利用氣相色譜檢測(cè)黃瓜果實(shí)中霜霉威的殘留量

馬佰慧，秦志偉，譚行之

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，黑龍江哈爾濱，150030）

黃瓜霜霉病是黃瓜生產(chǎn)中的主要病害之一，其來(lái)勢(shì)猛、傳播快、為害重，能在1～2周內(nèi)使植株大部分葉片枯死，造成嚴(yán)重減產(chǎn)，以致絕收[1]。為了防治霜霉病，在生產(chǎn)上需使用大量農(nóng)藥，不僅提高了生產(chǎn)成本，也易造成農(nóng)殘量超標(biāo)，為害消費(fèi)者健康。長(zhǎng)期食用受污染蔬菜，是導(dǎo)致癌癥、動(dòng)脈硬化、心血管病、胎兒畸形、死胎、早夭、早衰等疾病的重要原因。霜霉威（Propamocarb），是國(guó)內(nèi)抑制霜霉病病害的主要噴灑類藥劑之一，能夠有效地抑制霜霉病的擴(kuò)散，目前在生產(chǎn)上已廣泛使用，因而選擇一種快捷的方法定量分析黃瓜內(nèi)霜霉威殘留量尤為重要[2，3]。本試驗(yàn)的目的就是建立一種快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的黃瓜果實(shí)霜霉威殘留量的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

①試驗(yàn)樣品 供試材料D0313（腌漬型）、D0351（腌漬型）、D0328-6（歐洲鮮用型）、北進(jìn)（華北型）、D9320-2（華南型）均是經(jīng)過(guò)多代自交選育的自交系，由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院黃瓜育種研究室提供。

②儀器設(shè)備 島津GC-2010氣相色譜儀；島津 Rtx-1 （30 m×0.25 mm×0.25 μm）色譜柱；AOC-20i自動(dòng)進(jìn)樣器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；DY89-Ⅰ型高速玻璃均質(zhì)器；Philips HR2860高速組織搗碎機(jī)，硅烷化白色擔(dān)體玻璃層析柱（20 mm×20 cm），250 mL分液漏斗。

③試劑 丙酮（分析純），乙醚（分析純），甲醇（色譜純），購(gòu)自天津市化學(xué)試劑六廠；霜霉威標(biāo)準(zhǔn)品（≥99.0%）250 mg原藥（由美國(guó)Sigma公司提供，貨號(hào)45638）；霜霉威 （由黑龍江強(qiáng)爾生化技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司提供）；氯化鈉，無(wú)水硫酸鈉（天津永大化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

①農(nóng)藥噴施 試驗(yàn)在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)設(shè)施園藝中心進(jìn)行。選取霜霉威400倍液噴灑，共噴藥3次，第1次在黃瓜植株長(zhǎng)出根瓜時(shí)進(jìn)行噴灑，每隔7 d 1次，最后一次噴藥后間隔7 d取樣[4]。供試材料采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3次重復(fù)。采用立架式單蔓栽培，其他田間管理同一般黃瓜栽培。

②色譜條件 色譜柱：島津 Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）毛細(xì)色譜柱；檢測(cè)器：FID；載氣（N2）：30 mL/min；空氣：400 mL/min；氫氣：40 mL/min；程序升溫：70℃持續(xù) 3 min，30℃/min升溫至 230℃，230℃持續(xù)10 min；進(jìn)樣口溫度：260℃；檢測(cè)器溫度：290℃；恒壓；不分流；進(jìn)樣量 1 μL。

③配制標(biāo)準(zhǔn)溶液 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取10 mg霜霉威標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，該溶液濃度為0.1 mg/mL。吸取儲(chǔ)備液10 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL作為標(biāo)準(zhǔn)中間液，該溶液濃度為10 μL/mL。標(biāo)準(zhǔn)工作液分別取標(biāo)準(zhǔn)中間液 0.01 mL，0.02 mL，0.1 mL，0.5 mL，1 mL和5 mL于5個(gè)100 mL容量瓶中，甲醇定容至濃度分別為 0.01 μL/mL，0.02 μL/mL，0.1 μL/mL，0.5 μL/mL，1.0 μL/mL 和 5 μL/mL。

④標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限 按上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定得到6個(gè)霜霉威標(biāo)準(zhǔn)溶液的氣相色譜圖，見(jiàn)圖1。以標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，得到霜霉威的標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系，在濃度范圍0.01～5 μL/mL內(nèi)線性方程為y=1 534.7+15 333.9x，線性相關(guān)系數(shù)為0.994，本方法的最小檢出限為0.01 μL/mL，表明本方法可以對(duì)霜霉威進(jìn)行準(zhǔn)確定性與定量分析。

圖1 1.0 μL/mL霜霉威標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜

表1 5個(gè)黃瓜品種的霜霉威殘留量

⑤樣品溶液制備 a.提取與凈化。稱取待測(cè)成熟商品黃瓜果實(shí)500 g，在組織搗碎機(jī)中搗碎，稱取25.0 g，加入 80 mL 丙酮∶水為 7∶1（V/V）混合液，高速勻質(zhì)器中勻質(zhì)5 min，抽濾，濾渣用丙酮∶水為7∶1（V/V）混合液洗滌后再重復(fù)上述操作，合并濾液在45℃以下濃縮至約40 mL。

移入預(yù)先注入50 mL乙醚和5 g氯化鈉的250 mL的分液漏斗中，震蕩，靜置，下層水相移入200 mL三角瓶中，上層有機(jī)相移入250 mL三角瓶中。水相中加入50 mL乙醚，按上述操作重復(fù)2次，合并乙醚層置于上述250 mL三角瓶中。置于層析柱中（內(nèi)置約2 cm無(wú)水硫酸鈉）脫水。

b.濃縮。65℃用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至近干，用甲醇定容至1 mmol/L，待上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品檢測(cè)分析

分別對(duì)5種類型的黃瓜品種進(jìn)行分析，其中兩種的色譜分析結(jié)果如圖2，圖3，表1所示。

2.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

在空白黃瓜樣品中，分別添加濃度為0.1 μL/mL、1.0 μL/mL、5.0 μL/mL 的霜霉威標(biāo)準(zhǔn)溶液， 每個(gè)濃度作3次重復(fù)。其結(jié)果見(jiàn)表2。

試驗(yàn)結(jié)果表明，霜霉威在黃瓜中的添加回收率為85%～94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是在1%～2%，可以滿足殘留量定量檢測(cè)的要求[5]。

表2 黃瓜中不同濃度霜霉威的添加回收率

圖2 D0351氣相色譜

圖3 D9320-2樣品氣相色譜

3 討論

利用氣相色譜FID檢測(cè)器能夠有效地分析不同黃瓜的霜霉威殘留量。減少霜霉威的損耗、精確檢測(cè)霜霉威的殘留量是分析的關(guān)鍵。近幾年有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，也可先用酸堿法對(duì)霜霉威進(jìn)行處理后再進(jìn)行分析[6]。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本文所用的檢測(cè)方法，分離度好、最低檢出限、回收率、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)殘分析的要求。

根據(jù)結(jié)果顯示，D9320-2、北進(jìn)等華南型、華北型鮮用黃瓜的霜霉威農(nóng)殘量相對(duì)較高，D0351等腌漬型黃瓜的霜霉威農(nóng)殘量則相對(duì)較低，這驗(yàn)證了本教研室劉芳芳[7]的檢測(cè)結(jié)果。研究發(fā)現(xiàn)，相同的噴灑條件與種植條件下，瓜葉面積大、主莖粗的華南、華北型黃瓜霜霉威農(nóng)殘量比D0351等腌漬型黃瓜的農(nóng)殘量高了十幾倍。這說(shuō)明不同生態(tài)類型的黃瓜種質(zhì)，殘留量的高低明顯不同。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)對(duì)黃瓜的霜霉威殘留量進(jìn)行研究，采用島津 GC-2010 氣相色譜儀，Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）石英毛細(xì)管柱對(duì)黃瓜中霜霉威的含量進(jìn)行了測(cè)定，在10.800 min左右出峰，且分離度好，回收率、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥分析的要求。節(jié)省了樣品的檢測(cè)時(shí)間，是一種快速檢測(cè)黃瓜中霜霉威農(nóng)藥殘留有效的新方法。

[1]高利，龐金安.黃瓜主要病害抗性遺傳研究進(jìn)展[J].中國(guó)蔬菜，2004（1）：63-66.

[2]華小梅，單正軍.我國(guó)農(nóng)藥的生產(chǎn)，使用狀況及其污染環(huán)境因子分析[J].環(huán)境科學(xué)進(jìn)展，1996，4（2）：33-44.

[3]黃健坤，戚佩坤.廣州地區(qū)黃瓜疫病病原菌的鑒定及防治研究[J].華南農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1982，3（2）：36-43.

[4]趙為武.農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留問(wèn)題及治理對(duì)策[J].植物醫(yī)生，2001，14（3）：10-13.

[5]富恩承.出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本規(guī)定[S].SN/T0001-1995.

[6]劉偉，吳文君，于福利，等.霜霉威鹽酸鹽的分析方法[J].農(nóng)藥分析，2009，48（3）：193-196.

[7]劉芳芳.黃瓜種質(zhì)資源低農(nóng)藥殘留性評(píng)價(jià)[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.