拜激靈對(duì)鳊生長和運(yùn)輸應(yīng)激的緩解作用研究

黃玉萍 劉 濤 姚瑞清 鄭宗林 唐冬梅

鳊（Megalobrama amblycephala）隸屬于鯉形目，鯉科，鲌亞科，魴屬。江蘇無錫的宜興、常州的武進(jìn)等地主要以養(yǎng)殖鳊魚為主，據(jù)初步估計(jì)，其鳊魚的產(chǎn)量占全國鳊魚總產(chǎn)量的20%之多。但是近年來，隨著養(yǎng)殖密度的不斷提高，養(yǎng)殖環(huán)境逐步惡化，鳊魚的病害也越來越多，給鳊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失，不少養(yǎng)殖戶“聞病色變”。病害的發(fā)生與病源、宿主、環(huán)境以及三者相互作用密切聯(lián)系，而目前的養(yǎng)殖模式使鳊魚養(yǎng)殖面臨更為復(fù)雜的自然和人為干擾，復(fù)雜的應(yīng)激因子給鳊帶來不同程度的脅迫作用，致使其對(duì)病原的敏感性增高，常常成為病害發(fā)生和流行的重要誘因。與此同時(shí)，長途運(yùn)輸過程中鳊也受到較大的應(yīng)激，常導(dǎo)致應(yīng)激性充血、脫粘等嚴(yán)重后果。血漿或血清中的皮質(zhì)醇激素含量隨應(yīng)激強(qiáng)度呈現(xiàn)規(guī)律性變化，被廣泛用來衡量應(yīng)激水平的重要指標(biāo)。血液理化指標(biāo)也能很好地反映機(jī)體生理狀態(tài)，并用于魚體病理的診斷。因此，試驗(yàn)擬判斷在飼料中補(bǔ)充不同劑量的鳊抗應(yīng)激產(chǎn)品——拜激靈，測(cè)定經(jīng)人工模擬運(yùn)輸后血液皮質(zhì)醇激素指標(biāo)和血液生化指標(biāo)的變化，探討抗應(yīng)激產(chǎn)品對(duì)鳊養(yǎng)殖生產(chǎn)和運(yùn)輸中的應(yīng)激緩解作用，為養(yǎng)殖生產(chǎn)提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)用鳊為當(dāng)年人工繁殖的同一批苗種，購自重慶市榮昌縣梅石壩漁場(chǎng)，試驗(yàn)在西南大學(xué)水產(chǎn)系室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行。試驗(yàn)前暫養(yǎng)1周，每天早、中、晚飼喂對(duì)照組飼料3次至飽食。試驗(yàn)采用的養(yǎng)殖設(shè)施為長方形玻璃缸(總體積0.4 m3，水體體積0.2 m3)。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間均連續(xù)充氧（除投餌期間外）。

試驗(yàn)開始前停飼24 h。選擇體重接近(3.7±0.3)g、體格健壯的幼魚1 200尾，隨機(jī)分配于12個(gè)養(yǎng)殖缸，每缸100尾，分別為對(duì)照組、BJ1組（500mg/kg拜激靈（英文縮寫為 BJL）、BJ2組（1 000mg/kg BJL）和BJ3組（2 000mg/kg BJL）。每天早、中、晚投喂3次，至飽食，投喂結(jié)束后 30 min，吸出池內(nèi)殘餌及糞便。養(yǎng)殖試驗(yàn)共進(jìn)行42 d，試驗(yàn)期間水溫（25.0±1.0）℃，pH 值（7.5±0.5），溶氧≥5mg/l，氨氮＜0.2mg/l，余氯＜0.1mg/l。

1.2 試驗(yàn)飼料

飼料由西南大學(xué)水產(chǎn)系水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)教研室制作。配制飼料前，飼料原料均經(jīng)粉碎機(jī)粉碎并全部過60目篩，按配方要求均勻混合成粉料，在30℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥24 h，置冰箱0℃保存。“拜激靈（BJL）”產(chǎn)品由拜耳（四川）動(dòng)物保健有限公司提供。試驗(yàn)飼料具體配方組成和營養(yǎng)成分分析見表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平

1.3 生長性能相關(guān)指標(biāo)

1.3.1 生長速度

42 d養(yǎng)殖試驗(yàn)后，以魚質(zhì)量的鮮重變化、增重率和特定生長率等表示生長速度。增重率(%)＝[(Wt-W0)/W0]×100；特定生長率(%/d)＝[(LnWt-LnWo)/d]×100，W0和Wt分別表示養(yǎng)殖開始和結(jié)束時(shí)的魚體質(zhì)量（g）。

1.3.2 飼料利用效率

以飼料系數(shù)和蛋白效率表示，飼料系數(shù)=飼料投喂量/魚體增重量；蛋白效率（%）=(Wt-W0)/F×P，F(xiàn) 指飼料消耗量，P指飼料蛋白質(zhì)含量。

1.4 抗應(yīng)激機(jī)能測(cè)定

1.4.1 應(yīng)激試驗(yàn)設(shè)計(jì)

鳊養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后停止喂食24 h。BJ1、BJ2和BJ3組的各重復(fù)缸中分別取出5尾魚放入魚苗運(yùn)輸袋中充入純氧并打包；對(duì)照組則各重復(fù)缸中分別取出10尾，每個(gè)運(yùn)輸袋中放入5尾鳊充入純氧并打包（其中1袋為陰性對(duì)照，不運(yùn)輸），用皮卡車運(yùn)輸2 h。運(yùn)輸后立即將魚快速深度麻醉后采集血樣。運(yùn)輸過程中皮卡車平均速度為50～60 km/h。

1.4.2 血液樣品的制備

運(yùn)輸應(yīng)激后，用1 ml注射器從尾靜脈采集試驗(yàn)魚的血液，全血不加抗凝劑于4℃下放置2 h，待血液明顯分層后以2 000 r/min離心30 min后分離，收集血清，放于-18℃低溫冰箱中暫存，用于血液生化指標(biāo)和血清皮質(zhì)醇激素含量的測(cè)定。

1.4.3 血清皮質(zhì)醇含量測(cè)定

采用放射免疫分析法，試劑盒由南京建成生物技術(shù)研究所提供。

1.4.4 血液生化指標(biāo)的測(cè)定

所有生化指標(biāo)在奧林巴斯（OLYMPUS）AU1000全自動(dòng)生化分析儀上完成。血液生化指標(biāo)測(cè)定方法見周玉等（2002）介紹的方法進(jìn)行。每批血樣皮質(zhì)醇含量指標(biāo)測(cè)定在4 h內(nèi)完成，血液生化指標(biāo)在24 h內(nèi)完成。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，先對(duì)數(shù)據(jù)作單因素方差分析(ANOVA)，處理間若有顯著差異，再作Duncan's法多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 對(duì)生產(chǎn)性能的影響

BJL以500～2 000mg/kg劑量添加于飼料后，42 d養(yǎng)殖試驗(yàn)鳊的生長性能指標(biāo)見表2。從表2中可以看出，BJL顯著提高了鳊的增重率和特定生長率（P＜0.05），但各 BJ組之間無顯著差異（P＞0.05）；蛋白效率也因?yàn)锽JL的補(bǔ)充而顯著提高，隨著BJL補(bǔ)充量的增加，其蛋白效率有進(jìn)一步提高趨勢(shì)，BJ3組較對(duì)照組和BJ1組均有顯著提高（P＜0.05），而飼料系數(shù)則與蛋白效率呈完全相反的趨勢(shì)，得到有效降低；BJL補(bǔ)充對(duì)鳊成活率較對(duì)照組顯著提高（P＜0.05）。

表2 BJL對(duì)鳊生長性能的影響

2.2 運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)鳊的影響（見圖1a～圖1h）

第21 d：經(jīng)過2 h的運(yùn)輸后，除陽性對(duì)照組有1尾死亡外，陰性對(duì)照、BJL組均未出現(xiàn)死亡。運(yùn)輸過程中，陽性對(duì)照組魚在氧氣袋中隨水波的動(dòng)蕩下表現(xiàn)出煩躁不安，快速游動(dòng)，用頭不斷沖撞袋壁，試圖逃離；BJL組的鳊在運(yùn)輸初期也表現(xiàn)出竄出水面等較激烈反應(yīng)，持續(xù)約15～20 min即恢復(fù)平靜，靜臥袋底或輕輕游動(dòng)。運(yùn)輸結(jié)束后，皮質(zhì)醇激素含量檢測(cè)結(jié)果表明，運(yùn)輸應(yīng)激后的鳊血清皮質(zhì)醇激素含量試驗(yàn)組較陰性對(duì)照組均顯著提高（P＜0.05），但BJL組的血清皮質(zhì)醇激素含量比陽性對(duì)照組顯著降低（P＜0.05）（見圖1）。第42 d，其趨勢(shì)與第21 d相同。

第 21 d：鳊血清總蛋白（TP）和白蛋白（AP）測(cè)定結(jié)果表明，各運(yùn)輸應(yīng)激組鳊血清TP和AP均較陰性對(duì)照組顯著提高（P＜0.05），但其中BJL組的TP和AP較陽性對(duì)照顯著降低（P＜0.05）。

陽性對(duì)照組的鳊血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和堿性磷酸酶（ALP)較陰性對(duì)照組顯著提高（P＜0.05），但BJ2和BJ3的血清ALT和ALP與陰性對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05），比陽性對(duì)照則顯著降低（P＜0.05）。

第42 d：各組間TP、AP、ALT和ALP變化趨勢(shì)與第21d基本一致。不同之處在于BJ2和BJ3的TP，及BJ3的AP與陰性對(duì)照無顯著差異（P＞0.05）。

圖1 鳊運(yùn)輸應(yīng)激前后血清皮質(zhì)醇和生化指標(biāo)的變化

第21 d：除BJ3外，運(yùn)輸組的魚血糖（GLU）含量與陰性對(duì)照相比有顯著增加（P＜0.05），但均顯著低于陽性對(duì)照組（P＜0.05），BJL各組間GLU無顯著差異（P＞0.05）。

陽性對(duì)照組的血清甘油三酯（TG）和血清總膽固醇（TC）較陰性對(duì)照組顯著提高（P＜0.05），BJL補(bǔ)充組的血清TG和TC則與陰性對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。

第42 d：GLU在各組間的變化趨勢(shì)與第21 d同；BJL補(bǔ)充組的血清TG和TC與陰性對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

試驗(yàn)飼料中補(bǔ)充的拜激靈是以抗應(yīng)激為主要功效的產(chǎn)品，但在本試驗(yàn)中表現(xiàn)出明顯的促長性能。BJL的補(bǔ)充顯著提高了鳊的增重率和特定生長率，但500、1 000和2 000mg/kg的補(bǔ)充量之間沒有顯著差異；BJL的補(bǔ)充能顯著提高鳊對(duì)飼料蛋白的利用效率，且隨補(bǔ)充量的增高而增高，而飼料系數(shù)則與蛋白效率相反，呈逐步降低趨勢(shì)；BJL補(bǔ)充組的鳊成活率較對(duì)照組顯著提高。試驗(yàn)認(rèn)為這可能包括如下2個(gè)因素：①產(chǎn)品中包含有維生素和礦物質(zhì)等組分。在實(shí)驗(yàn)室水族缸中養(yǎng)殖，水體幾乎不能提供任何營養(yǎng)元素，拜激靈中的成分可能給鳊提供更加充裕的營養(yǎng)素；②室內(nèi)養(yǎng)殖受應(yīng)激的因素很多，譬如燈光、投喂、換水、人員走動(dòng)等，可能是拜激靈的補(bǔ)充降低了魚類對(duì)這些因素的應(yīng)激，提高其健康狀況，從而間接促進(jìn)生長。

由對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生有害的應(yīng)激因子引起的非特異性、生理性緊張狀態(tài)的現(xiàn)象，稱為應(yīng)激（stress）。當(dāng)魚類受到刺激因子的作用后，其下丘腦-垂體-腎間組織軸(HPI)會(huì)迅速作用，促進(jìn)促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）的釋放，從而導(dǎo)致頭腎細(xì)胞皮質(zhì)醇激素的合成與釋放。皮質(zhì)醇激素并不被儲(chǔ)存起來而是釋放到血液循環(huán)系統(tǒng)中，因此，血液中皮質(zhì)醇濃度可以作為衡量魚應(yīng)激強(qiáng)度的指標(biāo)。

試驗(yàn)顯示，鳊對(duì)外界環(huán)境（運(yùn)輸?shù)龋└淖兙哂忻黠@的應(yīng)激反應(yīng)。將鳊置于塑料袋中運(yùn)輸產(chǎn)生了明顯的應(yīng)激刺激，皮質(zhì)醇激素快速升高到原來的5倍以上。表明鳊并不能適應(yīng)這種新的環(huán)境，處于較高的應(yīng)激狀態(tài)。運(yùn)輸情況下，鳊不僅處于陌生的環(huán)境，更重要的是由車體的顛簸造成水波的震蕩以及魚體間、容器與魚體間的撞擊對(duì)鳊的刺激更加強(qiáng)烈。拜激靈的補(bǔ)充雖然沒有將皮質(zhì)醇激素含量降低到陰性對(duì)照的水平，但仍較陽性對(duì)照有明顯的緩解。

由于血液生化指標(biāo)的變化是以機(jī)體組織細(xì)胞機(jī)能改變和新陳代謝變化為基礎(chǔ)的，血液生化指標(biāo)是反映動(dòng)物運(yùn)輸應(yīng)激時(shí)體內(nèi)物質(zhì)代謝和某些組織器官機(jī)能狀態(tài)變化的一個(gè)重要特征。丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)主要存在于肝臟組織，是肝臟損傷的重要指示酶，運(yùn)輸后鳊血清ALT的升高表明肝代謝極度活躍。運(yùn)輸后ALT顯著增高表明運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)鳊肝臟造成了一定損傷。損傷的原因可能是皮質(zhì)醇作用的結(jié)果。堿性磷酸酶（ALP）主要用于肝臟疾病時(shí)，肝細(xì)胞過度制造ALP，經(jīng)淋巴道和肝竇進(jìn)入血液，同時(shí)由于肝內(nèi)膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清ALP明顯升高。但飼料中補(bǔ)充拜激靈后，BJL補(bǔ)充組的鳊血液中ALT和ALP都有非常顯著的下降，可見拜激靈對(duì)于緩解肝損傷有明顯效果。

恒定的血糖濃度對(duì)維持魚類正常生命活動(dòng)有重要的作用。運(yùn)輸后血糖有明顯的增高，這與大西洋鮭運(yùn)輸后的血糖變化相同。這可能與運(yùn)輸刺激后皮質(zhì)醇激素增高有關(guān)。皮質(zhì)類固醇可使機(jī)體各組織對(duì)葡萄糖的利用率降低，同時(shí)使肝臟的糖元異生作用增強(qiáng)，結(jié)果使血糖濃度升高。拜激靈有維持血糖穩(wěn)定的作用。同時(shí)，拜激靈的補(bǔ)充對(duì)于血液甘油三酯和總膽固醇也有維持穩(wěn)定的功效。

4 小結(jié)

綜上所述，鳊在運(yùn)輸?shù)葟?qiáng)應(yīng)激刺激因子作用下，皮質(zhì)醇激素含量迅速升高，從而引起對(duì)機(jī)體新陳代謝和生理機(jī)能的改變。運(yùn)輸應(yīng)激的刺激可能導(dǎo)致鳊肝臟等組織的損傷，造成機(jī)體不可逆轉(zhuǎn)的生理變化，從而加速了魚體的死亡，使得鳊的運(yùn)輸困難。拜激靈的補(bǔ)充可以有效提高鳊的抗應(yīng)激能力，降低應(yīng)激對(duì)肝臟等組織的損傷。

11篇，刊略，需者可函索）