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    白靈菇多糖液體發(fā)酵工藝的優(yōu)化*

    2010-08-08 02:17:30陳亞菲
    中國食用菌 2010年2期
    關(guān)鍵詞:白靈菇胞外氮源

    蘭 蓉,張 震,吳 迪,陳亞菲,馬 辰

    (北京電子科技職業(yè)學(xué)院,北京 100029)

    白靈菇又名阿魏蘑、阿魏菇,是一種野生名貴食(藥)用菌。白靈菇營養(yǎng)豐富,據(jù)科學(xué)測定,白靈菇含蛋白質(zhì)14.7%、碳水化合物43.2%、脂肪4.3%、粗纖維15.4%、灰分4.8%、多糖19%[1]。由于白靈菇生長在藥用植物阿魏上,因此白靈菇具有防癌、抗癌、防治老年人心血管病、婦科腫痛、兒童佝僂病等藥用功效[2]。白靈菇中的真菌多糖還有增強(qiáng)人體免疫力、調(diào)節(jié)人體生理平衡的作用[3]。目前白靈菇的生產(chǎn)多采用傳統(tǒng)的固體栽培方式,栽培周期長、生物轉(zhuǎn)化率低,難以滿足市場需求。采用液體培養(yǎng)方式發(fā)酵生產(chǎn)白靈菇,在短時間內(nèi)能產(chǎn)生大量的菌絲體和代謝產(chǎn)物,但白靈菇液體發(fā)酵方面的研究報道不多[4]。通過對白靈菇液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行篩選及優(yōu)化,旨在為白靈菇的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與設(shè)備

    1.1 材料

    白靈菇菌種:由北京薛瑞菌業(yè)公司提供;斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯20%、葡萄糖2.0%、瓊脂2.0%;液體種子培養(yǎng)基:馬鈴薯20%、葡萄糖2.0%;發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基:馬鈴薯20%、葡萄糖2.5%、(NH4)2SO40.5%,起始pH為6.5。

    試劑:葡萄糖、木糖、果糖、乳糖、蔗糖、NH4NO3、(NH4)2SO4、 NaNO3、 NH4Cl、酵母粉、蛋白胨、HCl、NaOH、蒸餾水、乙醇。

    1.2 設(shè)備

    超凈工作臺,北京市昌平長城空氣凈化工程公司,HZQ-Q;生化培養(yǎng)箱,廣東省醫(yī)療器械廠,LRH-250-A;高壓滅菌鍋,北京市永光明醫(yī)療器械廠,GMSX-280;恒溫?fù)u床,武漢瑞華儀器設(shè)備有限責(zé)任公司,HZ200L;離心機(jī),北京市金儀儀器制造有限公司,TDL-5;恒溫干燥箱,北京市東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司,HPG-9145。

    2 實驗方法

    2.1 培養(yǎng)方法

    2.1.1 斜面培養(yǎng)

    將大小約0.5 cm2的已活化斜面菌種接種到斜面培養(yǎng)基中,27℃培養(yǎng),直至長滿斜面培養(yǎng)基表面。

    2.1.2 液體種子制備

    250 mL三角燒瓶中裝入液體種子培養(yǎng)基100 mL,接種2塊~3塊約0.5 cm2大小的斜面菌種,置于恒溫?fù)u床,140 r·min-1、25℃培養(yǎng)6 d,無菌條件下用無菌長柄剪刀將搖瓶中菌球剪碎,得液體種子。

    2.1.3 搖瓶培養(yǎng)

    將液體種子按10%(體積比)接種量,接種于裝有100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中,并于25℃、140 r·min-1培 養(yǎng) 7 d[20]。

    2.2 測定方法

    胞外多糖含量的測定:發(fā)酵液3500 r·min-1離心15 min,留上清液備用。在上清液中加入95%乙醇至乙醇終濃度為70%,4℃下醇析過夜,離心后將得到的沉淀50℃真空干燥至恒重,稱重,即為多糖含量。

    2.3 培養(yǎng)基的單因素試驗

    通過上述搖瓶培養(yǎng)的方式,利用發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基,進(jìn)行單一碳源和氮源篩選實驗。

    2.3.1 碳源篩選實驗

    分別用乳糖、蔗糖、果糖和木糖取代發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖,在其中篩選出最適碳源。

    2.3.2 氮源篩選實驗

    分別用NH4NO3、NaNO3、NH4Cl、酵母粉和蛋白胨取代發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的 (NH4)2SO4,在其中篩選出最適的氮源。

    2.4 培養(yǎng)條件的單因素試驗

    2.4.1 接種量篩選試驗

    在發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別接種2.5%、5%、10%、15%和20%的液體種子,25℃、140 r·min-1搖床培養(yǎng) 7 d,篩選出最適接種量。

    2.4.2 裝液量篩選試驗

    在250 mL的錐形瓶中,分別裝入 60 mL、90 mL、120 mL、150 mL、180 mL的發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基,均接種10%的液體種子,25℃、140 r·min-1搖床培養(yǎng)7 d,篩選出最適裝液量。

    2.4.3 培養(yǎng)時間篩選試驗

    100 mL發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中接種10%的液體種子,25℃、 140 r·min-1搖床培養(yǎng) 7 d,分別培養(yǎng) 5 d、 6 d、 7 d、8 d、9 d,篩選出最適培養(yǎng)時間。

    2.4.4 pH篩選試驗

    分別將發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基的起始pH調(diào)為4.5、5.0、5.5、6.0、 6.5、 7.0、 8.0,接種 10%,25℃、 140 r·min-1搖床培養(yǎng)7 d,篩選出最適pH。

    2.5 正交試驗

    根據(jù)上述單因素實驗結(jié)果,以白靈菇胞外多糖為指標(biāo),安排正交試驗,以進(jìn)一步優(yōu)化白靈菇液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件,具體的因素和水平見表1和表2。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 培養(yǎng)基的單因素實驗結(jié)果

    3.1.1 碳源篩選實驗

    表1 液體發(fā)酵培養(yǎng)基的正交試驗因素水平表

    表2 液體發(fā)酵培養(yǎng)條件的正交試驗因素水平表

    碳源對胞外多糖產(chǎn)量的影響結(jié)果見表3。

    表3 碳源單因素實驗結(jié)果

    從表3可看出,5種碳源中葡萄糖的效果最好,胞外多糖產(chǎn)量達(dá)到最高值,果糖次之,木糖最差。

    3.1.2 氮源篩選試驗

    氮源對胞外多糖產(chǎn)量的影響結(jié)果見表4。

    表4 氮源單因素實驗結(jié)果

    從表4可看出,6種氮源中蛋白胨的效果最好,胞外多糖產(chǎn)量達(dá)到最高值,酵母粉次之。

    3.2 培養(yǎng)條件的單因素實驗結(jié)果

    3.2.1 接種量篩選試驗

    5種接種量對胞外多糖產(chǎn)量的影響結(jié)果見表5。

    表5 接種量單因素實驗結(jié)果

    從表5可看出,隨著接種量的增加,多糖產(chǎn)量也隨之增加,說明在2.5%~20%范圍內(nèi),接種量越多越好。

    3.2.2 裝液量篩選試驗

    裝液量對胞外多糖產(chǎn)量的影響結(jié)果具體見表6。

    表6 裝液量單因素實驗結(jié)果

    從表6可看出,裝液量為120 mL時,胞外多糖產(chǎn)量最高。

    3.2.3 培養(yǎng)時間篩選試驗

    培養(yǎng)時間對胞外多糖產(chǎn)量的影響具體見表7。

    表7 培養(yǎng)時間單因素實驗結(jié)果

    從表7可看出,胞外多糖含量在第7天時達(dá)到最大值,超過第7天多糖含量開始下降。

    3.2.4 pH篩選試驗

    pH值對胞外多糖產(chǎn)量的影響結(jié)果見表8。

    表8 pH單因素試驗結(jié)果

    從表8可看出,pH值為6.5時效果最好,多糖產(chǎn)量達(dá)到最高值,pH7.0次之,4.0最差。

    3.3 培養(yǎng)基正交試驗結(jié)果

    白靈菇發(fā)酵最適培養(yǎng)基正交試驗結(jié)果與極差分析結(jié)果見表 9。

    表9 白靈菇搖瓶發(fā)酵最適培養(yǎng)基正交試驗結(jié)果與極差分析

    由表9極差值R可看出,各因素對白靈菇發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的影響先后順序是A>C>B,即碳源對胞外多糖產(chǎn)量的影響最大,無機(jī)鹽其次,氮源的影響相對最弱。從優(yōu)水平來看,白靈菇發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的最佳培養(yǎng)基組合為A3B3C1,而胞外多糖產(chǎn)量最多的培養(yǎng)基組合為A2B3C1,經(jīng)3次重復(fù)實驗驗證,得白靈菇發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的最佳培養(yǎng)基組合為A2B3C1,即葡萄糖2%、蛋白胨0.75%、CaCl20.2%。

    3.4 培養(yǎng)條件正交試驗結(jié)果

    白靈菇發(fā)酵最適培養(yǎng)條件正交試驗結(jié)果與極差分析結(jié)果見表10。

    表10 白靈菇發(fā)酵最適培養(yǎng)條件正交試驗結(jié)果與極差分析

    由表10極差值R可看出,各因素對白靈菇發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的影響先后順序是A=D>B>C,即起始pH值和培養(yǎng)天數(shù)對胞外多糖產(chǎn)量影響最大,接種量其次,裝液量的影響相對最弱。從優(yōu)水平來看,白靈菇發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的最佳培養(yǎng)條件組合為A3B2C2D2,而胞外多糖產(chǎn)量最多的培養(yǎng)條件組合為A3B3C2D1,經(jīng)3次重復(fù)實驗驗證,得白靈菇發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的最佳培養(yǎng)條件組合為A3B3C2D1,即起始pH值7.0,接種量20%,裝液量120 mL,培養(yǎng)天數(shù)6 d。

    4 結(jié)論

    根據(jù)上述實驗結(jié)果,得出白靈菇液體發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖最佳培養(yǎng)基組合:葡萄糖2%、蛋白胨0.75%、CaCl20.2%;白靈菇液體發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖最佳培養(yǎng)條件為:起始pH值7.0,接種量20%,裝液量120 mL,培養(yǎng)天數(shù)6 d。

    [1]申進(jìn)文,閆永先.白阿魏蘑菌種培養(yǎng)基篩選試驗[J].食用菌,2000(20):28.

    [2]林杰.白靈菇栽培技術(shù)要點[J].中國食用菌,2000,19(5):28-29.

    [3]陳忠純.阿魏側(cè)耳的栽培技術(shù)[J].干旱區(qū)研究,1994,11(2):65-68.

    [4]趙永勛.食藥用菌液體發(fā)酵的現(xiàn)狀和展望[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù), 2004,24(3):111-114.

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