烏司他丁加甲基潑尼松龍對大鼠急性壞死性胰腺炎血清淀粉酶及細(xì)胞因子的影響

段志學(xué)

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)，特別是急性重癥胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)，實質(zhì)上是一種全身性炎癥反應(yīng)綜合征，炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子在其發(fā)病機制中的作用受到越來越多的研究者的重視[1]。AP的發(fā)病機制相當(dāng)復(fù)雜，至今尚未完全闡明[2]。因此，筆者根據(jù)近年來對ANP發(fā)病機制的最新研究進展，應(yīng)用烏司他丁和甲基強的松龍治療ANP大鼠模型，探討其藥理作用機理，為ANP臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及材料 雄性Wistar大鼠150只，體重240～270g，由溫州醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供；注射用烏司他丁為廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品(批號：H19990134，1×105U/瓶)；甲基潑尼松龍注射液為Pfizer Manufacturing Belgium NV(輝瑞投資有限公司)產(chǎn)品(批號：H20060054，每支40mg/瓶)；I淀粉酶試劑盒購自上海榮盛生物試劑廠；IL-6試劑盒購自南京建成生物工程研究所；TNF-а試劑盒購自上海森雄科技實業(yè)有限公司；酶標(biāo)儀為美國Bio-tekELx800公司產(chǎn)品。

1.2 分組及ANP動物模型 150只雄性大鼠隨機分成A、B、C、D、E 5組，每組30只，各組的體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)。用3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，腹部去毛，經(jīng)2%絡(luò)合碘消毒腹部皮膚，鋪無菌孔巾，取中上腹部正中切口。A組術(shù)中僅翻動胰腺，未作特殊處理，縫合腹部切口。其它組提起十二指腸，顯露胰膽管的全程，無創(chuàng)傷性動脈夾夾閉肝門區(qū)膽管，向胰管內(nèi)注射5%?；悄懰徕c，5min后可見整個胰腺出現(xiàn)明顯充血、水腫、片狀出血，證實ANP動物模型已建立成功，移去小動脈夾。B組按容積12.5ml/kg給予生理鹽水，C組按劑量20mg/kg、容積12.5ml/kg給予甲基潑尼松龍，D組按劑量10萬U/kg、容積12.5ml/kg給予烏司他丁，E組劑量同上。分別于術(shù)后2、6h從下腔靜脈抽血1ml。

1.3 血清樣品采集和處理 取靜脈血0.5ml，置入普通塑料試管中，4℃離心10min(2000r/min)，分離血清后置于EP管中，放入-20℃冰箱中保存，待測。

1.4 血清淀粉酶和細(xì)胞因子的檢測方法 ①血清淀粉酶檢測：取血清樣品待測液，經(jīng)淀粉-碘比色法分別測定660nm波長下測定管(加入血清樣品)和對照管(不含血清樣品)的吸光度(A)，計算淀粉酶活性。②血清IL-6、TNF-a測定：采用雙抗體夾心ABCELISA法檢測血清IL-6、TNF-a水平，按試劑盒說明書要求操作。

表1 5組2h、6h血清AMS、IL-6、TNF-α比較(±s)

表1 5組2h、6h血清AMS、IL-6、TNF-α比較(±s)

注：與A、C、D、E組比較，▲P＜0.05；與B、C、D組比較，*P＜0.05；與B、C組比較，#P＜0.05；與2h組比較，◇P＜0.05。

組別 n 血清淀粉酶(IU/ml) IL-6(ng/L) TNF-α(pg/ml)2h 6h 2h 6h 2h 6h A組 30 130.31±30.45* 131.40±29.14*◇ 13.24±1.21* 11.25±2.68*◇ 11.06±2.44* 49.89±1.75*◇B組 30 485.37±40.27▲ 621.48±53.57▲◇ 48.67±8.62▲ 92.68±15.47▲◇ 152.29±24.32▲ 186.57±31.24▲◇C組 30 375.70±71.83 449.10±43.80◇ 32.65±8.47◇ 63.28±9.86◇ 128.93±13.39 150.4±21.05◇D組 30 373.46±58.72 447.28±34.64◇ 31.84±5.41 62.51±10.37◇ 126.62±12.48 148.3±19.64◇E組 30 213.20±41.96# 342.60±53.43#◇ 21.58±5.67#◇ 51.23±9.47#◇ 60.56±8.17#◇ 95.92±4.42#◇

2 結(jié)果

血清淀粉酶和IL-6、TNF-α的檢測結(jié)果見表1。

3 討論

文獻(xiàn)報道[3]IL-6可由單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，參與到燒傷、膿毒癥、重大手術(shù)等機體的許多急性反應(yīng)。TNF-α早期升高后，可誘導(dǎo) IL-6、IL-8 及其自身的基因表達(dá)引起級聯(lián)反應(yīng)造成炎癥介質(zhì)的失控性釋放[4]。研究發(fā)現(xiàn)ANP模型大鼠與正常大鼠比較及模型大鼠的2h與6h組比較，AMS、IL-6、TNF-α均出現(xiàn)明顯升高(P＜0.05)，因此，IL-6、TNF-α在急性胰腺炎的發(fā)病中起重要作用。

烏司他丁是從人尿中分離純化出的一種糖蛋白,主要具有以下作用:(1)對多種蛋白酶、糖和脂水解酶的活性有明顯的抑制作用。(2)穩(wěn)定溶酶體膜,抑制溶酶體酶的釋放。(3)抑制炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放,從而減輕ANP后全身炎癥反應(yīng)并預(yù)防多器官功能損害。文獻(xiàn)報道[5]，早期應(yīng)用甲基強的松龍可以改善胰腺及胰周的微循環(huán)，能穩(wěn)定胰腺腺泡，抑制胰腺外分泌及胰腺對各種介質(zhì)的反應(yīng)和其他藥物配合達(dá)到抗炎、中和毒素、抑制壞死、復(fù)蘇瀕臨死亡的胰腺組織作用。實驗發(fā)現(xiàn)C組、D組、E組與B組比較AMS、IL-6、TNF-α均出現(xiàn)明顯下降(P＜0.05)。烏司他丁是一種蛋白酶抑制劑，能夠同時抑制胰蛋白酶、磷脂酶A2、透明質(zhì)酸酶、彈性蛋白酶等多種水解酶的活性[6]；糖皮質(zhì)激素甲基潑尼松龍可誘導(dǎo)IkB基因轉(zhuǎn)錄，從而增加IkB-α蛋白合成，抑制NF-κB向核內(nèi)的移位，減少細(xì)胞因子合成，阻斷機體免疫系統(tǒng)的激活[7]。實驗發(fā)現(xiàn)E組與B、C組比較AMS、IL-6、TNF-α均出現(xiàn)明顯下降(P＜0.05)，因此，聯(lián)合應(yīng)用烏司他丁和甲基潑尼松龍治療大鼠急性壞死性胰腺炎比單獨用藥效果好，可有效的抑制AMS、IL-6、TNF-a的分泌、釋放，改善ANP的預(yù)后，但有待于臨床實踐進一步研究證實。

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