瘤胃酸中毒與NADH輔因子的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控

歐陽(yáng)克蕙 瞿明仁 黎觀紅

瘤胃酸中毒是指反芻動(dòng)物采食大量易發(fā)酵碳水化合物飼料后，導(dǎo)致瘤胃有機(jī)酸產(chǎn)生過(guò)多，瘤胃pH值的非生理性下降和有毒物質(zhì)的產(chǎn)生，而引起瘤胃微生物區(qū)系失調(diào)和消化道瘤胃功能紊亂的一種代謝性疾病。在反芻動(dòng)物育肥過(guò)程中，急性和慢性瘤胃酸中毒仍是困擾經(jīng)營(yíng)者的一大關(guān)鍵問(wèn)題（Owens等，1998）[1]。據(jù)Martin等（1999）[2]保守估計(jì)，每年僅美國(guó)的肉牛肥育生產(chǎn)因瘤胃酸中毒造成的直接經(jīng)濟(jì)損失就高達(dá)0.6～1億美元。我國(guó)也隨著肉牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，集約化規(guī)?；馀ｐB(yǎng)殖數(shù)量增加，高精料飼養(yǎng)的肥育肉牛比率越來(lái)越大，由之而帶來(lái)的瘤胃酸中毒所造成的損失巨大。因此，如何防止反芻動(dòng)物瘤胃酸中毒倍受關(guān)注。

1 瘤胃酸中毒發(fā)生機(jī)制

目前，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為急性酸中毒的發(fā)生原因是瘤胃內(nèi)乳酸產(chǎn)生菌與乳酸利用菌的菌群失調(diào)，致使乳酸含量增加而引發(fā)的（Krehbiel等，1995；Nocek，1997；Owens等，1998；Enenmark 等，2002）[1，3－5]。而亞急性瘤胃酸中毒（subacute ruminal acidosis,SARA）則是VFA（揮發(fā)性脂肪酸）在瘤胃內(nèi)過(guò)量蓄積所導(dǎo)致（Martin，1998；Oetzel等，1999；Darren，2005；常影，2006）[6－9]，特別是丁酸的過(guò)量蓄積（胡紅蓮，2008）[10]。

正常情況下，瘤胃pH值能維持相對(duì)穩(wěn)定。這主要得益于日糧和唾液中堿性物質(zhì)的中和作用、瘤胃緩沖系統(tǒng)的緩沖作用、瘤胃微生物對(duì)乳酸的代謝利用以及瘤胃壁對(duì)有機(jī)酸的吸收等機(jī)制（肖訓(xùn)軍和孟慶翔，2000）[11]，使得瘤胃的pH值保持在正常的6.2～6.8[12]。Stock 和 Britton（1993），Beauchemin（2007）指出，如果瘤胃內(nèi)VFA產(chǎn)生、吸收和中和之間的這種動(dòng)態(tài)平衡被破壞，就會(huì)造成VFA在瘤胃大量累積和pH值的降低，從而發(fā)生瘤胃酸中毒[13-14]。在這些VFA當(dāng)中，又以丁酸的積累對(duì)瘤胃pH值的影響最大[10]。

VFA的產(chǎn)生與日糧類型有密切關(guān)系。不同的日糧造成瘤胃微生物代謝過(guò)程發(fā)生改變，酸代謝的產(chǎn)物也不同（見(jiàn)表1）。

表1 部分飼料酸代謝產(chǎn)物的比較[引自楊鳳（2005）][16]

對(duì)羊瘤胃連續(xù)監(jiān)測(cè)的結(jié)果也顯示，隨著日糧NFC/NDF（非纖維性碳水化合物/中性洗滌纖維）比例提高，瘤胃TVFA（總揮發(fā)性脂肪酸）摩爾濃度顯著增加，其中丙酸、丁酸濃度呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，而乙酸濃度及A/P（乙酸/丙酸）則呈降低趨勢(shì)（胡紅蓮，2008）[10]。這一結(jié)果與 Goad 等（1998）、Oetzel等（1999）、常影（2006）[15，7，9]的研究報(bào)道是一致的。

乙酸、丙酸、丁酸的酸度相近（pKa分別為4.76、4.87、4.81），因此，三種酸產(chǎn)生和吸收的速率成為其影響瘤胃內(nèi)酸度的關(guān)鍵。據(jù)測(cè)定，乙酸、丙酸、丁酸在瘤胃內(nèi)的吸收率分別為92.70%、76.51%和73.90%[10]。當(dāng)日糧中含有足量的纖維性飼料時(shí)，正常瘤胃內(nèi)酸代謝產(chǎn)物以乙酸為主，較易被瘤胃壁吸收掉。因此，即使乙酸產(chǎn)量的大幅度提高也并不意味著酸中毒危險(xiǎn)性的增加（Beauchemin，2007）[14]。但當(dāng)易發(fā)酵的淀粉和糖類飼料比例增加后，瘤胃內(nèi)酸代謝則以丙酸和丁酸為主產(chǎn)物，較低的吸收率導(dǎo)致瘤胃內(nèi)酸蓄積而pH值下降。在誘導(dǎo)發(fā)生SARA的山羊、閹牛中都發(fā)現(xiàn)瘤胃內(nèi)VFA各組分摩爾比例的這種顯著性變化規(guī)律（即丙酸顯著增加、丁酸極顯著增加，而乙酸濃度顯著降低）（Harmon 等，1985；Brossard 等，2004；常影，2006；胡紅蓮，2008）[17-18，9-10]。

乳酸是瘤胃微生物利用底物發(fā)酵產(chǎn)生的另一種酸性物質(zhì)，在正常瘤胃發(fā)酵狀態(tài)下，乳酸并不是瘤胃發(fā)酵的一種重要中間產(chǎn)物，也不被吸收（段得賢，1981）[19]。乳酸濃度的升高，是在瘤胃pH值長(zhǎng)期處于較低水平時(shí)，瘤胃內(nèi)乳酸產(chǎn)生菌增加而乳酸利用菌減少所導(dǎo)致。對(duì)瘤胃的持續(xù)監(jiān)測(cè)可以發(fā)現(xiàn)，瘤胃內(nèi)容物乳酸含量的高峰，是在較晚的時(shí)間，即病極期才開(kāi)始增加（李光輝，1999）[20]。由于乳酸的酸度（pKa＝3.1）遠(yuǎn)高于 VFA酸度（pKa＝4.8），因此，乳酸濃度升高導(dǎo)致瘤胃pH值迅速下降，發(fā)生急性瘤胃酸中毒。

綜上所述，飼喂大量易消化的碳水化合物飼料，是瘤胃酸中毒的啟動(dòng)環(huán)節(jié)[20]。瘤胃微生物代謝失衡，酸代謝產(chǎn)物的改變，導(dǎo)致瘤胃內(nèi)有機(jī)酸動(dòng)態(tài)平衡喪失，是造成瘤胃酸中毒的直接原因。

2 瘤胃酸中毒的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控措施

科學(xué)的飼喂制度和正確的日糧配比，如控制易發(fā)酵碳水化合物的比例和保證有效中性洗滌纖維（eNDF）是防止瘤胃酸中毒發(fā)生的根本措施。除此之外，在日糧中添加一些物質(zhì)也可對(duì)瘤胃酸中毒進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)調(diào)控。

2.1 添加緩沖劑

日糧中添加一定量的緩沖物能夠起到穩(wěn)定pH值的作用，常用的緩沖物質(zhì)有：碳酸氫鈉、氧化鎂和碳酸鈣。它們可通過(guò)提高瘤胃液的流速、中和瘤胃產(chǎn)生的部分有機(jī)酸或者兩方面結(jié)合來(lái)發(fā)揮緩沖效應(yīng)，達(dá)到阻止瘤胃中有機(jī)酸的積累，預(yù)防瘤胃酸中毒的目的。目前最常用的做法是在肉牛精料中添加0.8%～1.5%的碳酸氫鈉。伍一軍等（1991）報(bào)道[21]，添喂NaHCO3+MgO能防止瘤胃液pH值下降，它雖然不能明顯改變奶牛瘤胃氨氮濃度和TVFA濃度，但能增加瘤胃乙酸比例，降低丙、丁酸比例，且能抑制瘤胃內(nèi)乳酸的產(chǎn)生。但也有些研究指出，添加碳酸氫鈉在育肥早期能有效地減輕酸中毒，而在以后則效果不明顯或完全無(wú)效[11]。同時(shí)，碳酸氫鈉在使用過(guò)程中存在增加拌料麻煩，降低磺胺類藥物的藥效，以及可能因產(chǎn)生過(guò)多二氧化碳而引發(fā)繼發(fā)性酸中毒等缺點(diǎn)。

2.2 添加離子載體類抗生素

一些離子載體類抗生素可以抑制某些乳酸產(chǎn)生菌的生長(zhǎng)和降低采食量的變化范圍，從而降低因消化功能紊亂而引起動(dòng)物的死亡率（Cooper等，1996）[22]。莫能霉素是目前反芻動(dòng)物肥育過(guò)程中使用最廣泛的一種抗生素。大量的研究表明，莫能菌素能有效降低乙酸/丙酸比例和蛋白質(zhì)在瘤胃內(nèi)降解為氨的比例（Yang等，1993）[23]，并通過(guò)降低揮發(fā)性脂肪酸和乳酸的產(chǎn)生量來(lái)提高瘤胃pH值，減少瘤胃酸中毒的發(fā)生（Bergen等，1984）[24]。實(shí)際生產(chǎn)中，精料中添加30mg/kg莫能菌素可降低瘤胃酸中毒的發(fā)病率。當(dāng)然莫能霉素對(duì)飼料利用也有負(fù)面效果，例如抑制了纖維分解菌對(duì)粗飼料的降解（Busquet，2005）[25]。另外，抗生素的殘留以及抗藥性的問(wèn)題，使得抗生素將被逐漸禁用（2006年1月1日起歐洲已禁止在飼料中使用抗生素）。

2.3 添加電子受體

蘋果酸、延胡索酸（富馬酸）和琥珀酸等有機(jī)酸是瘤胃內(nèi)重要的電子受體，是瘤胃微生物發(fā)酵生成丙酸的中間產(chǎn)物（Martin，1998）[6]。與抗生素相反，這些有機(jī)酸的作用是促進(jìn)乳酸利用菌對(duì)乳酸的利用，從而預(yù)防瘤胃pH值的下降，避免了酸中毒的發(fā)生，其中以蘋果酸效果最為顯著。Martin等（1999）給育肥期肉牛飼喂80%精料水平日糧，分別添加4、8、12 mmol/l三種不同濃度蘋果酸，發(fā)現(xiàn)三種處理飼喂2～4 h內(nèi)，瘤胃pH值均高于不添加蘋果酸組。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)隨著蘋果酸添加量的上升，瘤胃pH值和乙酸含量升高，總VFA產(chǎn)生量下降，丙酸、丁酸、L－乳酸含量以及乙/丙比例均沒(méi)有明顯變化[26]。此外，蘋果酸等可被微生物利用，無(wú)殘留。但是蘋果酸的價(jià)格昂貴，生長(zhǎng)育肥牛每天按添加80 g/頭計(jì)，需增加成本0.18美元/頭，從而限制了有機(jī)酸在生產(chǎn)中的應(yīng)用。

2.4 接種益生菌

益生菌主要是一些細(xì)菌、真菌及其培養(yǎng)物，在單胃動(dòng)物中使用普遍，在反芻動(dòng)物中使用較少。研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)給病牛瘤胃接種健康牛的瘤胃液、乳酸利用菌、產(chǎn)乳酸菌都可以改善瘤胃發(fā)酵。其機(jī)制是與乳酸產(chǎn)生菌S.bovis（牛鏈球菌）競(jìng)爭(zhēng)葡萄糖、麥芽糖等發(fā)酵底物，抑制S.bovis的生長(zhǎng)，從而減少乳酸的產(chǎn)生量，如埃氏巨型球菌[27]；或者將乳酸和葡萄糖轉(zhuǎn)化為乙酸和丙酸，如丙酸菌和丙酸桿菌[28-30]。真菌如酵母能清除瘤胃中過(guò)量的氧氣，從而為厭氧細(xì)菌提供有利的生存環(huán)境，促進(jìn)瘤胃微生物的發(fā)酵。體外模擬研究表明，當(dāng)日糧中含大量易發(fā)酵碳水化合物時(shí)，S.cerevisiae（啤酒酵母）能與S.bovis競(jìng)爭(zhēng)葡萄糖，從而減少其乳酸的產(chǎn)量，同時(shí)，S.cerevisiae可以促進(jìn)乳酸利用菌如S.ruminantium（反芻獸新月單胞菌）對(duì)乳酸的利用能力[31]，其原因可能是其含有雙羧酸（如蘋果酸）或其他生長(zhǎng)因子（張耿等，2005）[32]。但是，目前尚不清楚的是，在瘤胃微生物激烈竟?fàn)幍沫h(huán)境中，接種微生物能否在瘤胃長(zhǎng)期存活并發(fā)揮改變瘤胃微生物區(qū)系的作用。

2.5 使用植物提取物

使用植物提取物調(diào)控瘤胃的發(fā)酵，是目前反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究的熱點(diǎn)（Busquet等，2006）[33]。例如黃蓮（張?jiān)獞c等，2007）[34]和肉桂（Busquet等，2005）[35]等提取物都可調(diào)控瘤胃發(fā)酵，提高瘤胃pH值。這可能是其中的精油對(duì)瘤胃內(nèi)某些微生物的選擇性抑制作用（Cardozo等，2006）[36]。而植物中的皂角苷則會(huì)通過(guò)破壞細(xì)胞膜從而抑制原蟲和革蘭氏陽(yáng)性菌的活性，而使革蘭氏陰性菌在瘤胃內(nèi)環(huán)境中大量繁殖，從而造成丙酸的積累，影響瘤胃發(fā)酵類型（Busquet等，2006；Lila等，2003）[33，37]。但這些研究目前還以體外培養(yǎng)的方法為主，迫切需要開(kāi)展動(dòng)物試驗(yàn)。而且由于植物物種和提取工藝的差異，以及動(dòng)物種類或飼糧類型的不同，使得這些試驗(yàn)結(jié)果變得不確定。

3 NADH輔因子與瘤胃酸中毒的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控

由前所述，瘤胃酸中毒的根本是瘤胃微生物代謝失調(diào)所造成的瘤胃內(nèi)酸代謝失衡所致。因此，調(diào)控瘤胃內(nèi)微生物代謝，控制瘤胃內(nèi)酸代謝途徑和速度，減少乳酸和丁酸的濃度，是防制瘤胃酸中毒的根本措施。然而，瘤胃內(nèi)酸代謝是一個(gè)綜合的、復(fù)雜的微生物代謝網(wǎng)絡(luò)。由于瘤胃微生物的數(shù)量多而復(fù)雜，甚至有些微生物是我們目前還未知的，要確切地了解整個(gè)瘤胃微生物代謝網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行調(diào)控十分困難。單純?cè)黾踊驕p少某一種微生物、某一種代謝產(chǎn)物，調(diào)控某一種關(guān)鍵酶活性，對(duì)整個(gè)瘤胃微生物酸代謝網(wǎng)絡(luò)所產(chǎn)生的影響難以確定。

本世紀(jì)以來(lái)微生物代謝工程興起了一個(gè)重要分支——輔因子工程。即通過(guò)調(diào)節(jié)微生物胞內(nèi)一些關(guān)鍵輔因子的形式與濃度，來(lái)改變和優(yōu)化微生物細(xì)胞的代謝功能，定向控制代謝流的方向。這種在輔因子層面上調(diào)控碳代謝流的策略，甚至比改進(jìn)微生物代謝網(wǎng)絡(luò)中若干節(jié)點(diǎn)處的酶活性對(duì)碳代謝流的影響更為有效（Hugenholtz等，1999）[38]。作為碳代謝和氮代謝的關(guān)鍵輔因子，輔酶ⅠNAD＋/NADH（Nicotinamide Adenine Dinucleotide，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）是最受關(guān)注的一對(duì)輔因子。通過(guò)調(diào)整胞內(nèi)NAD（＋/H）濃度及NAD＋/NADH的比例，會(huì)對(duì)整個(gè)代謝網(wǎng)絡(luò)產(chǎn)生極大的影響（Ying，2006；王桂蘭等，2009）[9，40]。例如，荷蘭的Hugenholtz等在乳酸乳球菌（Streptococcus lactis）發(fā)酵過(guò)程中，通過(guò)提高NAD＋/NADH比例，使S.lactis由同型發(fā)酵迅速轉(zhuǎn)入異型發(fā)酵，產(chǎn)物由單一的乳酸變?yōu)槿樗?、乙酸和乙醇（de Felipe等，1998）[41]。張鐵丹（2008）在用Lb.Paracasei（副干酪乳桿菌）發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)乳酸的生成速度隨NADH的濃度增大而增大，當(dāng)NADH濃度增大到0.2 mmol/l后，體系的反應(yīng)速度趨于平緩[42]。這些研究表明，NADH可對(duì)微生物細(xì)胞內(nèi)的有機(jī)酸代謝路徑和代謝速度進(jìn)行有效調(diào)控。

那么，NADH對(duì)瘤胃微生物酸代謝有沒(méi)有調(diào)控作用？許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)激和高產(chǎn)奶牛日糧中添加NAD＋前體——煙酸，可提高奶牛產(chǎn)奶量（Jaster等，1983）[43]。添加一定量煙酸可促進(jìn)育肥牛盡快適應(yīng)育肥期日糧，顯著提高日增重與飼料利用率，在高精料飼糧中添加煙酸能提高公牛和羔羊的生產(chǎn)性能（李新建等，2006）[44]。我們的實(shí)驗(yàn)也表明，在育肥肉牛高精料日糧（精粗比8：2）中單獨(dú)添加400mg/kg干物質(zhì)的煙酸，所取得的效果與添加1%碳酸氫鈉的對(duì)照組差異不顯著。另有研究表明，添加酵母可緩解瘤胃酸中毒，也可能是因?yàn)榻湍钢泻胸S富的煙酸，可大量生成NAD＋（Martin等，1992；Chaucheryras等，1995）[45-46]。

NADH輔因子調(diào)控瘤胃微生物酸代謝的機(jī)理，目前仍然不是十分清楚。根據(jù)目前的研究，NADH輔因子調(diào)控瘤胃微生物酸代謝可能的機(jī)理如圖1所示。

圖1 NADH與瘤胃酸代謝的關(guān)系（瞿明仁等，2010）

4 展望

通過(guò)營(yíng)養(yǎng)措施調(diào)控瘤胃發(fā)酵，防止瘤胃酸中毒發(fā)生，是提高反芻動(dòng)物生產(chǎn)性能的重要手段。由于抗生素和化學(xué)添加劑的致畸、致癌、致突變作用，藥物殘留等問(wèn)題，以及歐盟禁用抗生素法令的頒布實(shí)施，尋找新的天然替代品，采用更有效的方法調(diào)控瘤胃的發(fā)酵將成為反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)的研究熱點(diǎn)。

21世紀(jì)以來(lái)，以NADH等輔因子手段調(diào)控復(fù)雜微生物代謝網(wǎng)絡(luò)的技術(shù)方法在工業(yè)發(fā)酵上的研究越來(lái)越多，應(yīng)用也越來(lái)越廣。借助NADH輔因子調(diào)控手段對(duì)龐大復(fù)雜的瘤胃微生物代謝網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行調(diào)控，將有助于我們從生化角度進(jìn)一步理解瘤胃酸中毒的發(fā)生機(jī)制，并采取更有效的方法防制瘤胃酸中毒，其研究與應(yīng)用前景十分廣闊。

但是，與單純的工業(yè)發(fā)酵相比，由于瘤胃微生物種類更多，代謝路徑更復(fù)雜，采用NADH輔因子調(diào)控手段，對(duì)瘤胃酸代謝進(jìn)行調(diào)控，還有許多工作要做，有許多困難要克服，因此，希望廣大科技工作者共同努力，攻克瘤胃酸代謝調(diào)控的難題，為豐富和發(fā)展反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)理論作出自己的貢獻(xiàn)。

[1]Owens F N,Secrist D S,Hill W J,et al.Acidosis in cattle:A review[J].J.Anim.Sci.,1998,76:275-286.

[2]Martin S A,Al-Khaldi S F,Evans J D,et al.Potential for manipulating gastrointestinal microflora:alternatives to antibiotics and ionophores[J].Recent Research Develop Microbio,1999(3):441-454.

[3]Krehbiel C R,Britton R A,Harmon D L,et al.The effects of ruminal acidosis on volatile fatty acid absorption and plasma activities of pancreatic enzymes in lambs[J].J.Anim.Sci.,1995,73:3111-3121.

[4]Nocek J E.Bovine acidosis:implications on laminitis[J].J.dairy Sci.,1997,80:1005-1028.

[5]Enenmark J M,Jrgensen R J,Enemark.Rumen acidosis with special emphasis on diagnostic aspects of subclinical rumen acidsis:a review[J].Vet Zootec,2002,20:16-29.

[6]Martin S A.Manipulation of ruminal fermentation with organic acids:A review[J].J.Anim.Sci.,1998,76:3123-3132.

[7]Oetzel G R,Nordlund K V,Garrett E F.Effect of ruminal pH and stage of lactation on ruminal lactate concentration in dairy cows[J].J.Dairy Sci.,1999,82(Suppl.1):38.

[8]Darren W B.Effect of the number of step-up diets fed during grain adaptation on acidosis and feeding behaviour of feedlot cattle[D].Master thesis,the University of Saskatchewan,2005.

[9]常影.閹牛亞急性瘤胃酸中毒發(fā)病機(jī)理和飼喂高油玉米籽粒緩解效果的研究[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

[10]胡紅蓮.奶山羊亞急性瘤胃酸中毒營(yíng)養(yǎng)生理機(jī)制的研究[D].呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[11]肖訓(xùn)軍，孟慶翔.反芻動(dòng)物瘤胃酸中毒及其防制措施[J].中國(guó)動(dòng)物保健，2000，2（3）：11-12.

[12]李祥輝，苗樹(shù)君，連學(xué)昭.反芻動(dòng)物瘤胃酸中毒的防治[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2006(6)：72-73.

[13]Stock R,Britton R A.Acidosis in feedlot cattle.proceedings of scientific update on rumen-sin/tylan for the professional feedlot consultant[C].Elanco Animal Health,Indiannapolis,1993:A1-A13.

[14]Beauchemin K A.Ruminal acidosis in dairy cows:balancing physically effective fiber with starch availability[C].proceedings of florida ruminant nutrition symposium.2007:16-27.

[15]Goad D W,Goad C L,Nagaraja T G.Ruminal microbial and fermentative change associated with experimentally induced subacute acidosis in steers[J].J.Anim.Sci.,1998,76:234-241.

[16]楊鳳.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)（第二版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[17]Harmon D L,Britton R A,Prior R L,et al.Net portal absorption of lactate and volatile fatty acids in steers experiencing glucoseinduced acidosis or fed a 70%concentrate diet adlibitum[J].J.Anim.Sci.,1985,60:560-569.

[18]Brossard L,Martin C,Durand F C,et al.Protoza involved in butyric rather than lactic fermentative pattern during latent acidosis in sheep[J].Reprod.Nutr.Dev.,2004,44:195-206.

[19]段得賢，賀信恒，曹光榮.奶山羊過(guò)食谷物中毒的研究[J].西北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1981(3)：21-33.

[20]李光輝譯.反芻動(dòng)物瘤胃酸中毒的發(fā)病機(jī)制及分類[J].國(guó)外畜牧科技，1999，26（5）：42-43.

[21]伍一軍，韓正康，陳杰.用緩沖劑調(diào)控奶牛瘤胃消化代謝及其泌乳性能的研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1990，13（S1）：88-94.

[22]Cooper R,Klopfenstein T.Effect of rumensin and feed intake variation on ruminal pH[A].Scientific Update on Rumensin/Tylan/Mycotil for the Professional Feedlot Consultant[C].Elanco Animal Health,Indianapolis,1996:A1-A14.

[23]Yang C M,Russell J B.The effect of monensin supplementation on ruminal ammonia accumulation in vivo and the numbers of amino acid fermenting bacteria[J].J.Anim.Sci.,1993,71(12):3470-3476.

[24]BergenWG,BatesDB.Ionophores:theireffectonproduction efficiency and mode of action[J].J.Anim.Sci.,1984,58:1465-1483

[25]Busquet M,Calsaimglia S,Ferret A,et al.Effects of cinnamaldehyde and garlic oilon rumen microbial fermentation in adual flow continuous culture[J].J.Dairy Sci.,2005,88:2508-2516.

[26]Martin S A,Streeter M N,Nisbet D J,et al.Effects of DL-malate on ruminal metabolism and performance of cattle fed a high concentrate diet[J].J.Anim.Sci.,1999,77(4):1008-1015.

[27]Kung L J,Hession A O.Preventing in vitro lactate accumulation in ruminal fermentations by inoculation with Megasphaera elsdenii[J].J.Anim.Sci.,1995,73:250-256.

[28]Ghorbani G R,Morgavi D P,Beauchemin K A,et al.Effects of bacterial direct-fed microbials on ruminal fermentation,blood variables,and the microbial populations of feedlot cattle[J].J.Anim.Sci.,2002,80(7):1977-1985.

[29]Newbold C J,Wallace R J,McIntosh F M.Mode of action of the yeast Saccharomyces cerevisiaeas a feed additive for ruminants[J].Br.J.Nutr.,1996,76(2):249-261.

[30]Limin K J.Direct-fed microbials for lactating dairy cows proceedings [M].12th Annual Florida Ruminant Nutrition Symposium,2001,22-28.

[31]Chaucheyras F,Fonty G,Bertin G.Effects of a strain of Saccharomyces cerevisiae (Levucell SC),a microbial additive for ruminants,on lactate metabolism in vitro[J].Can.J.Microbiol.,1996,42(9):927-933.

[32]張耿,毛勝勇,朱偉云.反芻動(dòng)物瘤胃酸中毒發(fā)病機(jī)制及其研究進(jìn)展[J].畜牧與獸醫(yī)，2005，37（12）：51-54.

[33]Busquet M,Calsamiglia S,Ferret A,et al.Plant extracts affect in vitro rumen microbial fermentation[J].J.Dairy Sci.,2006,89(2):761-771.

[34]張?jiān)獞c,肖訓(xùn)軍,孟慶翔.毛茛科植物提取物添加量對(duì)瘤胃微生物體外動(dòng)態(tài)發(fā)酵的影響[J].中國(guó)畜牧雜志，2007，43（5）：27-31.

[35]Busquet M,Calsamiglia S,Ferret A,et al.Effects of cinnamaldehyde and garlic oil on rumen microbial fermentation in a dual flow continuous culture[J].J.Dairy Sci.,2005,88(5):2508-2516.

[36]Garcia V,Catala P,Madrid J,et al.Potential of carvacrol to modify in vitro rumen fermentation as compared with monensin[J].Anim.,2007,1(5):675-680.

[37]Lila Z A,Mohammed N,Kanda S,et al.Effect of sarsaponin on rumen fermentation with particular reference to methane production in Vitro[J].J.Dairy Sci.,2003,86:3330-3336.

[38]Hugenholtz J,Kleerebezem M.Metabolic engineering of lactic acid bacteria:Overview of the approaches and results of pathway rerouting involved in food fermentations[J].Curropin Biotechnol,1999,10(5):492-497.

[39]Ying W.NAD(+)and NADH in cellular functions and cell death[J].Front Biosci,2006,11:3129-3148.

[40]王桂蘭，王益娜，馬江鋒，等.不同還原性碳源對(duì)重組大腸桿菌厭氧發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的影響[J].中國(guó)釀造，2009（3）：16-19.

[41]de Felipe F L,Kleerebezem M,de Vos W M,et al.Cofactor engineering:A novel approach to metabolic engineering in Lactococcus lactis by controlled expression of NADH oxidase[J].J.Bacteriol,1998,180(15):3804-3808.

[42]張鐵丹.Lb.paracasei HD 1.7合成L-乳酸的代謝調(diào)控及L-乳酸的提取純化[D].哈爾濱：黑龍江大學(xué)，2008.

[43]Jaster E H,Bell D F,Mcperson T A.Nicotinic acid and serum metabolite concent rations of lactating dairy cows fed supplemental niacin[J].J.Dairy Sci.,1983,66:1039-1045.

[44]李新建，高騰云，王永才.煙酸在反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，12(3)：133-135.

[45]Martin S A,Nisbet D J.Effect of direct-fed microbials on rumen microbial fermentation[J].J.Dairy Sci.,1992,75:1736-174.

[46]Chaucheryras F,Fonty G,Bertin G,et al.In vitroutilization by a ruminal acetogenic bacterium cultivated alone or in associationwith an Archeamethanogen is stimulated by a probiotic strain of Saccharomyces cerevisiae[J].Appl.Environ Micro.,1995,61:3466-3467.