影響微柱凝膠法篩查血清抗體的因素

左立新

（株洲市人民醫(yī)院檢驗科，湖南株洲 412000）

輸血前對受血者血清行抗體篩查，既往檢驗方法多受質(zhì)疑。近年來，用微柱凝膠法(MCT)篩查，受到醫(yī)學(xué)界認(rèn)同。我院自2003年以來，對2000例受血者血清進(jìn)行MCT檢測，現(xiàn)將檢查結(jié)果進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

我院2003年1月～2008年12月在院擬受血者2000例，其中男1139例，女861例，年齡1.5～71歲。

1.2 儀器

孵育器Diamed-ID，ID-Incubator 37 SI專用孵育器。 離心機(jī)，Diamed-ID，ID-Centrifuge 12 SⅡ?qū)Ｓ秒x心機(jī)。

1.3 試劑

瑞士達(dá)亞美公司ABO/Rh卡，Diluent2低離子緩沖液，瑞士達(dá)亞美公司A型抗體篩查細(xì)胞E、E、E號與抗體鑒定譜細(xì)胞E-O號和抗人球蛋白試劑，均購至上海市血液中心。

1.4 方法

①抽受血者血標(biāo)本5mL，置37℃水浴10min，分離獲得血清，在微柱凝膠卡上標(biāo)記受血者姓名和抗體細(xì)胞篩查的編號。②分別吸取抗體篩查細(xì)胞懸液50μL，和受血者血清25μL，加入到微柱凝膠卡管腔上端，置37℃孵育15min，1000r/min離心10 min。肉眼觀察其結(jié)果。紅細(xì)胞均勻沉入管底者為陰性，懸于表面或中部者為陽性。對陽性標(biāo)本再用試管法，做間接抗人球蛋白試驗，以對照比較，對確認(rèn)陽性標(biāo)本，再做譜細(xì)胞抗體特異性鑒定。

試管法間接抗人球蛋白試驗。在試管中加入受血者血清2滴和2%～5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻，在37℃孵育1h后，用生理鹽水洗滌3次。于試管內(nèi)加入抗人球蛋白試劑2滴，3000 r/min離心15s，觀察結(jié)果，有凝集者為陽性，無凝集者為陰性。在陰性結(jié)果的試管內(nèi)加入質(zhì)控細(xì)胞1滴，3000r/min離心15 s，出現(xiàn)凝集者顯示結(jié)果可靠。為防止試劑質(zhì)量問題引起的假陽性和假陰反應(yīng)，以及操作失誤，在進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查試驗同時做了陰陽性對照。

2 結(jié)果

2000例受血者血清中共檢出不規(guī)則抗體6例（0.3%）。 單特異性抗體 D3850例 （42.5%）、抗C1290 例(14.5%)、抗 E570 例(28.5%)、復(fù) 合 性抗EC1290例 (14.5%)。同時有非特異性反應(yīng)7例(0.35)，而經(jīng)過各種方法進(jìn)行篩查，最終證實上述非特異性反應(yīng)，為非特異性假陽性反應(yīng)。

3 討論

Lapiere等報道他們發(fā)明的凝膠離心技術(shù)的良好重復(fù)性和敏感性[1]。Hitzler等在試管法中加入了酶試劑[2]。在抗體篩查的實驗研究中，必需對未經(jīng)選擇的病人血清，用凝膠離心技術(shù)與試管法作對比研究。本組結(jié)果顯示，在2000例受血者血清中，篩查出6例不規(guī)則抗體，都為Rh血型系統(tǒng)免疫型抗體（均有輸血史或反復(fù)輸血史），與楊世明的研究結(jié)果大致相似[3]。說明受血者的血清中的不規(guī)則抗體，絕大多數(shù)是Rh血型系統(tǒng)的免疫性抗體，而其它血型系統(tǒng)的免疫性抗體較少。

我國臨床輸血技術(shù)規(guī)范記載:凡遇到交叉配血不合,有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要多次輸血的病人，必須進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選試驗。MCT檢測，是現(xiàn)今最好、最靈敏的檢測方法之一。

在Rh血型系統(tǒng)里，D抗原的抗原性最強(qiáng)，因此對受血者和獻(xiàn)血員進(jìn)行RbD抗原的檢測，是有必要的。但是這一檢測方法，在國內(nèi)開展還不是十分普遍。正因為如此，Rh血型系統(tǒng)的其它抗原(E、C、c、e)也是沒有開展。致使一些Rh陰性者，首次輸血時，接受Rh陽性血，機(jī)體被處于致敏狀態(tài)，當(dāng)再次輸入Rh陽性血時，出現(xiàn)免疫記憶，導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)。而這種免疫產(chǎn)生的抗體必須采用凝聚胺或抗人體球蛋白試驗才能檢測出來。因此，用特異性強(qiáng)、敏感性高的檢驗方法，對受血者和孕產(chǎn)婦，在輸血和產(chǎn)前及產(chǎn)婦在輸血進(jìn)行血型免疫性不規(guī)則抗體篩查，和抗體特異性鑒定，對預(yù)防溶血性輸血反應(yīng)，和新生兒溶血病，具有現(xiàn)實的臨床意義。

MCT的原理是，通過凝膠的濃度，控制凝膠間隙的大小，使間隙只能讓游離的紅細(xì)胞通過，從而使游離的紅細(xì)胞與聚集紅細(xì)胞分離，通過離心的紅細(xì)胞沉在凝膠管底部，這表明紅細(xì)胞未凝集(陰性反應(yīng))。若紅細(xì)胞在凝膠帶上部，則表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集(陽性反應(yīng))。該方法已逐漸用于血型鑒定、交叉配血實驗、抗體特異性鑒定，以及抗人球試驗等血清、血型學(xué)檢查中來。

總之，MCT即便對初學(xué)者而言，結(jié)果判斷上也比試管法可靠。且省時、操作簡單，試劑消耗少，成本低，環(huán)境污染少。特別是對輸血病人和妊娠婦女抗體的篩查，MCT的敏感性更有利于早期檢出這些抗體。

[1]Lapierre Y,Rigal D,Adam J,et al.The gel test:a new way to detect red cell antigen-antibody reactions[J].Transfusion,1990,30(2):109-113.

[2]Hitzler W,Bauernfeind U,Schomig-Brekner J,et al.The gel centrifugation test in serologic compatibility testing[J].Beitr Infusionsther,1990,26:358-361.

[3]楊世明,崔穎,張勇萍,等.微柱凝膠法在抗體篩查中的應(yīng)用及其影響因素探討[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2006,21(4):55-57.