對(duì)HPLC法測(cè)定格列吡嗪片中含量及含量均勻度流動(dòng)相的改進(jìn)

閆韶華

河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所（466000）

格列吡嗪片為第二代磺酰脲類抗糖尿病藥，適用于經(jīng)飲食控制及體育鍛煉2～3個(gè)月療效不滿意的輕、中度2型糖尿病患者，這類糖尿病患者的胰島β細(xì)胞需有一定的分泌胰島素的功能，且無急性并發(fā)癥，無嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥。國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]采用HPLC法測(cè)定含量及含量均勻度，本文采用HPLC法，通過對(duì)流動(dòng)相的改進(jìn)，使格列吡嗪片的檢驗(yàn)方法更加合理，準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，精密度高，可用于含量及含量均勻度的測(cè)定。

1 儀器與試藥

LC-1200型高效液相色譜儀（安捷倫公司生產(chǎn)），VWD型紫外檢測(cè)器，Agilent化學(xué)工作站，普利賽斯電子分析天平。格列吡嗪對(duì)照品（批號(hào)：100281-200602，中國(guó)藥品生物制品檢定所），格列吡嗪片（瑞陽制藥有限公司、輝瑞藥業(yè)有限公司），甲醇、乙腈均為MERCK牌色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：AgilentlC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液（用2.0mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.00±0.05）-乙腈（45∶55∶10）；檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm；流速：0.8mL/min；柱溫：室溫。理論塔板數(shù)不低于2000；分離度＞1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

精密稱取格列吡嗪對(duì)照品，加甲醇溶解后并稀釋制成每mL中含格列吡嗪0.5mg的溶液，搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1.5、2.0、2.5、3.0、4.0mL分別置于25mL容量瓶中，加甲醇10mL，再用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 線性關(guān)系考察

精密稱取格列吡嗪對(duì)照品0.0264g，按2.2.1項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，取10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖（圖1），以峰面積Y對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣量（μg/mL）作線性回歸。結(jié)果回歸方程（n=5）為：Y=45.497X+677.92，r=0.9996；線性范圍為：31.68μg/mL-84.48μg/mL。

2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品適量（約相當(dāng)于格列吡嗪5mg）3份，精密稱定，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法，測(cè)定格列吡嗪片的含量，RSD為0.62%。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

配制一份供試品溶液，室溫下在0、2、4、6、8h測(cè)定，結(jié)果表明，本品的供試品溶液在室溫8h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD=0.70%，n=5。

2.5 精密度試驗(yàn)

取線性關(guān)系考察中格列吡嗪濃度為52.80μg/mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果RSD為1.02%。

2.6 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品適量（約相當(dāng)于格列吡嗪5mg）5份，分別置于100mL容量瓶中，加甲醇50mL，超聲處理15min使格列吡嗪溶解，用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL于25mL容量瓶中，分別精密加入格列吡嗪對(duì)照品儲(chǔ)備液1.00mL，加0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液稀釋至刻度，照樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，結(jié)果見表1。2.7 樣品含量的測(cè)定

表1 回收率測(cè)定結(jié)果表（n=5）

圖1 -1 對(duì)照品

圖1 -2 樣品

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)格列吡嗪5mg），置于100mL容量瓶中，加甲醇50mL，超聲處理15min使格列吡嗪溶解，加0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，測(cè)得結(jié)果與國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]方法比較，結(jié)果見表2。

表2 格列吡嗪片含量及含量均勻度測(cè)定結(jié)果表（n=2）

2.8 樣品含量均勻度的測(cè)定

取本品1片，置于50mL容量瓶中，加甲醇25mL，超聲處理15min，加0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，按本文色譜條件，精密量取續(xù)濾液20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表2。

3 討 論

3.1 流動(dòng)相的選擇

采用國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]方法的流動(dòng)相，高效液相儀的柱壓不穩(wěn)定，基線不平穩(wěn)，保留時(shí)間長(zhǎng)，出峰時(shí)間慢，通過加入乙腈提高了極性，使出峰時(shí)間縮短了一倍，且柱壓保持穩(wěn)定，峰面積或峰高重現(xiàn)性好，偏差較小。

3.2 由于流動(dòng)相含有鹽成分，可以先把流動(dòng)相混合，放置30min后，再用0.22μm的濾膜過濾，這樣可以使基線更平穩(wěn)。

3.3 本法與《中國(guó)藥典》2005年版增補(bǔ)本相比較，二者結(jié)果無顯著性差別，為藥品標(biāo)準(zhǔn)的提高，保證藥品質(zhì)量提供了一定的參考。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2005年版增補(bǔ)本[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:301.