魚腥草不同部位提取物的抗菌抗病毒作用比較

王 健,史 玉,張永澤,李清梅,門金娥

(1.河北工程大學(xué) 教務(wù)處,河北邯鄲 056038;2.河北工程大學(xué) 醫(yī)學(xué)院,河北 邯鄲 056038;3.永年縣第一醫(yī)院,河北 邯鄲056000)

魚腥草(Houttuynia cordata)為三白草科蕺菜屬多年生草本植物,因全株有魚腥味而得名,適應(yīng)性廣,在我國(guó)南方各省廣泛分布。魚腥草營(yíng)養(yǎng)豐富,并具有多種藥理作用,已被國(guó)家衛(wèi)生部正式確定為“既是藥品,又是食品”的極具開發(fā)潛力的資源之一[1-2]。目前,魚腥草抑菌活性成分的提取,尚無(wú)統(tǒng)一的方法;魚腥草的藥用一般取地上部分,而占植株總鮮重30%的地下部分未被利用,對(duì)同一種魚腥草的葉、地上莖、地下莖抑菌和抗病毒作用差別研究尚未見公開報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)以水蒸氣蒸餾法,分別對(duì)葉、地上莖、地下莖進(jìn)行提取[3],并對(duì)金黃色葡萄球菌(Staphylococlusaureus)、大腸桿菌(Escheichia coli)、痢疾桿菌(Shigella dysenteroae)、酵母菌(Saccarom ycescerevisiae)進(jìn)行抑菌和抗病毒實(shí)驗(yàn),初步探討魚腥草葉、地上莖、地下莖各部分抑菌和抗病毒作用的差別。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)材料:魚腥草采于貴陽(yáng)市郊區(qū);葡萄糖,蔗糖,NaCl,NaOH均為分析純;瓊脂,牛肉膏,蛋白胨;四環(huán)素,華北制藥廠;金黃色葡萄球菌,大腸桿菌,痢疾桿菌,釀酒酵母菌A型流感病毒株(APPRP8P34),河北省疾病預(yù)防控制中心。

儀器:旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE540 YAMATO),培養(yǎng)箱(PW／10重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠),超凈工作臺(tái)(CCV—1311),高壓蒸汽滅菌器(SM—52),萬(wàn)分之一天平(AEG—220),pH酸度計(jì)(HM—205 TOA),冰箱(BCD—215),水浴鍋(BM400,YA2MATO)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

魚腥草抑菌活性成分的提取:取一定量新鮮魚腥草全株,洗凈并晾干表面水分,取葉(包括葉柄)、地上莖、地下莖(以形態(tài)學(xué)從上到下生根的第一個(gè)節(jié)為界)切成3mm的小片(段),各稱取50g入燒瓶,加蒸餾水500mL,接揮發(fā)油提取器,按文獻(xiàn)[3]所確定的最佳提取條件提取活性成分。

提取液的抑菌實(shí)驗(yàn):用無(wú)菌移液管向培養(yǎng)皿平板中分別加入0.5mL菌懸液,用L型玻棒涂布均勻,按編號(hào)位置將準(zhǔn)備好的含提取液的藥敏紙片等距放入含菌平板,同時(shí)以四環(huán)素作對(duì)照。細(xì)菌在37℃條件下恒溫培養(yǎng)24h,真菌在27℃條件下恒溫培養(yǎng)48h,測(cè)定濾紙抑菌圈的大小,比較抑菌效果。

魚腥草揮發(fā)油抗病毒作用研究:運(yùn)用微量血凝試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)流感病毒增殖的抑制作用。

2 結(jié)果

2.1 不同部位提取液抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果

利用提取的魚腥草葉、地上莖、地下莖抑菌活性成分,對(duì)供試菌種進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn),通過(guò)測(cè)量對(duì)經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的供試菌種生長(zhǎng)層產(chǎn)生抑菌圈直徑的大小,比較其抑菌活性的強(qiáng)弱,并與四環(huán)素做對(duì)照(表1)。

從表1可以看出,魚腥草葉、地上莖、地下莖的提取液均具有抑菌活性,但除釀酒酵母菌外均較四環(huán)素弱。其中地下莖提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、酵母菌的抑制作用最強(qiáng)分別達(dá)到15.03mm、13.26mm、14.65mm,葉的提取液對(duì)痢疾桿菌的抑制作用最強(qiáng),達(dá)到12.11mm。說(shuō)明魚腥草地下莖的提取液對(duì)革蘭氏陽(yáng)性、革蘭氏陰性致病菌及真菌的抑菌活性均較其它部位強(qiáng),而葉的提取液對(duì)致病力較強(qiáng)的革蘭氏陰性菌抑菌活性較強(qiáng)。

表1 魚腥草不同部位提取液抑菌圈直徑Tab.1 Diameter of inhibition zone by extract from different parts of Houttuynia Cordata (mm)

2.2 揮發(fā)油的抗流感病毒作用

運(yùn)用微量血凝試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)流感病毒增殖的抑制作用,測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 魚腥草不同部位提取液對(duì)流感病毒的抑制作用Tab.2 Inhibition effect on influenza virus by extract of different parts of Houttuynia cordata(mg?ml-1)

微量血凝試驗(yàn)表明,魚腥草不同部位的揮發(fā)油對(duì)流感病毒均有抑制作用,其中葉的提取液在藥物質(zhì)量濃度達(dá)31.25mg／ml時(shí)即能抑制病毒的增殖,表明葉中含有抑制病毒有效成分較多;葉和地下莖的提取液在藥物質(zhì)量濃度達(dá)250mg／ml時(shí)對(duì)流感病毒有4倍的抑制作用,表明葉和地下莖部分均含有足量能有效抑制流感病毒的成分,可作為入藥提取部位的首選。

3 討論

我國(guó)民間長(zhǎng)期以來(lái)也有將魚腥草地上和地下部分同時(shí)入藥的習(xí)慣。據(jù)《新編中藥志》[4],魚腥草揮發(fā)油是其關(guān)鍵藥用成分,主要包括:癸酞乙醛、甲基正壬酮、月桂烯、月桂醛、癸醛和癸酸等。有報(bào)道顯示癸酞乙醛和甲基正壬酮在各器官中的含量比較一致。這可能是魚腥草地上地下部分入藥均具有一致功效的主要原因。此外,單萜成分組成及總含量在魚腥草各器官(或者以地上和地下部分計(jì))中均比較一致,而這些單萜成分多數(shù)具有抑菌消炎、止咳平喘等功效。目前魚腥草注射液的生產(chǎn)是采用魚腥草地上部分水蒸氣蒸餾液的二次飽和芳香水,而本研究按此法對(duì)葉、地上莖、地下莖分別進(jìn)行提取,并選取不同類型常見細(xì)菌和病毒的代表作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象:革蘭氏陽(yáng)性菌中選取金黃色葡萄球菌,革蘭氏陰性菌中選取大腸桿菌及致病力較強(qiáng)的痢疾桿菌,真菌中選取釀酒酵母菌,病毒中選取A型流感病毒株。結(jié)果顯示,地下莖部分除對(duì)較強(qiáng)致病力的痢疾桿菌抑菌作用稍弱外,對(duì)常見外部及內(nèi)源性感染細(xì)菌及流感病毒均有較強(qiáng)的抑制作用,提示其可作為有效部分入藥,與其他藥理作用相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[5-6]。因魚腥草地上和地下部分揮發(fā)油化學(xué)成分較復(fù)雜,且含量不盡不同,飽和芳香水中溶解的各種成分的比例也有一定差異。所以為確保用藥質(zhì)量的穩(wěn)定,仍建議將其地上與地下部分按一定比例搭配使用。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明,魚腥草葉、地上莖、地下莖各部位均具有一定抑菌和抗病毒活性,其中地下莖部分除對(duì)較強(qiáng)致病力的痢疾桿菌抑菌作用稍弱外,對(duì)常見外部及內(nèi)源性感染細(xì)菌及流感病毒均有較強(qiáng)的抑制作用,提示其可作為有效部分入藥,應(yīng)充分加以利用。但天然魚腥草揮發(fā)油成分復(fù)雜,有必要進(jìn)一步逐一分析這些成分的藥理作用,其抗菌抗病毒組分的分離、提純和鑒定及抗性機(jī)理有待今后進(jìn)一步深入研究。

[1]姚森,周玖瑤.魚腥草的藥理與臨床應(yīng)用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(1):237-240.

[2]陳慶華,鄒秀麗,李蕓瑛,等.魚腥草營(yíng)養(yǎng)成分的分析[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(5):992-993.

[3]黃春燕,吳衛(wèi),鄭有良.魚腥草不同部位揮發(fā)油化學(xué)成分的比較[J].藥物分析雜志,2007,27(1):40-44.

[4]肖培根.新編中藥志[M].北京,化學(xué)工業(yè)出版社,2002.

[5]孟江,和殿峰,周毅生,等.魚腥草不同提取部位藥理活性的比較研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(5):1050-1051.

[6]和殿峰.魚腥草的藥理研究進(jìn)展與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志,2008,8(22):5520-5521.