥典》2005年版一部烏藥含量測定項下所用溶劑，各精密加入甲醇50 ml，稱重重量，分別振搖10 min、超聲15 min、30 min、60 min、90 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，備用。結果表明，超聲提取比手動振搖的效果好，且超聲15 min效果最好。

2.1.3.3 提取方法的考察 烏藥粉碎成細粉，取1 g，每個供試品取4份，分別精密稱定，置250 ml錐形瓶中，參照《中國藥典》2005年版一部烏藥含量測定項下所用溶劑，加甲醇50 ml，稱重，一份超聲 15 min，放冷，再稱定重量，用 0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液備用。另一份用索氏提取器在60℃提取4 h，所得固體用甲醇定容至10 ml容量瓶中，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液備用。結果表明，用超聲提取15 min比用索氏提取器提取效果更好。

2.1.3.4 提取次數(shù)的考察 烏藥粉碎成細粉，取1 g，每個供試品取4份，分別精密稱定，置250 ml錐形瓶中，參照《中國藥典》2005年版一部烏藥含量測定項下所用溶劑，加甲醇50 ml，稱重，第1份超聲提取一次，超聲15 min，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，用0.45 μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。第2份超聲提取二次，分別15 min，第3超聲提取三次，其他操作同上。結果表明，超聲提取次數(shù)對烏藥醚內酯的含量影響不大，為節(jié)約時間，故超聲提取一次。

2.1.3.5 樣品提取方法 取本品細粉約1 g，精密稱定，置250 ml錐形瓶中，超聲提取二次，每次加甲醇25 ml，超聲15 min，合并濾液至50 ml量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，備用。

2.1.4 標準曲線的制備 分別精密吸取各濃度的烏藥醚內酯對照品溶液10 μl，其濃度分別為 0.016 mg/ml、0.032 mg/ml、0.048 mg/ml、0.060 mg/ml、0.080 mg/ml、0.160 mg/ml注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積值Y為縱坐標繪制標準曲線，并計算回歸方程:Y=3469.84575X-2.73808，r=0.9997。結果表明，烏藥醚內酯在0.16 μg/ml～1.6 μg范圍內峰有較好的線性關系。

2.1.5 精密度實驗 分別精密吸取對照品溶液10 μl，重復進樣6次。其烏藥醚內酯峰面積的RSD為1.34%。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取當日配置的供試品溶液，于0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h 分別進樣 10 μl，測定樣品中烏藥醚內酯峰面積的RSD值為3.36%。試驗結果表明，供試液在8 h內穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復性試驗 取同一批供試品，按3.1.3項下方法，分別制備供試液6份，每份進樣10 μl，測定峰面積并計算含量，結果RSD=1.31%。

2.1.8 加樣回收率 稱取已知含量的供試品(含12.00%的水分，含量1.3718 mg/g)約0.33 g6份，精密稱定，分別置50 ml容量瓶中，分別精密加入0.1000 mg/ml烏藥醚內酯對照品溶液5 ml，用甲醇稀釋至刻度。按2.1.3項下操作，分別制得供試液，以上述色譜條件測定烏藥醚內酯的含量，烏藥醚內酯的平均回收率為103.7%，RSD為1.49%。(見表3)。

2.1.9 樣品的測定 取供試品，按2.1.3項下的操作，進行測定，結果見表4。

表3 加樣回收率試驗(n=6)

表4 不同溫度及攤層厚度下烏藥醚內酯的測定(g，%)

2.2 干燥藥材切制工藝的考察

2.2.1 浸潤方法的考察 將烏藥干燥藥材取四份，分別進行減壓潤、減壓泡、常壓潤、常壓泡的過程后進行切片，按上述樣品制備方法制備供試品溶液，測得烏藥醚內酯含量分別為 0.128 mg/g、0.148 mg/g、0.176 mg/g 和 0.148 mg/g。

2.2.2 結果分析 干燥后的烏藥在常壓下潤濕后切片的加工方法所測得的烏藥醚內酯含量比常壓浸泡和減壓條件下潤濕，浸泡后切片的加工方法所測得的烏藥醚內酯含量高。

3 討論

3.1 干燥對含揮發(fā)性成分的藥材的質量影響比較大。而現(xiàn)代對中藥材干燥工藝的研究很少。本實驗通過測定不同干燥溫度、干燥時間下烏藥醚內酯的含量，結果表明，溫度對烏藥醚內酯的含量影響較大。

3.2 通過上述試驗結果表明烏藥因其產地加工不同有效成分存在差異，采收后的烏藥直接加工所含有的烏藥醚內酯含量比較高。

3.3 實驗過程中對湖南烏藥細根部位和根部的非藥用部位分別進行了考察，發(fā)現(xiàn)烏藥除根莖部位外細根與其根部的非藥用部位所測得的烏藥醚內酯含量也符合藥典規(guī)定。

3.4 本實驗在進行浸泡時間考察時，烏藥浸泡0 h和1 h時烏藥醚內酯的含量比較高，但兩者的含量相差不大，所以實驗過程中選擇將藥材粉末浸泡0 h后進行提取。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典．化學工業(yè)出版社，2005:58．

［2］杜志謙，夏華玲，江海肖．烏藥揮發(fā)油化學成分的GC-MS分析．中草藥，2003，34(4):308．

［3］王軍偉，阮冰．烏藥的植化及藥理研究概況．浙江中醫(yī)雜志，2006，11(41):675．

［4］程顯隆，魏鋒，馮玉飛，等．RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內酯和烏藥內酯的含量．藥物分析雜志，2003，23(3):225．