復(fù)方銀杏葉口服液的質(zhì)量控制方法研究

張建華 周金彩*

銀杏葉制劑用于腦部、周圍血管血液循環(huán)障礙疾病及器質(zhì)性癡呆等癥的治療[1]。復(fù)方銀杏葉口服液是我們開(kāi)發(fā)的醫(yī)院制劑，由銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)提取物和人參浸膏、五味子提取物等組成，主要含有銀杏總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯，人參總皂苷、五味子素等活性成分。我們參照有關(guān)文獻(xiàn)[2,3]，通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定銀杏總黃酮醇苷含量，建立復(fù)方銀杏葉口服液的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Waters Alliance高效液相色譜儀（美國(guó) Waters公司）；對(duì)照品：槲皮素（Q）（批號(hào)：100081-200406）、山柰素（K）（批號(hào)：110861-200606）、異鼠李素（I）（批號(hào) ：110860-200407）（由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；供試品：復(fù)方銀杏葉口服液（自制，批號(hào)20080311，含總黃酮醇苷不得少于2.8%）；甲醇為色譜純；試劑均為分析純；水為注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖1 黃酮醇苷高效液相色譜

填充劑：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱（4.6 mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸（50∶50） ；檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量10μL。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的配制

分別精密稱取Q、K、I對(duì)照品適量，加甲醇溶解配制成每1mL分別含30、30、20μg的混合溶液，搖勻，用0.45μm濾膜濾過(guò)，取濾液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制

精密吸取供試品2.5mL（相當(dāng)于總黃酮醇苷9.0mg），加甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）的混合溶液25mL，置水浴中加熱回流30min，放冷，轉(zhuǎn)移并定容50mL量瓶中，搖勻，用0.45μm濾膜濾過(guò)，取濾液，作為供試品溶液。

2.4 銀杏總黃酮醇苷測(cè)定法

分別精密吸取取銀杏總黃酮醇苷對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，對(duì)照品、供試品色譜圖，見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，Q、K、I色譜峰分離良好（R＞1.5）。

2.5 線性關(guān)系

精密吸取對(duì)照品溶液2、4、8、12、16、20μL，按上述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（X）（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照品3組分的回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照品的回歸方程和相關(guān)系數(shù)

2.6 精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，依上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)試，重復(fù)5次，測(cè)得Q、K、I峰面積RSD分別為1.54%、1.85%、1.63%。

取同一份供試品溶液依次在0、2、4、8、12、24、48 h 測(cè)定測(cè)得Q、K、I峰面積RSD分別為1.13%、1.28%、1.03%，表明供試品溶液在室溫下48h內(nèi)穩(wěn)定。

取同一批復(fù)方銀杏葉口服液，按供試品制備方法平行制備6份，測(cè)得Q、K、I峰面積RSD分別為1.24%、1.15%、1.09%，表明該方法的重復(fù)性符合含量測(cè)定要求。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

分別精密吸取已知含量的供試品0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80mL，各精密加入對(duì)照品溶液20mL，按“2.3”項(xiàng)下方法配制，搖勻。依上述色譜條件測(cè)試，精密吸取10μL進(jìn)樣，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.8 供試品含量測(cè)定[2,4]

精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算含量，分別計(jì)算Q、K、I的含量，銀杏總黃酮醇苷含量=（Q含量+K含量+I含量）×2.51，供試品1mL含銀杏總黃酮醇苷不得少于3.6mg。

3 討 論

復(fù)方銀杏葉口服液主要含有銀杏總黃酮醇苷、萜類內(nèi)酯、人參總皂苷等活性成分，供試品經(jīng)鹽酸水解法前處理，采用高效液相色譜法測(cè)定銀杏總黃酮醇苷，外標(biāo)法計(jì)算含量，Q、K、I色譜峰分離良好（R＞1.5），供試品其他組分對(duì)Q、K、I均無(wú)干擾。本方法重現(xiàn)性好，敏感度高。因此，通過(guò)測(cè)定銀杏總黃酮醇苷含量可以作為復(fù)方銀杏葉口服液的經(jīng)驗(yàn)性質(zhì)量控制方法。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

[1]Allard M. Treatment of old age disorders with Ginkgo biloba extrat[M]//. In: Funfgeld EW,ed. Recent results in pharmacology and clinic. Berlin: Springer –Verlay,1988:201-211 .

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.一部[M].北京:北京工業(yè)出版社,2005:281-282.

[3]張蕾,陳驍鵬,董小平.高效液相色譜法測(cè)定銀杏葉膠囊含量[J].江蘇藥學(xué)與臨床研究雜志,2004,12(1):29-32.

[4]俞曼雷,謝德隆,胡馨,等.高效液相色譜法測(cè)定銀杏葉制劑中黃酮苷含量[J].中藥新藥與臨床藥理,1998,9(1):45-47.