內(nèi)皮祖細(xì)胞與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的分析

郭長磊 李紅軍

冠心病(coronary artery heart disease，CHD)是一種因冠狀動脈狹窄、供血不足而引起的心肌功能障礙和(或)器質(zhì)性病變，是最常見的心臟病。研究證實冠心病與患者的性別、血脂異常、高血壓、糖尿病等有關(guān)。血管內(nèi)皮的前體細(xì)胞是內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)，EPCs在維持內(nèi)皮完整、再生及新血管形成等方面具有重要的作用［1］。心肌缺血可導(dǎo)致內(nèi)皮損傷及內(nèi)皮功能障礙，故心肌缺血與內(nèi)皮祖細(xì)胞之間存在相關(guān)性。當(dāng)血管損傷時骨髓中的EPCs可被動員至外周血中來參與血管內(nèi)皮修復(fù)過程。本研究隨機(jī)選取2009年1月至2010年1月間在我院住院治療的60例冠心病患者作為研究對象，通過冠狀動脈造影檢查評估血管病變的嚴(yán)重程度，測定冠心病患者外周循環(huán)中循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞的水平，并與CHD冠狀動脈病變進(jìn)行分析，探討EPCs的水平與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度之間的關(guān)系及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年1月至2010年1月間在我院住院治療的60例冠心病患者中，男41例，女19例;年齡46～81歲，平均(62.10±11.46)歲。所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)會制定的冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)，具有典型的臨床表現(xiàn)及心電圖變化。經(jīng)選擇性冠狀動脈造影術(shù)判斷至少有一處為Ⅲ級或以上狹窄(狹窄程度＞50%)。所有患者均未合并其他器質(zhì)性心臟病、惡性腫瘤、感染性疾病、肝腎功能不全及其他系統(tǒng)的嚴(yán)重疾病，排除絕經(jīng)前婦女。隨機(jī)選取同期40例非冠心病患者作為對照組。兩組患者的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 選擇性冠狀動脈造影 采用Judkins法對所有患者行選擇性冠狀動脈造影術(shù)。采用定量冠狀動脈造影(quantitifying coranary angiography，QCA)評估冠狀動脈病變的血管以及狹窄的程度。病變僅累及左前降支(left anterior descending，LAD)、左回旋支(left circumflex，LCX)或右冠狀動脈(right coronary artery，RCA)中其中一支者為單支病變，≥2支者為多支病變(其中左冠狀動脈主干病變則記為2支病變)。以病變累及的冠狀動脈支數(shù)評價冠脈病變的嚴(yán)重程度，分為單支病變、2支病變和3支病變［2］。本研究中35例患者為單支病變、20例患者為2支病變、5例患者為3支病變;對照組患者均未發(fā)現(xiàn)冠狀動脈狹窄。

1.3 循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞水平的測定方法 無菌采集患者外周血10 m l，20 U/ml肝素鈉抗凝。以Ficoll密度梯度離心法收集白膜層的單個核細(xì)胞，然后使用磷酸鹽緩沖液(PBS液)洗滌2次;之后接種于包被人纖連蛋白(human fibronetin)的24孔培養(yǎng)板(由Sigma公司提供)中，培養(yǎng)板置入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，培養(yǎng)液成分包括:青霉素100 U/m l、鏈霉素100 g/m l、VEGF 10 mg/L、20%優(yōu)質(zhì)胎牛血清。37℃過夜，培養(yǎng)48 h后更換培養(yǎng)液，去除未貼壁細(xì)胞，以后每3～4天更換一次培養(yǎng)液。培養(yǎng)2周后在倒置相差顯微鏡下計數(shù)細(xì)胞克隆形成單位(隨機(jī)選取15個200倍視野)，評估外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)分析軟件包進(jìn)行處理，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。檢驗方法采用t檢驗、單因素方差分析，相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞水平的比較 冠心病組患者循環(huán)EPCs克隆形成單位數(shù)目為(13.12±6.28)個，對照組患者循環(huán)EPCs克隆形成單位數(shù)目為(38.25±8.32)個;兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞水平與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系 單支病變組患者循環(huán)EPCs克隆形成單位數(shù)目為(18.49±7.16)個、2支病變組患者循環(huán)EPCs克隆形成單位數(shù)目為(11.63±4.52)個、3支病變組患者循環(huán)EPCs克隆形成單位數(shù)目為(7.31±3.74)個。隨著冠狀動脈病變支數(shù)的增加循環(huán)EPCs的水平逐漸降低，3支病變組患者循環(huán)EPCs水平明顯低于單支、2支病變組，2支病變組患者循環(huán)EPCs水平明顯低于單支病變組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

冠心病是一多危險因素性疾病，多種心血管危險因素可引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷和功能不全而參與冠狀動脈粥樣硬化的形成。血管內(nèi)皮細(xì)胞作為循環(huán)血液與血管平滑肌細(xì)胞間的機(jī)械屏障，具有接受、傳遞信息及分泌血管活性物質(zhì)等功能，內(nèi)皮祖細(xì)胞是存在于胎肝、臍帶血和外周循環(huán)血中，能夠分化為內(nèi)皮細(xì)胞的多潛能細(xì)胞目前的研究表明［3］，外周血中的內(nèi)皮祖細(xì)胞可能參與損傷血管的再內(nèi)皮化過程，對內(nèi)皮修復(fù)、維持血管穩(wěn)定有利的生物學(xué)功能具有重要作用。為研究循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與冠狀動脈病變程度之間的關(guān)系，我們測定60例已行選擇性冠狀動脈造影患者的循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞水平。

本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病組患者循環(huán)EPCs水平明顯低于對照組(P＜0.05)，而且隨著冠狀動脈病變程度的加重，EPCs水平呈逐漸降低的趨勢。EPCs的數(shù)量減少以及EPCs的功能損傷可能導(dǎo)致冠狀動脈自身修復(fù)能力的降低與缺血心肌新生血管的減少，研究提示冠心病的發(fā)生及冠狀動脈病變的嚴(yán)重程度可能與循環(huán)EPCs的數(shù)量減少有關(guān)［4］。

綜上所述，外周循環(huán)中內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的水平與冠狀動脈病變的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。提示冠狀動脈內(nèi)皮損傷、缺乏循環(huán)EPCs時可能加重冠心病的病情程度。由于循環(huán)EPCs數(shù)量與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，因此，EPCs數(shù)量可成為冠心病的生物學(xué)標(biāo)志。

［1］張敬，曲鵬.急性心肌梗死循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的分析.心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2009，18(5):433-436.

［2］汪海婭，高平進(jìn)，姬開達(dá)，等.穩(wěn)定性冠心病患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的分析.中華心血管病雜志，2005，33(5):425-427.

［3］李歡歡，何旭，劉亢丁.內(nèi)皮祖細(xì)胞與缺血性腦卒中.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14(19):3569-3572.

［4］崔斌，黃嵐，宋耀明，等.冠心病患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與相關(guān)危險因素及冠狀動脈病變的關(guān)系.中華心血管病雜志，2005，33(9):785-788.