茶多酚對(duì)肝組織的抗氧化作用研究①

陳時(shí)宏

(廈門醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 福建廈門 361008)

我們?nèi)粘z取的茶葉,其中的成分茶多酚(tea polyphenols,TPs)具有極強(qiáng)的清除自由基的能力和顯著的抗氧化活性。在Fenton試劑的作用下,組織勻漿產(chǎn)生的自由基*OH可引起亞細(xì)胞成分與膜過氧化,生成過氧化脂質(zhì)(lipoperoxides,LPO)。自由基引發(fā)的病理和生化改變體現(xiàn)在多方面,包括肝臟的酶外漏和ATPase活性降低等。CCl4在肝臟中會(huì)激活肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中NADPH-Cyto P-450系統(tǒng),形成*CC13,從而損傷肝細(xì)胞并引起血清谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)的升高[1]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合體內(nèi)外模型,來評(píng)價(jià)茶多酚對(duì)肝組織受自由基損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑

含70%兒茶素(catechins,MW=281.36)的茶多酚為淺棕黃色粉末,由南京藥物所植化室提供。硫代巴比妥酸(thiobarbituric,TBA)，四乙氧基丙烷標(biāo)準(zhǔn)品等試劑由市面購(gòu)得。

1.2 儀器

721型分光光度計(jì),高速分散器,冷凍高速離心機(jī),電熱恒溫水浴鍋等。

1.3 動(dòng)物

昆明種小鼠[雌雄各半,體重(25±2)、gWistar大鼠[雌雄各半,體重(250±20)g],由中國(guó)藥科大學(xué)動(dòng)物中心提供。

圖1 茶多酚對(duì)連續(xù)3d腹腔注射0.1%CC14的小鼠的血清SGPT和肝臟LPO的影響n=10，(± s）.aP>0.05,cP<0.01vs normal;dP>0.05,fP<0.01vs model

1.4 方法

(1)CC14致小鼠肝損傷[2]。小鼠連續(xù)3d腹腔注射0.1%CC14(用花生油稀釋10mL/kg,每次在給予CC14前1h灌胃茶多酚20mg/kg(對(duì)照組以生理鹽水代替)。在末次CC14中毒后16h摘眼球取血,分離血清,采用金氏法測(cè)定血清谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(SGPT);并測(cè)定肝臟的LPO含量。

(2)Fenton反應(yīng)誘導(dǎo)肝勻漿的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)[3]。反應(yīng)溶液的終體積是0.55mL,內(nèi)含10%的CCl4毒化小鼠肝勻漿液0.2mL,不同濃度的茶多酚50L(終濃度分別為0.4、0.04和0.004mg/mL)或等體積的蒸館水,0.3mL Fenton試劑(FeSO4和H2O2)(正常對(duì)照組用等量的EDTA-Tris緩沖液代替)。用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定LPO,在532nm處測(cè)得吸收度;計(jì)算各管LPO的生成量和加入茶多酚后的抑制率。抑制率%=(LPOmodel-LPOTreated)/(LPOModel-LPONomal)×100%

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 對(duì)CC14致小鼠肝損傷的SGPT和LPO的影響

圖2 在小鼠的肝組織勻漿中,茶多酚對(duì)Fenton反應(yīng)所誘導(dǎo)的LPO生成的抑制作用。n=10，(±s).cP<0.01vs normal;dP>0.05,fP<0.01vs model

CC14中毒模型組小鼠血清中SGPT顯著升高(308±42)U/100mL,約是正常生理鹽水對(duì)照組(87±5)U/100mL的3.5倍(P<0.01)。茶多酚20mg/kg灌胃給藥組的SGPT(233±40)U/100mL有明顯減少(P<0.01)。(圖1)本實(shí)驗(yàn)中,CC14中毒模型組的肝組織LPO值(59.8±5.9)nmol/g wet tissue與正常組(57.9±4.1)nmol/gwet tissue比較并無(wú)顯著性差異(P>0.05),茶多酚20mg/kg灌胃給藥組對(duì)小鼠肝臟LPO含量(58.1±5.8)nmol/gwet tissue無(wú)明顯影響(P>0.05)(圖1)。

2.2 對(duì)Fenton反應(yīng)誘導(dǎo)的CC14中毒小鼠的肝勻漿脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的影響

在Fenton反應(yīng)體系中,模型組肝勻漿液LPO(491±61)nmol/g wet tissue增加約為正常對(duì)照組(130±24)nmol/gwet tissue的4倍(P<0.01)。0.4、0.04、0.004mg/mL的茶多酚對(duì)LPO的增加呈現(xiàn)顯著的濃度依賴性抑制作用(P<0.01),其抑制率分別為73.6%,49.6%和33.0%,IC50為1.1×10-4mol/L(圖2)。

3 討論

茶多酚是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱,其中兒茶素類主要由兒茶素(EC)、沒食子兒茶素(EGC)、兒茶素沒食子酸酯(ECG)、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)等幾種單體組成。茶多酚在茶葉中的含量一般在20%左右[4]。我們對(duì)茶多酚進(jìn)行了體內(nèi)外肝組織受自由基損傷的保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究,結(jié)果證明茶多酚在體內(nèi)外對(duì)肝組織均表現(xiàn)出一定程度的抗氧化作用。我們觀察到茶多酚在體外的抗氧作用優(yōu)于體內(nèi),這可能與茶多酚到達(dá)體內(nèi)自由基損害部位的有效濃度及藥物代謝等因素有關(guān)。

[1]Cai YJ,Ma LP,Hou LF,et al.Antioxidant effects of green tea polyphenols on free radical initiated peroxidation of rat liver microsomes[J].Chem Phys Lipids,2002,120(1～2):109～117.

[2]Hsu YW,Tsai CF,Chuang WC,et al.Protective effects of silica hydride against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice.[J].Food Chem Toxicol,2010,48(6):1644～1653.

[3]Wagner C,Fachinetto R,Dalla Corte CL,et al.Quercitrin,a glycoside form of quercetin,prevents lipid peroxidation in vitro[J].Brain Res,2006,1107(1):192～198.

[4]趙保路.Antioxidant effects of green tea polyphenols[J].科學(xué)通報(bào)(英文版),2003,48(4):315～319.