介紹一種簡潔實用的網(wǎng)狀纖維染色方法

鄭燕璇 王曉鴻 茍新敏 曹婉維

在病理技術(shù)工作中，石蠟切片除進(jìn)行常規(guī)HE染色外，有時還需進(jìn)行其他特殊的染色，如網(wǎng)狀纖維染色。網(wǎng)狀纖維染色在特殊染色中算是比較難掌握的一種，其染色結(jié)果的好壞不僅取決于切片的脫蠟效果［1］，還與染色的時間及溫度密切相關(guān)。我科經(jīng)多年實際操作，用邁新公司的網(wǎng)狀纖維染色試劑盒對網(wǎng)染的時間和溫度的控制進(jìn)行了多次摸索比較，現(xiàn)就工作體會介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 網(wǎng)狀纖維染色試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)、石蠟切片、濕盒

1.2 方法(我科室摸索條件) ①石蠟切片脫蠟處理到水，沖洗干凈后置于濕盒內(nèi);②滴加一滴(100 μl)氧化液(試劑A)于切片上孵育3～5 min，流水沖洗1 min;③滴加一滴(100 μl)漂白液(試劑B)漂白至切片無色，流水沖洗;④滴加一滴(100 μl)媒染液(試劑C)孵育5～10 min，流水沖洗再蒸餾水洗(1次);⑤將氨銀液(試劑D)和蒸餾水(1∶3)混合均勻后，滴加一滴(100 μl)在切片上，并放于37℃溫箱中孵育2～3 h，后用蒸餾水速洗一次;⑥滴加一滴(100 μl)還原液(試劑E)孵育10～30 s至組織變成棕黑色，流水沖洗;⑦蘇木素復(fù)染［2］，脫水，透明，中性樹膠封固。

2 結(jié)果

網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈黃棕色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。

3 討論

在病理診斷中，除常規(guī)HE片外，有時還需要對切片進(jìn)行其他特殊的染色，網(wǎng)狀纖維染色就是其中的一項。以慢性萎縮性胃炎診斷為例，在HE染色中胃黏膜有無萎縮較難判斷，網(wǎng)狀纖維染色可較清楚顯示胃黏膜正常結(jié)構(gòu)破壞，間質(zhì)纖維增生，有助于胃黏膜萎縮的診斷。網(wǎng)狀纖維染色的應(yīng)用非常廣泛，常用于區(qū)別上皮性還是非上皮性來源的惡性腫瘤、血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤或外皮細(xì)胞瘤、惡性淋巴瘤或組織細(xì)胞肉瘤、骨異質(zhì)增生或骨化性纖維瘤、粘液纖維瘤與粘液肉瘤、鑒別腦膜瘤與星形細(xì)胞瘤，還可用于判斷肝組織的網(wǎng)狀支架塌陷破壞或增生的情況［3］。網(wǎng)狀纖維染色在特殊染色中算是比較難掌握的一種，以肝臟穿刺組織石蠟切片網(wǎng)染為例，用常規(guī)Gomori銀染色法［4］進(jìn)行染色：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水→高錳酸鉀氧化液5 min，再用自來水洗1 min→2%草酸漂白2 min，水洗2 min→2%硫酸鐵銨媒染2 min→水洗1 min，蒸餾水洗2次→入氨性銀溶液內(nèi)1 min→蒸餾水洗2次后，用20%甲醛液還原5 min→蒸餾水浸洗2次→0.2%氯化金液1 min，蒸餾水洗2次→用麗春紅S苦味酸染色液復(fù)染3～5 min→直接用無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。染色結(jié)果是肝細(xì)胞間的網(wǎng)狀纖維呈黑棕色，細(xì)胞核為藍(lán)黑色。該染色方法所用時間較短，在操作上減輕了技術(shù)人員的工作量，但其在染色液上要求嚴(yán)格，如氧化液存放時間不能過長，以免失去氧化作用;配制氨性銀溶液必須將器皿洗干凈［5］，滴加氨水時不能過量，以清亮為止;麗春紅復(fù)染液一般須滴染方便，無水乙醇沖洗時要將切片傾斜，防止染液停留在切片上，以免使組織中的膠原纖維分布不均現(xiàn)象。而我們科改用邁新公司網(wǎng)染試劑盒對組織進(jìn)行網(wǎng)染時，按照其染色步驟［6］要求進(jìn)行染色，有時會受到環(huán)境溫度的影響，短時間內(nèi)切片無法上色或上色不均勻(鏡下見細(xì)胞漿、細(xì)胞膜及細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)呈淡黃棕色)導(dǎo)致誤診;經(jīng)過對網(wǎng)染時間及溫度進(jìn)行多次摸索比較后，使切片滴加氨銀液后在37℃恒溫箱內(nèi)孵育2～3 h，因其孵育時間長且恒溫，組織上色好，顏色對比明顯(鏡下見細(xì)胞膜間的網(wǎng)狀纖維呈黑色，細(xì)胞核呈藍(lán)色)，提高了網(wǎng)染質(zhì)量及閱片效果。此染色法在染色中對沖洗步驟要求較嚴(yán)，尤其是在滴加氨銀液孵育后，沖洗不到位時組織切片在鏡下可見有較多黑色銀沉渣殘留，影響閱片效果。

［1］鄭燕璇，王曉鴻，茍新敏.石蠟切片脫蠟方式的比較.中國實用醫(yī)藥，2009：211.

［2］王伯沄，李玉松，等.蘇木精-伊紅染色方法.病理學(xué)技術(shù)，2000：130-132.

［3］王伯沄，李玉松，等.網(wǎng)狀纖維染色.病理學(xué)技術(shù)，2000，145.

［4］王伯沄，李玉松，等.常用的特殊染色方法.病理學(xué)技術(shù)，2000：145-146.

［5］王曉鴻，易先平，茍新敏.介紹一種新的玻璃器皿及玻片清洗劑.診斷病理學(xué)雜志，2003：377.

［6］網(wǎng)狀纖維染色試劑盒染色步驟(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)